Preparazione di un Sangue cultura pellet per il Rapid batterica identificazione e test di sensibilità agli antibiotici

Sommario

Una rapida preparazione pellet batterico da una emocoltura positiva può essere utilizzato come campione per le applicazioni quali l'identificazione mediante MALDI-TOF, colorazione di Gram, test di sensibilità agli antibiotici e test di PCR-based. I risultati possono essere tempestivamente ai medici di migliorare la prognosi dei pazienti affetti da infezioni del sangue.

Abstract

Infezioni del sangue e sepsi sono una delle principali cause di morbilità e mortalità. Il buon esito dei pazienti affetti da batteriemia dipende da una rapida identificazione dell'agente infettivo per guidare il trattamento antibiotico ottimale. L'analisi delle macchie di Gram da emocoltura positiva può essere rapidamente condotto e già un impatto significativamente il regime antibiotico. Tuttavia, l'accurata identificazione dell'agente infettivo è ancora necessaria per stabilire il trattamento ottimale mirato. Presentiamo qui una preparazione pellet batterico semplice e veloce da una cultura del sangue positivo che può essere utilizzato come campione per diverse applicazioni a valle essenziali quali l'identificazione mediante MALDI-TOF MS, test di sensibilità agli antibiotici (AST) mediante saggio di diffusione del disco o sistemi automatizzati AST e automatizzato PCR-based test diagnostici. Le prestazioni di questi diversi sistemi di identificazione e AST applicati direttamente sulle emocolture pellet batterico è molto SImilar alla performance, normalmente ottenuto da colonie isolate cresciute su piastre di agar. Rispetto ai metodi tradizionali, la rapida acquisizione di un pellet batterico riduce notevolmente il tempo di segnalare sia l'identificazione e AST. Così, seguendo la cultura positività del sangue, l'identificazione mediante MALDI-TOF può essere segnalato in meno di 1 ora, mentre i risultati di AST da sistemi automatizzati o AST test di diffusione del disco entro 8 a 18 ore, rispettivamente. Allo stesso modo, i risultati di un test rapido basato su PCR possono essere comunicati ai medici meno di 2 ore a seguito della relazione di una batteriemia. Insieme, questi risultati dimostrano che la rapida preparazione di un pellet batterico cultura del sangue ha un impatto significativo sulla identificazione e AST turnaround tempo e quindi sul buon esito dei pazienti affetti da infezioni del sangue.

Introduzione

Infezioni del sangue e sepsi nei pazienti ospedalizzati sono una delle principali cause di morbilità e mortalità. Così, la mortalità correlata al flusso sanguigno infezioni si osserva in circa il 14% al 37% dei pazienti ricoverati in ospedale e può aumentare fino al 35% in unità di terapia intensiva dei pazienti ^1-3. La rapida identificazione dell'agente infettivo è fondamentale per guidare il trattamento antimicrobico ottimale e di aumentare il buon esito della terapia antimicrobica ^4,5. La rapida analisi delle macchie di Gram da emocoltura positiva ha già un impatto significativo sull'adattamento della terapia antimicrobica ^6,7

Protocollo

Questo protocollo è stato sviluppato e validato seguendo i processi di ricerca e sviluppo e le regole etiche della nostra istituzione, prima di essere implementato come strumento di routine.

1 Preparazione di una cultura Sangue batterica pellet da Ammonio Cloruro Procedura eritrociti-lisi

1. Preparazione di una coltura ematica positiva per la successiva centrifugazione.
   1. Sterilizzare il tappo cultura del sangue. Aggiungere etanolo al 70% sul tappo della bottiglia e bruciarlo.
      NOTA: Non eseguire questo passaggio sotto una cappa a flusso laminare.
   2. Spostare la bottiglia di una cappa a flusso laminare. Raccogl....

Risultati

Nello studio effettuato da Prod'hom et al. ^15, pellet batterici ottenuti da cloruro di ammonio lisi centrifugazione di 122 emocoltura positiva da 78 pazienti sono stati analizzati mediante MALDI-TOF MS. Su 122 emocoltura positiva, 95 (77,9%) sono stati correttamente identificati a livello di specie e uno (0,8%) a livello di genere. I restanti 26 (21,3%) Pellets emocoltura non hanno dato un'identificazione affidabile mediante MALDI-TOF. Tra questi, 21 sono stati i batteri Gram-positivi, tra cui 13 str.......

Discussione

Rispetto a emocoltura positiva approcci diagnostici convenzionali, la rapida acquisizione di un pellet batterico utilizzando il cloruro di lisi approccio centrifugazione ammonio ridurre il tempo di segnalare l'identificazione da 16 a 24 ore e il tempo di riferire AST per 24 per 48 ore (figure 1 e 3).

Rapida introduzione di un'appropriata terapia antibiotica è fondamentale per migliorare la prognosi dei pazienti affetti da infezioni del sangue. Così, l'identificaz.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Ago da 20 G	Terumo, Leuven, Belgio	NN-2038R
Provetta Falcon da 50 ml	BD, Franklin Lakes, NJ, USA	352070	Provette da centrifuga da 50 ml
Cloruro di ammonio	Merck, Darmstadt, Germania	101145
Carbonato acido di potassio	Fluka, St. Louis, MO, USA	60340
Acido formico	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	F0507	Infiammabile, corrosivo&
#945;-Acido ciano-4-idrossicinnamico	Fluka, St. Louis, MO, USA	70990	Tossicità acuta
Acetonitrile	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	271004	Infiammabile, tossicità acuta Acido
trifluoroacetico	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	T6508	Corrosivo, tossicità acuta
Vitek 2 60 strumento	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	27202	strumento automatizzato per il sistema microbico
Vitek 2 Scheda Gram-positiva (GP)	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	21342	carta d'identità GP  automatizzata
Vitek 2 AST-P580 carta	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	22233	sistema AST microbico automatizzato
Vitek 2 Gram-negativi (GN) card	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	21341	carta d'identità GN  automatizzata
Vitek 2 AST-N242 carta	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	413391	sistema AST microbico automatizzato
Xpert MRSA	Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA&	nbsp; GXMRSA-100N-10	tecnologia di amplificazione degli acidi nucleici MRSA
GeneXpert IV strumento	Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA	GXIV-4-D	tecnologia di amplificazione degli acidi nucleici
Microflex LT MALDI-TOF MS strumento	Bruker Daltonics, Brema, Germania	BDAL microflex LT/SH
MSP 96 target steel BC	Bruker Daltonics, Brema, Germania	280799	MALDI target plate
Densitometro Densicheck instrument	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	27208
MALDI Sepsityper kit 50	Bruker Daltonics, Brema, Germania	8270170
Mac Conkey agar	Biolife, Milano, Italia	4016702
Mueller-Hinton agar	Oxoid, Hampshire, Inghilterra	CM0337	Mueller-Hinton agar (MH)
MHF agar	Biomé rieux, Marcy-l'Etoile, Francia	43901	Mueller-Hinton agar-fastidious organisms agar (MHF)
BD columbia III agar	BD, Franklin Lakes, NJ, USA	254071	sangue agar
BD cioccolato agar	BD, Franklin Lakes, NJ, USA	254089	cioccolato agar
BD schaedler agar	BD, Franklin Lakes, NJ, USA	254084	Schaedler agar

strumento per la