I gliomi maligni costituiscono un gruppo eterogeneo di neoplasie gliali altamente infiltrative con caratteristiche cliniche e molecolari distinte. Gli xenoinnesti ortotopici primari ricapitolano le caratteristiche istopatologiche e molecolari dei sottotipi di glioma maligni nei modelli animali preclinici.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Gli xenoinnesti glioma ortotopici primari ricapitolano la crescita infiltrativa e la mutazione isocitrato deidrogenasi I
In questo articolo
Sommario
Abstract
I gliomi maligni costituiscono un gruppo eterogeneo di neoplasie gliali altamente infiltrative con caratteristiche cliniche e molecolari distinte. Gli xenoinnesti ortotopici primari ricapitolano le caratteristiche istopatologiche e molecolari dei sottotipi di glioma maligni nei modelli animali preclinici. Per modellare i gliomi maligni di grado III e IV dell'OMS nei test di trapianto, le cellule tumorali umane vengono xenografate in un sito ortotopico, il cervello, di topi immunocompromessi. A differenza degli xenoinnesti secondari che utilizzano cellule tumorali coltivate, le cellule glioma umane vengono dissociate dagli esemplari resected e trapiantate senza passaggio preventivo nella coltura tissutale per generare xenografti primari. La procedura in questo rapporto descrive in dettaglio la preparazione del campione tumorale, il trapianto intracraniale in topi immunocomprosi compromessi, il monitoraggio per l'innesto tumorale e la raccolta del tumore per il successivo passaggio negli animali riceventi o l'analisi. La preparazione delle cellule tumorali richiede 2 ore e la procedura chirurgica richiede 20 min / animale.
Introduzione
I gliomi maligni sono tumori gliali primari del sistema nervoso centrale che si verificano nel cervello e occasionalmente nel midollo spinale. I gliomi sono classificati dall'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) in base alla somiglianza istologica con astrociti, oligodendrociti o cellule ependimali e quindi classificati numericamente (da I a IV) per caratteristiche patologiche di malignità. I sottotipi istologici più comuni sono astrocitomi, oligodendrogliomi e oligoastrocitomi misti. I gliomi maligni che comprendono i gradi da II a IV dell'OMS sono caratterizzati da crescita invasiva e recalcitranza alle terapie attuali. Ogni anno negli Stati Uniti, a circa 15.....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
1. Preparazione della sospensione delle cellule tumorali
Nota: Sono necessarie adeguate approvazioni istituzionali per l'uso di materiale paziente e animali per stabilire e mantenere gli xenografti di glioma ortotopici primari. Al Vanderbilt University Medical Center, il materiale tumorale reinsediato che è superiore a quello richiesto per scopi diagnostici viene raccolto con il consenso del paziente per un deposito di tessuti di ricerca. I campioni sono etichettati con un numero di database REDcap randomizzato a 5 cifre e tutti gli identificatori specifici del paziente vengono rimossi. Il database REDcap contiene dati clini....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Le cellule di glioma dissociate vengono trapiantate direttamente nel cervello di topi immunocompromessi per ottenere linee primarie di xenograft ortotopico. Ad ogni campione tumorale viene assegnato un numero randomizzato prima del trapianto, come parte del processo di deidentificazione per rimuovere le informazioni sanitarie protette. A tale scopo utilizziamo un numero di database REDcap a 5 cifre. La figura 1 illustra il processo e la nomenclatura per stabilire una linea di xenograft da un glioblastoma.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Linee cellulari coltivate, xenografti e topi geneticamente modificati sono i metodi più comuni per modellare i gliomi e ci sono benefici e limitazioni distinti per ogni sistemamodello 3,13,14. I benefici rilevanti degli xenografti di glioma ortotopico primario includono la crescita infiltrativa che caratterizza i gliomi diffusi e la ritenzione di alterazioni genetiche e importanti meccanismi di segnalazione che possono essere estremamente difficili da mantenere nelle cellule di glioma coltivate. Ad esempio,
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Siamo particolarmente in debito con i pazienti del Vanderbilt University Medical Center che hanno fornito materiale di ricerca inestimabile per la Molecular Neurosurgical Tissue Bank. Ringraziamo coloro che hanno fondato e mantengono la Tissue Bank, Reid C. Thompson MD (principal investigator), Cherryl Kinnard RN (infermiere di ricerca) e Larry A. Pierce MS (manager). I servizi istologici sono stati eseguiti, in parte, dal Vanderbilt University Medical Center (VUMC) Translational Pathology Shared Resource (supportato dal premio 5P30 CA068485 al Vanderbilt-Ingram Cancer Center). Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni a MKC da parte dei fondi di sviluppo NINDS (....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Life Technologies | 14040-133 | |
| Sistema di dissociazione della papaina | Worthington Biochemical Corp. | ||
| Soluzione di blu di tripano 0,4% | Life Technologies | 15250061 | |
| Ketamina HCl | Ottenuto da farmacia istituzionale o azienda | ||
| Xilazina HCl | |||
| Ketoprofene | |||
| Unguento oftalmico | |||
| Iodio povidone | Fisher Scientific | 190061617 | |
| Mezzo di crioconservazione e integratore per la proliferazione | StemCell Technologies | 05751 | |
| 0,2% Sale sodico di eparina in PBS | StemCell Technologies | 07980 | < p> |
| Penicillina-streptomicina | Life Technologies | 15140-122 | |
| Dimetil solfossido | Sigma-Aldrich | D6250-5X10ML | |
| NOD. Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ topi | The Jackson Laboratory | 005557 | NSG topi |
| Anticorpo anti-vimentina umana | Dako | M7020 | Utilizzare da 1:200 a 1:800 |
| < p>Anticorpo umano IDH1 R132H | Dianova | DIA-H09 | Uso da 1:100 a 1:400 |
| Centrifuga con rotore a secchiello oscillante | |||
| >Pipettatore con controllo della velocità di dispensazione | |||
| Emocitometro monouso | Fisher Scientific | 22-600-100 | |
| Guanti chirurgici sterili | Fisher Scientific | 11-388128 | |
| Camice monouso | Fisher Scientific | 18-567 | |
| Surgical maschera | Fisher Scientific | 19-120-1256 | |
| Siringa per tubercolina | BD | p>305620 | |
| Cuscinetti imbevuti di alcol | Fisher Scientific | 22-246-073 | |
| Bilancia elettronica portatile | Fisher Scientifico | 01-919-33 | |
| Zoom stereomicroscopio | |||
| Tagliacapelli chirurgico | Stoelting | 51465 | < |
| p>Manico per bisturi | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| Lame per bisturi, #10 | |||
| Strumento stereotassico | Stoelting | 51730 | |
| Trapano ad alta velocità | Stoelting | 51449 | |
| Punta da trapano, 0,6 mm | 514552 | ||
| Siringa Hamilton | Hamilton | 80336 | |
| Autoclip, 9 mm | BD | p>427630 | |
| Cuscinetto scaldavivande per acqua circolante | Kent Scientific | TP-700 TP-1215EA | |
| Sterilizzatore a secco a cordone caldo | Kent Scientific | INS300850 | |
| Forbici chirurgiche | Fine Science Tools | 14101-14 | |
| Forbici fini | Fine Science Tools | 14094-11 | |
| Forbici a molla | Fine Science Tools | 15018-10 | |
| Dumont pincipe | Fine Science Tools | 11251-30 | |
| Spatole semimicro | Fisher Scientific | 14374 | |
| Matrice per affettare cervelli di topo | Zivic Instruments | BSMAS002-1 | |
| Fiale per la conservazione criogenica | Fisher Scientific | 12-567-501 |
Riferimenti
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. 84, 1424-1431 (2001).
- Witt Hamer, D. e, C, P., et al.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
Esplora altri articoli
