Descriviamo un protocollo per la destabilizzazione del menisco mediale (DMM) modello nei topi, uno strumento efficace per l'osteoartrite (OA) la ricerca. Inoltre, abbiamo dimostrato che la carenza di progranulincan esagerata sviluppo OA e progressione utilizzando questo modello, indicando che progranulin svolge un ruolo protettivo nella patogenesi di OA.
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Articolo metodologico
Istituzione di un modello chirurgicamente indotta nei topi per indagare il ruolo protettivo di progranulina in osteoartrite
In questo articolo
Sommario
Abstract
Destabilizzazione del menisco mediale (DMM), il modello è uno strumento importante per studiare i ruoli fisiopatologici di numerosi artrite molecole associate nella patogenesi dell'osteoartrosi (OA) in vivo. Tuttavia, il dettaglio, in particolare il protocollo visualizzato per la creazione di questo modello complicato nei topi, non è disponibile. Qui abbiamo approfittato di tipo selvatico e progranulin (PGRN) - / - mice come esempi di introdurre un protocollo per indurre il modello DMM nei topi, e confrontato l'insorgenza di OA in seguito all'istituzione di questo modello indotta chirurgicamente. Le operazioni eseguite su topi erano o operazione simulata, che ha appena aperto capsula articolare, o il funzionamento DMM, che ha tagliato il legamento menisco-tibiale e ha causato la destabilizzazione del menisco mediale. Artrosi gravità è stata valutata utilizzando test istologico (ad es safranina O colorazione), espressioni di geni OA-associati, la degradazione della cartilagine molecole della matrice extracellulare, e osteofiti formazione. Funzionamento DMM indotto successo OA iniziazione e la progressione sia di tipo selvatico e PGRN-/ - mice, e la perdita del fattore di crescita PGNR portato ad una più grave fenotipo OA in questo modello indotta chirurgicamente.
Introduzione
L'osteoartrite (OA), noto anche come l'artrite degenerativa, colpisce il 15% della popolazione mondiale e più di 46 milioni di persone negli Stati Uniti, ed è caratterizzata da sinovite, degenerazione della cartilagine, e la formazione di osteofiti 1. Può essere il risultato di una complessa interazione di fattori genetici, metabolici, biomeccanici e biochimici. I meccanismi alla base di OA continuare a sottrarsi alla comunità scientifica. Attualmente ci sono numerosi modelli animali che possono mimare la patogenesi dell'OA 2,3. È importante stabilire modelli animali nei topi a causa sia della disponibilità di vari topi geneticamente....
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Protocollo
Tutte le procedure chirurgiche relative agli animali devono essere approvati dalla cura degli animali e Comitato Etico della Istituzione locale, con uno sforzo fatto per ridurre al minimo il dolore e il disagio causato da un intervento chirurgico.
1. Preparazione
- Selezionare 8-12 settimane maschio C57BL / 6 topi con un peso corporeo di circa 25 g per la chirurgia.
- Anestetizzare gli animali mediante iniezione intraperitoneale di un cocktail contenente sia xilazina (5 mg / kg) e ketamina (40 mg / kg).
- Shave il ginocchio con rasoi, quindi chirurgicamente drappo l'animale e sterilizzare il sito chirurgico co....
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Risultati
Modello DMM è stato istituito con successo nei topi, e la carenza di PGRN esagerato sviluppo OA chirurgicamente indotto.
Operazioni fittizie e DMM (Figura 1) sono stati eseguiti in WT e PGRN-/ - mice. 8 settimane dopo l'operazione, i topi sono stati sacrificati, e safranina O colorazione è stata eseguita su sezioni di articolazioni del ginocchio, seguito da analisi statistica del punteggio artrite basata sulla istologia. Come mostrato in Figura 2.......
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Discussione
È stato riferito che il ceppo di topi è molto importante per il modello DMM induzione, come diversi ceppi di topi sono meno gravi di OA dopo DMM, con livello più alto nel ceppo 129/SvEv, seguita da C57BL6, 129/SvInJ e poi FVB / n 26. Una gran parte di transgeni sono stabiliti nei topi C57BL6, come PGRN-/ - mice che abbiamo usato in questo studio, che sono relativamente sensibili alla DMM. Tuttavia, se il transgene si riferiscono al ceppo insensibile come FVB / n topi, è necessario backcross questi topi con ce.......
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Dichiarazioni
Siamo qui dichiarare che non abbiamo alcun conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto in parte dal NIH borse di ricerca R01AR062207, R01AR061484, R56AI100901, K01AR053210, e una malattia mirata Research Grant da Rheumatology Research Foundation (a CJ Liu).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| N. 10 lame chirurgiche | Feather | 25-2976#10 | |
| 6-0 sutura | Applied Dental | WG-N53133 |
Riferimenti
- Herndon, J. H., Davidson, S. M., Apazidis, A. Recent socioeconomic trends in orthopaedic practice. J. Bone Joint Surg. Am. 83, 1097-1105 (2001).
- Johnson, K., et al. A stem cell-based approach to cartilage repair. Science. 336, 717-721 (2012).
- Yang, S., et al.
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Ristampe e permessi
