Protocolli per la preparazione efficiente di campioni omogenei di acari, infestazione di piante sperimentali, e la valutazione del danno dell'impianto, come richiesto per gli studi di interazione pianta-parassita sono stati sviluppati.
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Articolo metodologico
Applicazione di due-macchiato Spider Mite
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il ragnetto due maculato, Tetranychus urticae, è un onnipresente erbivoro artropode polifago che si nutre di una notevole vasta gamma di specie, con più di 150 di valore economico. Si tratta di un parassita importante di colture in serra, specialmente in Solanacee e Cucurbitacee (ad esempio, pomodori, melanzane, peperoni, cetrioli, zucchine) e ornamentali serra (ad esempio, rose, crisantemi, garofani), colture annuali di campo (come il mais, cotone, soia e barbabietola da zucchero), e in colture perenni (erba medica, fragole, uva, agrumi, e susine) 1,2. Oltre al polyphagy estremo che rende un importante parassiti agricoli, T. urticae ha una tendenza a sviluppare resistenza ad una vasta gamma di insetticidi e acaricidi che sono usati per il suo controllo 3-7.
T. urticae è un ottimo organismo sperimentale, in quanto ha un ciclo vitale rapido (7 giorni a 27 ° C)e può essere facilmente mantenuta ad alta densità in laboratorio. Metodi per saggiare l'espressione genica (compresi ibridazione in situ e colorazione degli anticorpi) e per inattivare l'espressione del ragnetto geni endogeni utilizzando RNA interference sono stati sviluppati 8-10. Recentemente, l'intera sequenza del genoma di T. urticae è stata riportata, creando l'opportunità di sviluppare questo parassita erbivoro come organismo modello con risorse genomiche equivalenti che già esistono in alcune delle sue piante ospiti (Arabidopsis thaliana e il pomodoro Solanum lycopersicum) 11. Insieme, questi organismi modello potrebbero fornire approfondimenti basi molecolari delle interazioni pianta-parassiti.
Qui, un metodo efficiente per la raccolta rapida e semplice di un gran numero di acari femmina adulta, la loro applicazione su un host impianto sperimentale, e la valutazione del danno pianta causa alimentazione ragnetto sono descritti. Il protocollo presentato enAbles raccolta veloce ed efficiente di centinaia di persone, in qualsiasi stadio di sviluppo (uova, larve, ninfe, maschi adulti e femmine) che può essere utilizzata per la successiva applicazione sperimentale.
Introduzione
Interazione pianta-parassita è un argomento di grande importanza scientifica ed economica. È stato storicamente studiata utilizzando entrambe le piante coltivate (come pomodoro) e pianta modello, A. thaliana. In entrambi i casi, la suscettibilità della pianta erbivoro potrebbe essere misurata sia direttamente attraverso la valutazione degli impianti fenotipo dopo l'attacco di erbivori o indirettamente attraverso la valutazione delle prestazioni dei parassiti.
Misure dirette di pianta suscettibilità sono stati utilizzati precedentemente per un certo numero di specie di parassiti utilizzando una serie di metodi. Ad esempio, her....
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Protocollo
1. Manutenzione del ragnetto Popolazione
NOTA: Acari sono allevati in California fagioli rossi (Phaseolus vulgaris).
- Coltivare piante di fagioli da semi per 2-3 settimane prima infestazione.
- Intermix queste piante con piante infestate; acari adulti saranno ben presto colonizzare materiale vegetale fresco.
- Rimuovere le vecchie piante di fagiolo infestate ogni 7-10 giorni, la loro sostituzione con piante fresche.
2. Raccolta Adult Female acari
- Acari Collection utilizzando il metodo di lavaggio
- Per raccogliere gli acari, posizionare un impianto di ....
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Risultati
Utilizzo di 20-30 piante di fagiolo infestate, si può raccogliere circa 2.000 acari femmina adulta con setacci. Il tempo necessario per infestare 10 impianti con 20 acari per pianta è di circa 15 minuti se si utilizza un pennello per trasferire gli acari. Combinazioni di metodi di raccolta e di applicazione sono mostrati nella Figura 2.
Questo protocollo genera risultati riproducibili di danni pianta, dimostrando che gli acari raccolti sono stato fisiologico simile e adatto .......
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Discussione
Questo video dimostra protocolli utilizzati per isolare e ad infestare le piante con un gran numero di acari adulti di sesso femminile. Anche se abbiamo presentato questo protocollo usando A. thaliana, può essere usato per qualsiasi sistema di interazione acaro pianta-ragno e viene attualmente applicato con successo anche su piante di pomodoro e vite (Vitis vinifera). I rendimenti protocollo risultati riproducibili, indicando che gli acari raccolti sono stato fisiologico paragonabile (Figura 3).......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo progetto è stato finanziato dal governo del Canada attraverso Genome Canada e l'Ontario Genomics Institute (OGI-046), e l'Ontario Research Fund–Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (a M.G. e V.G.). T.V.L. è un borsista post-dottorato del Fondo per la ricerca scientifica delle Fiandre (FWO).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Materiale vegetale: | |||
| Fagiolo rosso della California | Stokes, Thorold, ON, Canada | di 2 settimane, ben infestato da acari 2 o 3 giorni prima dell'uso. Possono essere utilizzate altre cultivar di Phaseolus vulgaris. | |
| Prodotti chimici: | |||
| all'1% di Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | è preparata per semplificare l'aliquotazione |
| dell'acqua | A temperatura ambiente, il calore e lo shock da freddo influenzano il tasso di sopravvivenza e le prestazioni degli acari | ||
| Altri materiali e attrezzature: | |||
| Vassoio | |||
| di plastica Set di forbici | |||
| Becher | |||
| Tovaglioli | |||
| di carta Set di setacci | Prodotto in casa | Sono disponibili istruzioni dettagliate | |
| Pennello | |||
| Pipette | |||
| Puntali | Provette da centrifuga da 0,2 e 1 ml | ||
| 1,5 ml | |||
| Pompa | Pompa di tipo acquario con flusso d'aria invertito. È possibile utilizzare la linea del vuoto. La caduta di pressione richiesta è di circa 2-4 psi | ||
| Scanner stereoscopico | |||
| Epson | V30 | Qualsiasi scanner piano che consenta il necessario grado di controllo sulla qualità della scansione. Usiamo Epson V30 per i nostri esperimenti. | |
| Computer | Windows o OS X PC compatibile con l'hardware dello scanner e il software Adobe Photoshop. | ||
| Adobe Photoshop software | Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA | varie | Qualsiasi versione con strumento istogramma incluso. |
Riferimenti
- Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. Mites injurious to economic plants. , University of California Press. (1975).
- Migeon, A., Dorkeld, F. Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae. http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).
- Croft, B. A., Van....
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Ristampe e permessi
