Acuta cerebrale Trauma nei topi Seguito By longitudinale a due fotoni di imaging

Sommario

Trauma acuto cerebrale è una lesione grave che non ha alcun trattamento adeguato ad oggi. La microscopia multiphoton permette lo studio longitudinalmente il processo di sviluppo acuto trauma cerebrale e sondando strategie terapeutiche nei roditori. Due modelli di trauma cerebrale acuto studiato con in vivo a due fotoni di imaging del cervello sono dimostrate in questo protocollo.

Abstract

Anche se trauma cerebrale acuto spesso deriva da danni testa in diversi incidenti e colpisce una frazione consistente della popolazione, non vi è ancora alcun trattamento efficace per esso. Limiti dei modelli animali attualmente utilizzati impedire la comprensione del meccanismo patologia. La microscopia multiphoton permette di studiare cellule e tessuti all'interno cervelli animali intatti longitudinalmente in condizioni fisiologiche e patologiche. Qui, descriviamo due modelli di danno cerebrale acuto studiati per mezzo di due fotoni di imaging del comportamento delle cellule cerebrali in condizioni post-traumatiche. Una regione del cervello selezionata è ferito con un ago appuntito per produrre un trauma di larghezza controllato e profondità nel parenchima cerebrale. Il nostro metodo utilizza puntura stereotassica con un ago da siringa, che può essere combinato con l'applicazione simultanea della droga. Proponiamo che questo metodo può essere utilizzato come uno strumento avanzato per studiare i meccanismi cellulari di conseguenze fisiopatologiche di trauma acuto nel cervello dei mammiferi

Introduzione

Lesione cerebrale acuta è un problema rilevante di sanità pubblica, con alta incidenza di lesioni in incidenti automobilistici, cadute o aggressioni, e l'alta prevalenza di una successiva disabilità cronica. Approcci terapeutici per il trattamento di lesioni cerebrali rimangono del tutto sintomatico, limitando così l'efficacia del trattamento preospedaliero, chirurgica e critica. Questo rende l'impatto sociale ed economico delle lesioni cerebrali particolarmente grave. Per una serie di ragioni, la maggior parte degli studi clinici non hanno dimostrato un miglioramento nel recupero dopo lesione cerebrale utilizzando approcci terapeutici.

Protocollo

Tutte le procedure qui presentate sono state eseguite secondo la guida locale per la cura degli animali (La legge finlandese sulla sperimentazione animale 62/2006). Licenza animali (ESAVI/2857/04.10.03/2012) è stato ottenuto da autorità locali (ELÄINKOELAUTAKUNTA-ELLA). Topi adulti di 1-3 mesi di età, peso 24-38 g, sono stati tenuti in gabbie individuali nella struttura animale certificata dell'Università e ha fornito cibo e acqua ad libitum.

1. Brain Injury Imaging attraverso una finestra cranica

1. Anestetizzare gli animali e la preparazione del campo operatorio
   1. Anestetizzare topi mediante iniezione periton....

Risultati

Abbiamo ottimizzato due procedure operative: 1) finestra cranica cronica e 2) assottigliamento del cranio, per l'imaging cerebrale post-traumatico nei topi transgenici. Vista schematica dei preparati sperimentali è presentato nella figura 1. Puntura traumatica da ago in acciaio di 0,3 mm OD (30 G) viene applicata al pozzo perforato (Figura 1A). Una preparazione finestra del cranio successo permette l'imaging a profondità fino a 650 micron sotto la superficie piale (Figur.......

Discussione

Trauma cerebrale è un evento imprevedibile brusco. Qui, descriviamo il modello animale che riproduce uno spettro di alterazioni patologiche osservate nei pazienti umani dopo lesione cerebrale come neurodegenerazione, eliminazione di dendriti, edema cerebrale, cicatrice gliale, emorragie nella corteccia cerebrale focale accoppiato con emorragia subaracnoidea e aumentata permeabilità della barriera emato-encefalica. Per studiare la patogenesi primaria e secondaria, nonché il recupero dopo un trauma, questo modello pregiud.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Pinzetta muta 2A-sa, 115 mm	XYtronic	XY-2A-SA
30 G ½ in ago	BD	REF 304000
Trimmer per animali, macchina da barba	Aesculap	Isis GT420
Microscopio binoculare	Zeiss	Stemi 2000
Regolatore di temperatura biologica con termoforo in acciaio inox	Supertech	TMP-5b
Lama microchirurgica smussata	BD	REF 374769
Tubo in borosilicato con filamento	Sutter Instruments	BF120-69-10	Per la produzione di pipette in vetro
Carprofene	Pfizer	Rimadyl vet
Clorexidina digluconato	Sigma	C9394
Cemento dentale	DrguDent, Dentsply	REF 640 200 271
Desametasone	FaunaPharma	Rapidexon veterinario
Trapani monouso	Meisinger	HP 310 104 001 001 008
Dulbeco' s PBS 10x	Sigma	D1408
Dumont #5 pinze, 110 mm	FST	91150-20
Estrattore per microelettrodi Ealing	Ealing	50-2013	Estrattore verticale per la produzione di pipette in vetro
Unguento per gli occhi	Novartis	Viscotears
Foredom Drill control	Foredom	FM3545
Manipolo per micromotore Foredom	Foredom	MH-145
Piattaforma per anestesia gassosa per topi	Stoelting	50264	Assemblato su strumento stereotassico
Emostasi Collagene Spugna	Avitene, Ultrafoam BARD	Ref 1050050
Imaris	Bitplane
Ketamina	Intervet	Ketaminol vet
Mai Tai DeepSee laser	Spectra-Physics
Supporto in metallo	Pinza
, 105 mm	Aesculap	BD302R
Microfil	WPI	MF34G-5	Capillari di riempimento per micro siringhe
Olio minerale Microscopio	multifotone Sigma	M8410
	Siringa Olympus	FV1000MPE
NanoFil 10 μ l	WPI	NANOFIL	Siringa Hamilton
Tamponi in tessuto non tessuto 5 x 5	Molnlycke Health Care	Mesoft	Tamponi chirurgici Colla
poliacrilica	Henkel	Loctite 401
Vetrino coprioggetto rotondo in vetro			della microscopia elettronica
spessore 1,5
Strumento stereotassico per piccoli animali	David Kopf Instruments	900
Adattatore per topo e ratto neonatale	Stoelting	51625	Assemblato su strumento stereotassico.
Forbici per iride da studente, dritte 11,5 cm	FST	91460-11
Sulforhodamine 101	Sonde molecolari	S-359
UMP3 e controller per microsiringa Micro 4	WPI	UMP3-1	Microiniettore e controller
Xilazina	Bayer Health Care	Rompun veterinario

per micromedicazione Neurotar a scansione laser Scienze Pompa a microsiringa