La valutazione della fisiologia respiratoria ha tradizionalmente invocato tecniche, che richiedono immobilizzazione o sedazione dell'animale. Sfrenato pletismografia tutto il corpo, tuttavia, fornisce preciso, non invasivo, l'analisi quantitativa della fisiologia respiratoria in modelli animali. Inoltre, la tecnica permette ripetuta valutazione respiratorie di topi consentano studi longitudinali.
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Articolo metodologico
Misurare funzione respiratoria nei topi mediante sfrenato Pletismografia corpo intero
In questo articolo
Sommario
Abstract
La disfunzione respiratoria è una delle principali cause di morbilità e mortalità nel mondo e tassi di mortalità continuano a salire. Valutazione quantitativa della funzione polmonare in modelli di roditori è uno strumento importante per lo sviluppo di future terapie. Comunemente usato tecniche di valutazione della funzione respiratoria compresa pletismografia invasiva e oscillazione forzata. Mentre queste tecniche forniscono informazioni preziose, la raccolta dei dati può essere pieno di artefatti e la variabilità sperimentale a causa della necessità di anestesia e / o strumentazione invasiva dell'animale. Al contrario, sfrenato pletismografia tutto il corpo (UWBP) offre una precisa non invasivo, modo quantitativo, per cui per analizzare i parametri respiratori. Questa tecnica evita l'uso di anestesia e restrizioni, che è comune alle tecniche tradizionali pletismografia. Questo video dimostrerà la procedura UWBP compresa l'attrezzatura installata, calibrazione e registrazione funzione polmonare. Essospiegherà come analizzare i dati raccolti, nonché di identificare valori anomali sperimentali e manufatti derivanti dai movimenti degli animali. I parametri respiratori ottenuti con questa tecnica includono volume corrente, il volume minuto, inspiratorio duty cycle, velocità di flusso inspiratorio e il rapporto tra tempo di ispirazione per tempo di scadenza. UWBP non si basa su competenze specialistiche ed è poco costoso da eseguire. Una caratteristica fondamentale di UWBP, e più attraente per i potenziali utenti, è la capacità di eseguire misure ripetute della funzione polmonare sullo stesso animale.
Introduzione
La disfunzione polmonare è una delle principali cause di morbilità e mortalità nel mondo. La condizione è caratterizzata da scambio di ossigeno insufficiente, sinonimo di tosse, dolori al petto e dispnea. Conti malattie delle vie respiratorie per ~ 10% di mortalità in tutto il mondo 1. Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità, i tassi di mortalità sono destinate ad aumentare a causa del fumo persistente, inquinamento e sostanze irritanti professionali. UWBP è un'aggiunta utile per studiare la fisiologia del polmone, che complimenta fortemente biochimica e istologica tradizionale analisi 2. Altre procedure utilizzate per la valutazi....
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Protocollo
NOTA: La seguente procedura sperimentale è stato approvato dal Comitato Etico degli animali presso la Monash University e condotto in conformità con il Codice di condotta australiano per la cura e uso degli animali per fini scientifici (2006). Adulti di sesso femminile C57BL / 6 topi utilizzati per generare i risultati rappresentativi sono stati ottenuti dai Servizi Animal Monash. I topi sono stati alloggiati in uno specifico patogeno libero, temperatura e umidità ambiente controllata con un ciclo luce-buio 12 ore. Questi topi hanno avuto libero accesso a cibo e acqua.
1 Impostazione iniziale
- Collegare il portatile / desktop per la macchina di acqu....
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Risultati
Quando questa procedura è stata seguita correttamente, una traccia oscillante coerente viene creato il software di analisi dei dati. La procedura prevede una traccia respiratoria entro pochi minuti dopo la configurazione con calcoli semplici di calcolo per determinare i parametri respiratori elencati. Figura 5 rappresenta una traccia di respirazione adeguato da un controllo (sano) del mouse. Appropriato dati oscillante è prodotto quando l'animale non si muove attivamente.
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Discussione
La tecnica qui descritta è un metodo non invasivo per la valutazione dei parametri respiratori di topi sfrenato e non anestetizzati. I punti di forza di questo protocollo sono la sua semplicità e precisione per misurare la funzione polmonare longitudinalmente con artefatti minimi. Vi sono, tuttavia, alcuni limiti e punti critici da rilevare sulla procedura. In primo luogo e soprattutto, il mouse deve mantenere la calma all'interno della camera per un minimo di cinque secondi. Aggiunto lo stress interromperà il patte.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi concorrenti. Gli autori non hanno conflitti da rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare il Prof. David Walker per la sua consulenza tecnica e la fornitura di attrezzature nello sviluppo di questa tecnica. Questo lavoro è supportato dal programma di supporto alle infrastrutture operative del governo del Victoria. Questo lavoro è stato in parte sostenuto dal programma di supporto alle infrastrutture operative del governo del Victoria.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Software LabChart 7 (per Macintosh) | ADINSTRUMENTS | MLU60/7 | utilizzato nel protocollo step 4 |
| PowerLab 8/30 (modello ML870) | ADINSTRUMENTS | PL3508 | |
| Octal Bridge Amp (modello ML228) | ADINSTRUMENTS | FE228 | |
| Cavo nero da BNC a BNC (1 m) | ADINSTRUMENTS | MLAC01 | |
| Macintosh OS | Apple Inc. | Mac OS X 10.4 o successivo | |
| Termometro rettale digitale Surgipack Vega | Technologies | MT-918 | |
| Trasduttore di pressione volumetrica per erba PT5A | Grass Instruments Co. | Numero di modello PT5A; numero di serie L302P4. | |
| Siringa da 1 ml | Becton Dickinson (BD) | 309628 | |
| Pipette sierologiche da 5 ml | Greiner Bio One | 606160 | Collegate tramite tubo di plastica |
| Bilancia | VWR International, Pty Ltd | SHIMAUW220D | Qualsiasi bilancia con risoluzione di 0,1 grammi |
| HM40 Misuratore di umidità e temperatura | Vaisala | HM40A1AB | |
| Barometro | Barometro World | 1586 | |
| Tubo da laboratorio | Dow Corning | 508-101 | Utilizzato per collegare la colonna d'acqua alla siringa e al trasduttore di pressione |
| Camera cilindrica in perspex | Dynalab Corp. | Camera cilindrica costruita su misura con dimensioni interne come segue: 50 mm(l) x 1.500 mm(l). Ci sono due coperchi per ogni lato, con dimensioni 80 mm(l) x 80 mm(w). Ogni coperchio ha un foro circolare largo 60 mm tagliato sulla faccia del coperchio profondo 50 mm. Ciò consente alla camera di inserirsi nel coperchio. Un anello di gomma è montato attorno a ciascun foro del coperchio dove si inserirà la camera. Per il fissaggio della siringa e del trasduttore di pressione, le aperture hanno un diametro di 5 mm. Per il fissaggio della sonda di umidità, le aperture hanno un diametro di 25 mm. | |
| 80% etanolo (4 L) | VWR International, Pty Ltd | BDH1162-4LP |
Riferimenti
- World Health Organization, World Health Statistics. , WHO, Geneva, Switzerland. (2008).
- Jones, C. V., et al. M2 macrophage polarization is associated with alveolar formation during postnatal lung development. Respir. Res. 14 (41), 14-41 (2013).
- Campbell, E., et al.
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Ristampe e permessi
