Qui si descrive una tecnica di microscopia semplice e ampiamente accessibili per acquisire video digitale di alta qualità di Drosophila adulti e fenotipi mutanti larvali da una prospettiva laterale.
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Articolo metodologico
Acquisizione di alta qualità video digitale di Drosophila Comportamenti larvali e adulti da una prospettiva laterale
In questo articolo
Sommario
Abstract
Drosophila melanogaster è un potente sistema modello sperimentale per studiare la funzione del sistema nervoso. Mutazioni genetiche che causano la disfunzione del sistema nervoso spesso producono larve e gli adulti che hanno locomozione fenotipi difettosi che sono difficili da descrivere adeguatamente con il testo o completamente rappresentare con una sola immagine fotografica praticabile. Modalità attuali di pubblicazioni scientifiche, tuttavia, sostengono la presentazione di supporti video digitali come materiale supplementare per accompagnare un manoscritto. Qui si descrive una tecnica di microscopia semplice e ampiamente accessibili per l'acquisizione video digitale di alta qualità di entrambi i fenotipi larve e adulti di Drosophila da una prospettiva laterale. Video di locomozione larvale e adulto da una vista laterale è vantaggioso perché permette l'osservazione e l'analisi delle sottili distinzioni e le variazioni nei comportamenti aberranti locomotiva. Abbiamo utilizzato con successo la tecnica di visualizzare e quantificare aberrant strisciare comportamenti terzo instar larve, oltre a fenotipi mutanti adulti e comportamenti, tra cui governare.
Introduzione
Il frutto comune mosca Drosophila melanogaster è un potente sistema modello sperimentale per lo studio della funzione del sistema nervoso 1-3. Conservazione evolutiva di struttura e funzione del sistema nervoso con gli esseri umani, così come la facilità di manipolazione genetica e di una vasta gamma di strumenti genetici rende Drosophila l'organismo prima di modellare le malattie neurodegenerative umane 4. Mutazioni genetiche che causano la disfunzione del sistema nervoso causano spesso vitale larve mutanti e adulti Drosophila con locomozione compromessa. Fenotipi osservati nel sistema nervoso mutanti difettosi in....
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Protocollo
1 Il sistema Microscopio Stereo
Nota: Anche se questo protocollo è facilmente adattabile a qualsiasi impianto stereo microscopio accoppiato ad una fotocamera digitale con la possibilità di acquisire video, dettagli sono riportati sul sistema utilizzato nel nostro laboratorio (Tabella dei materiali / attrezzature).
- Acquisire video digitale utilizzando uno stereo microscopio trinoculare accoppiato ad una fotocamera digitale commerciale.
- Per accoppiare la fotocamera digitale commerciale alla porta trinoculare del microscopio stereo, rimuovere il ½x C-mount del porto fototubo del microscopio stereo e sostituirlo con un 1X....
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Risultati
Abbiamo utilizzato con successo questa tecnica per acquisire e quantificare il fenotipo larvale comportamentale associata alla perdita di funzione del gene Stathmin (Figura 2) 14. Il gene codifica per una proteina Stathmin normativo microtubuli che le partizioni dimeri di tubulina da pool di tubulina solubile, e si lega i microtubuli e promuove il loro smontaggio 15,16. Funzione Stathmin è necessario per mantenere l'integrità dei microtubuli nelle assoni dei nervi.......
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Discussione
Forza Drosophila melanogaster s 'come sistema modello per lo studio della funzione del sistema nervoso deriva in gran parte dalla convergenza dei potenti strumenti genetici disponibili e la vasta gamma di test comportamentali robusti sviluppato. Qui vi presentiamo una tecnica di microscopia semplice e ampiamente accessibili per l'acquisizione video digitale di alta qualità di Drosophila adulti e fenotipi locomotiva larvali da una prospettiva laterale. Abbiamo utilizzato con successo questo appr.......
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Dichiarazioni
Gli autori hanno dichiarato che non esistono interessi in competizione.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare Alexandra Opie per l'assistenza e il supporto tecnico, James Barton per la fornitura di video narrazione, e Ramona Flatz e Joellen Sweeney per apparire nel video allegato. Questo lavoro è stato supportato dal Charitable Trust MJ Murdock (Grant No. 2.012.205 a JED).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| microscopio stereozoom trinoculare | Olympus Corporation | SZ6145TR | ½ L'attacco C è stato rimosso e sostituito con 1X C-mount |
| 1X C-mount | Leeds Precision Instruments | LSZ-1XCMT2 | |
| Accoppiatore per fotocamera digitale (filettatura da 43 mm) | Qioptiq Imaging Solutions | 25-70-10-02 | |
| Anello di discesa da 58 mm a 48 mm | B& H Video | GBSDR5848 | |
| Anello di discesa da 48 mm a 43 mm | B& Kit adattatore video | GBSDR4843 | |
| Lensmate per Canon G10 | LensMateOnline.com | ||
| Canon PowerShot G10 Fotocamera digitale | Canon U.S.A., Inc. | ||
| Cuvetta spettroscopica in polisterene da 1,5 ml | Denville Scientific | U8650-4 |
Riferimenti
- Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. Drosophila neurobiology: a laboratory manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2010).
- Frank, C. A., et al. New approaches for studying synaptic development, function, and plasticity using Drosophila as a model system. J Neurosci....
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Ristampe e permessi
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