Un test comportamentale semplice for Testing Funzione visiva in Xenopus laevis

Summary

Xenopus laevis girini preferiscono nuotare sul lato bianco di un / serbatoio bianco nero. Questo comportamento è guidato dalla loro visione. Sulla base di questo comportamento, vi presentiamo un semplice test per testare la funzione visiva dei girini.

Abstract

Misurazione della funzione visiva nei girini di rana, Xenopus laevis, consente lo screening per la cecità di animali vivi. La risposta optocinetico è una visione-based, un comportamento riflessivo che è stato osservato in tutti i vertebrati esaminati. Occhi girino sono piccole quindi la risposta vibrazione coda è stato usato come misura alternativa, che richiede un tecnico addestrato per registrare la risposta sottile. Abbiamo sviluppato un saggio comportamento alternativo basato sul fatto che girini preferiscono nuotare sul lato bianco di un serbatoio quando posto in una vasca con lati sia in bianco e nero. Il saggio qui presentato è un poco costoso, semplice alternativa che crea una risposta che può essere facilmente misurata. L'installazione consiste in un cavalletto, webcam e serbatoi di prova nidificati, facilmente reperibili nella maggior parte dei laboratori di Xenopus. Questo articolo include un filmato che mostra il comportamento dei girini, prima e dopo aver tagliato il nervo ottico. Al fine di testare la funzione di un occhio, includiamo anche rappresentantirisultati rappresentative di un girino in cui ogni occhio ha subito assotomia retinica in giorni consecutivi. Studi futuri potrebbero sviluppare una versione automatizzata di questo test per verificare la visione di molti girini in una volta.

Introduction

Xenopus laevis sono stati utilizzati come organismo modello per studiare la formazione dell'occhio. Gli occhi si sviluppano rapidamente, crescita verso la maturità in meno di una settimana per i geni di prova o percorsi che hanno un effetto sullo sviluppo visivo e la funzione. Per testare funzione visiva, la risposta optocinetico e optomotor è stato usato in zebrafish e girini Xenopus rispettivamente ^1,2. Perché gli occhi dei girini di Xenopus sono relativamente più piccolo di zebrafish, questo test richiede l'uso di attrezzature specializzate e personale addestrato per rilevare la coda-flip e movimenti oculari comportame....

Protocol

Animal Care

Il Xenopus laevis girini utilizzati in questo studio sono stati coltivati, allevati e trattati secondo le procedure approvate dal Upstate Medical University IACUC e la Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio.

1. Impostazione Pre-comportamento: Girini

1. Ottenere fecondati embrioni di Xenopus da una sorgente disponibile in commercio o in vitro fecondare ovociti, come descritto in precedenza ^6.
2. Posizionare blastula a neurali embrioni stadio piastra a 18 ˚ C in 60 millimetri piastre Petri contenenti 0,1 X. MMR [10 X Marc Modificato s....

Results

I rapporti precedenti hanno dimostrato che premetamorphic girini Xenopus preferiscono nuotare sul lato bianco di un / serbatoio bianco e nero chiamato questo test, sullo sfondo Preferenza colore Assay ³ Abbiamo modificato questo test per testare la funzione visiva di entrambi gli occhi di girini in meno di una settimana. In questo modo, i loro occhi possono essere raccolti per l'esame istologico.

Mostriamo qui come la risposta è dovuta a stimoli visivi. In Movie 1.......

Discussion

Riportiamo qui un semplice test comportamentale visione-guida che può essere facilmente eseguita in meno di una settimana da personale di laboratorio minimamente addestrato. Mentre altri test richiedono attrezzature specializzate e competenze in comportamento animale, questo test permette un rapido test per determinare la funzione visiva. Un altro test comportamentale, il saggio evitare di Visual, è stato sviluppato per determinare come la Tectum contribuisce alla percezione visiva in Xenopus ^10. Que.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Flex-Tank da 1/2 gallone con coperchio	eNasco	SB19271M	Dimensioni: 5-3/8" x 7" x 3-3/4"
Nastro
Carta
Grande giradischi a inoculazione	VWR	50809-022	Dimensioni: diametro 114,3 x H 76,2 mm (4 1/2  x  3")
Sottopiede Durasorb	VWR	82004-836	Dimensioni: 43,2 x 60,1 cm (17 x 24")
Kimwipe	Krackeler Scientific, Inc.	1945-34155-CS
Treppiede		Varie
fotocamere o webcam	iSight Apple	M8817LL/A	Buono per girini più grandi, ma quelli piccoli sono difficili da vedere
Computer portatile	Apple/PC	Vari	Abbiamo usato un MacBook da 13", 2 GHz Intel Core 2 Duo con MacOSX Lion 10.7.5
MiniDV handycam camcorder	SONY	DCR-HC42	Collegato tramite firewire al computer con un FireWire 400 alfa a 6 conduttori e 4 conduttori
Stazione Handycam	SONY	DCRA-C121	Può essere utilizzata per collegare firewire al
software QuickTime Player	della fotocamera Quicktime	Versione 10.1
26 G Ago (5/8" lunghezza)	VWR	BD305115
Dumont #5 Pinze	Fine Science Tools	11295-10
Monouso
Gentamicina solfato [50 mg/ml]	Fisher Scientific	17-528Z	Conservato presso RT
Sylgard 184 elastomero siliconico	Fisher Scientific	NC9644388
Instant ocean	Doctors Foster and Smith	CD-116528	Soluzione madre = 100 g/L conservato presso RT
Sodio fosfato bibasico	Sigma Aldrich	S0876	Soluzione madre = 0,4 M conservato presso RT
In vitro embrioni fecondati	eNasco	LM00490MX	100 embrioni/unità