La raccolta del latte da modelli animali facilita varie strade di ricerca: la comprensione dell'immunità passiva, l'identificazione di agenti patogeni responsabili della trasmissione verticale e, attraverso l'uso di topi transgenici, anche la produzione commerciale di proteine presenti nel latte materno umano. Qui illustriamo un metodo semplice per la raccolta del latte nei topi e nel cervo muntjac di Reeves.
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Articolo metodologico
Metodi Latte di raccolta per topi e Reeves 'Muntjac
In questo articolo
Sommario
Abstract
I modelli animali sono comunemente utilizzati in tutti i laboratori di ricerca per realizzare ciò che normalmente sarebbe considerato poco pratico nell'ospite nativo di un agente patogeno. La raccolta del latte dagli animali offre agli scienziati l'opportunità di studiare molti aspetti della riproduzione, tra cui la trasmissione verticale, l'immunità passiva, la biologia della ghiandola mammaria e l'allattamento. Ottenere volumi adeguati di latte per questi studi è un compito impegnativo, soprattutto da modelli di piccoli animali. Qui illustriamo un metodo economico e facile per la raccolta del latte nei topi e nel cervo muntjac di Reeves che non richiede attrezzature specializzate o una formazione approfondita. Questo particolare metodo richiede due ricercatori: uno per estrarre il latte e stabilizzare l'animale, e uno per raccogliere il latte in un contenitore appropriato da un modello di Muntjac o di topo. Il modello murino richiede anche l'uso di un pipettatore P-200 e dei corrispondenti puntali per pipette. Sebbene questo metodo sia a basso costo e relativamente facile da eseguire, i ricercatori dovrebbero essere informati che l'anestetizzazione dell'animale è necessaria per una raccolta ottimale del latte.
Introduzione
Modelli animali forniscono informazioni patologia malattia che non può essere acquisita mediante analisi in vitro. Per fornire i risultati più efficaci, è importante utilizzare un modello animale che è strettamente correlata alla malattia e specie di interesse. Ad esempio, la Reeves 'muntjac (Muntiacus reevesi), un piccolo cervo asiatico 1,2, e topi transgenici che esprimono la proteina prionica cervide (CerTgPrP) 3 sono modelli animali utili per le specie di cervidi. Entrambe le specie sono polyestrous, che permette tutto l'anno di allevamento, e quindi una fonte costante per i tessuti e fluidi legate alla gravidanza p....
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Protocollo
1. Mouse mungitura protocollo
I metodi descritti in questo protocollo sono state approvate dal IACUC.
1. Separazione della diga di Offspring
- Selezionare la diga da mungere. Scegliere una diga con una cucciolata di 4 o più cuccioli che è 8-12 giorni dopo il parto per fornire il latte la massima raccolta, anche se la raccolta è possibile in qualsiasi momento punto di post parto fino a 21 giorni.
- Separare la diga dalla sua cucciolata di almeno 2 ore prima della mungitura.
Nota: Se una voglia di mungere più di una diga in un dato periodo di tempo, è accettabile per ospitare le dighe separa....
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Risultati
Mouse
Dai nostri esperimenti, abbiamo determinato che è possibile raccogliere circa 100-400 ml di latte da un topo di laboratorio, dipendenti da diverse variabili. Queste variabili includono 1) la quantità di tempo dedicato per la raccolta, 2) la dose di ossitocina somministrata, 3) quanti cuccioli la diga è attualmente infermieristica e 4) la quantità di tempo dopo il parto. I nostri studi hanno dimostrato che il rendimento massimo si ottiene quando le dighe sono separati d.......
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Discussione
Mouse
Ci sono diversi fattori da prendere in considerazione durante la raccolta del latte da un mouse, di cui 1) la quantità di tempo dedicato per la raccolta, 2) la dose di ossitocina somministrata, 3) quanti cuccioli la diga è attualmente infermieristica e 4) l'importo di tempo che è trascorso da quando parto al momento della raccolta. Utilizzando gli studi precedenti come linee guida, abbiamo deciso di ottimizzare le condizioni per la produzione di latte.
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questi esperimenti sono stati finanziati dalla sovvenzione NIH #RAI093634A. Esprimiamo immensa gratitudine a Jenny Powers, DVM, PhD, per la sua assistenza nella mungitura del Muntjac.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Materiali— Ketamina di topo | |||
| (KetaVed 100 mg/ml) (dose: 80-100 mg/kg) | MWI/Vedco | 011075 | |
| Xilazina (TranquiVed 100 mg/ml) (dose: 5-10 mg/kg) | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| Lubrificante oculare | MWI/Apexa | 701013 | |
| ossitocina (2 UI/kg) | Vet One | 501013 | |
| Materiali— Muntjac | |||
| Midazolam (1-2 mg/kg) | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | Facoltativo: il ricercatore può utilizzare Midazolam da solo o la combinazione BAM come anestetico |
| Butorphanol tartrato (Torbugesic) (0,45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrato (0,25 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomadina HCl (0,07 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Antipamezol cloridrato (Antisedan) (dose: 0,25 mg/kg) | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| Ossitocina (10 UI/kg) | Vet One | 501013 | |
| Equipment— Topo | |||
| P-200 Pipetman | Gilson F123601 | ||
| 200 μ l puntali per pipette | Light Labs | B-2004-SH | |
| siringhe da 1 ml | MWI | 005427 | |
| aghi da 27 G | MWI | 002031 | |
| Equipment— Muntjac | |||
| 15 ml tubi conici | VWR | 21008-918 | |
| 22 G aghi | MWI | 873 | |
| 3 ml siringhe luer lock | MWI | 001377 |
Riferimenti
- Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi (2004).
- Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59
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Ristampe e permessi
