Cortisolo (CORT) si accumula nel fusto del pelo crescente di esseri umani e primati non umani. Descriviamo metodi per l'estrazione e l'analisi dei capelli CORT con alta precisione e sensibilità. Misura di capelli CORT è particolarmente adatto per la valutazione dello stress cronico per periodi di settimane o mesi.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Estrazione e analisi di cortisolo da umani e Monkey Capelli
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il cortisolo, ormone dello stress (CORT) sta lentamente incorporato nel fusto del capello crescente di esseri umani, primati non umani, e altri mammiferi. Abbiamo sviluppato e validato un metodo per l'estrazione e l'analisi CORT da capelli scimmia rhesus e successivamente adattato questo metodo per l'utilizzo con i capelli del cuoio capelluto umano. In contrasto CORT "campioni point" ottenuti dal plasma o saliva, capelli CORT fornisce una misura integrata di attività del sistema ipotalamo-ipofisi-surrene (HPA), e quindi lo stress fisiologico, durante il periodo di ormone incorporazione. Perché i capelli del cuoio capelluto umano cresce ad un tasso medio di 1 cm / mese, i livelli di CORT ottenuti dai segmenti di capelli diversi cm di lunghezza possono potenzialmente servire come biomarcatore di stress sperimentato un certo numero di mesi.
Nel nostro metodo, ciascun campione di capelli viene prima lavato due volte in isopropanolo per rimuovere eventuali CORT dall'esterno del fusto del capello che è stato depositato dal sudore o sebo. Dopo l'essiccazione, lacampione viene macinato in polvere finissima per rompere matrice proteica del capello e aumentare la superficie per l'estrazione. CORT dall'interno del fusto del capello è estratto in metanolo, il metanolo viene evaporato, e l'estratto viene ricostituito in tampone di saggio. Estratto CORT, con norme e controlli di qualità, viene poi analizzato mediante un enzima disponibile in commercio immunodosaggio sensibile e specifico (EIA) kit. Lettura della VIA viene convertito in pg CORT per mg peso dei capelli in polvere. Questo metodo è stato utilizzato nel nostro laboratorio per analizzare i capelli CORT negli esseri umani, diverse specie di macachi, uistitì, cani e orsi polari. Molti studi sia dal nostro laboratorio e da altri gruppi di ricerca hanno dimostrato la vasta applicabilità di capelli CORT per la valutazione dell'esposizione stress cronico in naturale così come le impostazioni di laboratorio.
Introduzione
Misurazione di CORT nel plasma, saliva, o occasionalmente in urina o feci è stato usato come indice di stress fisiologico Dalla scoperta di Selye del ruolo dell'asse HPA stress 1. Sebbene numerosi articoli sono stati pubblicati relative attività HPA a situazioni di stress acuto, il campo è stato ostacolato dalla mancanza di un indice semplice e affidabile di stress fisiologico cronico. Questo problema si verifica perché al plasma e saliva sia resa "punto" stime di attività HPA che sono soggette a variazione circadiana e possono essere confusi da disturbi ambientali. Campioni urinari e fecali producono misure di CORT e / o metaboliti che si estendono su....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
1. Raccolta dei campioni e conservazione
- Capelli umani
- Fissare l'intera lunghezza dei capelli da campionare (fino a una matita larghezza di diametro) con un elastico o clip. Tagli capelli vicino al cuoio capelluto il più possibile (facendo attenzione a non intaccare la pelle), con un paio di forbici pulite. Nota: L'area di campionamento standard è il vertice posteriore del cranio.
- Alcuni ricercatori hanno segnalato una diminuzione dei livelli di CORT capelli umani con la distanza dal cuoio capelluto 6, che può essere dovuto a dilavamenti da ripetute esposizioni all'acqua e shampoo 7 (anche se vedi Manens....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
La Figura 1 mostra la stampa da una serie rappresentativa di campioni di capelli umani (maschi adulti e soggetti umani femmine) trattati con il metodo 2 macinazione ed estrazione. Il software è stato utilizzato per generare l'uscita dei dati e per adattarsi a 4 parametri curva sigmoidale agli standard CORT (Figura 2). I tra-ben CV di questa piastra variava 0,01-5,73%, con una media di CV intra-saggio del 1,34%. Il CV inter-assay determinato utilizzando i valori di QC da nove recenti.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
La procedura capelli CORT sopra descritto è semplice da eseguire, è relativamente poco costoso, fa uso di prodotti chimici facilmente disponibili, reagenti e materiali di consumo, e richiede attrezzature che, con una sola eccezione, è probabile che sia presente in un tipico laboratorio di analisi. L'eccezione è un apparecchio di macinazione come un mulino a sfere o mini-beadbeater. Notiamo che alcuni gruppi di ricerca tritare campioni di capelli in piccoli frammenti di circa 1 millimetro di lunghezza 12, .......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse da dichiarare.
Ringraziamenti
Ringraziamo Kymberlee O'Brien, Celia Moore, e Edward Tronick (Dipartimento di Psicologia, University of Massachusetts, Boston) per fornire i campioni di capelli umani analizzati in questo studio, e Stephen Suomi e Amanda Dettmer (Laboratorio di Etologia Comparativa, NICHD) per fornire i campioni di capelli scimmia rhesus. Sviluppo iniziale e l'uso continuato di questo metodo è stato sostenuto da NIH RR11122 MAN
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Isopropanolo di grado HPLC | Fisher | A451 | |
| Metanolo di grado HPLC | Fisher | A452 | |
| Kit per il dosaggio del cortisolo salivare | 1-3002 | Vedere il foglietto illustrativo del kit del produttore per informazioni sulla sensibilità e la specificità del test | |
| 15 ml di provette da centrifuga in polipropilene con tappo a vite | Max Scientific | 10-9151 | |
| 1,5 ml Provette per microcentrifuga Safe-Lock | Fisher | 05-402-25 | |
| Provette per microcentrifuga Safe-Lock da 2,0 ml | Fisher | 05-402-7 | |
| Microfiale rinforzate XXTuff da 2,0 ml | BioSpec | 330TX | Da utilizzare con mini-beadbeater |
| Perline in acciaio cromato da 3,2 mm BioSpec | 11079132c | Utilizzare con mini-beadbeater | |
| Giare di macinazione in acciaio inox da 10 ml | Retsch | 02.462.0061 | Utilizzo con vibromulino |
| Sfere di macinazione in acciaio inox da 12 mm | Retsch | 05.368.0037 | Utilizzo con vibromulino |
| Cartuccia a carbone attivo | Savant | Fisher DTK120R | Utilizzo con trappola chimica Savant |
| Rotatore per provette da centrifuga da 15 ml | Fisher | S02135 | |
| Rotatore per provette da microcentrifuga | Fisher | NC9854190 | |
| Centrifuga da banco per provette per microcentrifuga | Fisher | 13-100-675 | |
| MM 200 vibromulino | Retsch | 20.746.0001 | |
| Mini-Beadbeater 16 | BioSpec | 607 | |
| Savant DNA Speedvac | Fisher | DNA120-115 | |
| Savant trappola di vapore refrigerata | Fisher | RVT400-115 | |
| Savant trappola chimica | Fisher | SCT120 | Alternativa alla trappola di vapore refrigerata |
| Lettore di micropiastre Lavapiastre | |||
| Miscelatore | |||
| Pipettatore | |||
| Bilancia |
Riferimenti
- Selye, H. Stress and the general adaptation syndrome. Br. Med. J. 1 (4667), 1383-1392 (1950).
- Meyer, J. S., Novak, M. A. Minireview: Hair cortisol: A novel biomarker of hypothalamic- pituitary-adrenocortical activity. Endocrinology. 153, 4120-4127....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
