Assay Semplice per la quantificazione della Social Prevenzione in Drosophila melanogaster

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per quantificare l'evitamento degli individui stressati. Questo paradigma è potente ma facile da usare e può essere utilizzato per valutare l'influenza dei geni e dell'ambiente su un tipo di interazione sociale in Drosophila melanogaster.

Abstract

Drosophila melanogaster è un modello emergente per studiare diversi aspetti delle interazioni sociali. Ad esempio, le mosche evitano le aree precedentemente occupate da conspecifici stressati a causa di un odorante rilasciato durante lo stress noto come odorante da stress Drosophila (dSO). Attraverso l'uso dell'apparato T-maze, è possibile quantificare l'evitamento del dSO da parte delle mosche responder in un test molto economico e robusto. Qui vengono presentate le condizioni necessarie per ottenere una buona performance. È necessaria un'esperienza stressante affinché le mosche emettano dSO, così come un numero sufficiente di mosche emettitrici per causare una robusta risposta di evitamento alla presenza di dSO. Il background genetico, ma non la dimensione del gruppo, ha fortemente alterato l'evitamento del dSO da parte dei moscerini responder. Canton-S ed Elwood mostrano prestazioni più elevate nell'evitare il dSO rispetto ai ceppi Oregon e Samarcanda. Questo test comportamentale consentirà l'identificazione dei meccanismi alla base di questo comportamento sociale e la valutazione dell'influenza dei geni e delle condizioni ambientali sia sull'emissione che sull'evitamento del dSO. Tale test può essere incluso in batterie di semplici test diagnostici utilizzati per identificare carenze sociali di mutanti o condizioni ambientali di interesse.

Introduzione

L'obiettivo di questo metodo è di quantificare facilmente un nuovo aspetto del semplice comportamento sociale in Drosophila melanogaster, indipendente dalla corteggiamento e aggressività.

Interazioni sociali sono fondamentali per il corretto sviluppo e la salute delle persone all'interno di una società, così come la funzionalità di un gruppo sociale nel suo complesso. La complessità di queste interazioni richiede campioni di grandi dimensioni e di un sistema che consente una semplificazione del comportamento come basi genetiche e neurali del comportamento sociale sono ancora poco conosciuti. Drosophila melanogaster

Protocollo

1. Attrezzature e reagenti creati in-house (vedi elenco dei materiali per gli altri)

1. Preparare una Drosophila apparecchiatura anestesia fredda per svolgere un lavoro mosca.
   1. Tagliare un foglio di polietilene porosa per coprire una piccola scatola di plastica (lungo 12,7 centimetri, larghezza 10,2 centimetri), in genere la copertura superiore di una scatola punte per pipette (lungo 12,7 centimetri, larghezza 10,2 centimetri, 3,8 centimetri di profondità).
   2. Riempire la scatola con ghiaccio tritato, coprire con il foglio di polietilene porosa.
2. Preparare un apparato T-labirinto; adattare l'apparecchiatura precedentement....

Risultati

Il saggio evitamento sociale è una prova robusta quantificare la capacità di Drosophila melanogaster riconoscere un segnale di stress (DSO) emessa da altri mosche, e valutare quindi un aspetto delle interazioni sociali. Il test viene eseguito utilizzando un apparecchio comunemente usato in vari saggi comportamento noto come T-labirinto, che presentano in linea con una scelta tra due diverse opzioni - a sinistra oa destra ^19,28-31. In questo caso, l'efficienza con cui linea evitano il DSO è quantifica.......

Discussione

Questo protocollo descrive una procedura dettagliata per il saggio evitamento sociale. Canton-S eviterà solo una fiala in che vola in precedenza stato meccanicamente sottolineato, e che il sesso e il numero di responder non influenza che le prestazioni evitamento sociale. Tuttavia, background genetico dei soccorritori ha una grande influenza.

Di seguito sono riportati alcuni passaggi critici per l'esecuzione di questo esperimento con successo: 1) il trasferimento sempre in linea 2 ore pr.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Microscopio zoom stereoscopico	Nikon	SMZ-645	Qualsiasi altro cannocchiale standard per la manipolazione delle mosche funzionerebbe
Piccoli pennelli			per mosche da spinta
Polietilene poroso, 12" x 12" Foglio	Flystuff - Genesee	46-100	http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 Foglio di plastica porosa per la scatola dell'anestesia fredda
Mini-Alarm Timer/Cronometro
Penne
Nastro adesivo
Mini vortex	Fisher	14-955-151	http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail Per l'agitazione meccanica delle mosche, qualsiasi vortice funzionerebbe.
Corning Life Sciences DL No.:352017, Provetta Falcon; fondo rotondo; monouso; senza chiusura, 14 ml; 17 x 100 mm	Fisher	14-959-8	http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalogId=29104&productId=2771811&distype=0&highlightProductsItemsFlag=Y&fromSearch=1&searchType=PROD&hasPromo=0 Questi si incastrano in un labirinto a T e in
batuffoli			chiudere le fiale dopo l'esperimento.
Pannello a tre ante e copertura			per fornire uno sfondo bianco e una luce omogenea.
		la copertura
			panca
Grande telo			per coprire l'apparato controcorrente in risposta alla fototassi .
luce bianca fredda	Home Depot	1000516563	http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 qualsiasi luce lineare simile con lampadina fluorescente di colore bianco freddo a 13-15 W funzionerebbe

Sharpie di cotone per della panca bianca Tappetino da lavoro bianco perdella qualsiasi tappetino per mouse funzionante. nero