L'intestino tenue è spesso esposto alle tossine che possono influenzare il flusso di sangue e di influenzare negativamente l'assorbimento dei nutrienti. Utilizzando un multimyograph e mesenterica arteria e vena isolati, composti o tossine di interesse possono essere sottoposti a screening per vasoactivity.
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Articolo metodologico
Isolare e utilizzo Sezioni di mesenterica bovina arteria e vena come un saggio biologico per verificare Vasoactivity nel piccolo intestino
In questo articolo
Sommario
Abstract
Sistemi gastrointestinale dei mammiferi sono costantemente esposti a composti (desiderabili e indesiderabili) che possono avere un effetto sul flusso di sangue da e verso quel sistema. Le variazioni di flusso di sangue al piccolo intestino può provocare effetti sulle funzioni di assorbimento dell'organo. Particolare interesse per le tossine liberate dai mangimi attraverso processi fermentativi e digestivi si è sviluppata nei ruminanti come un settore in cui le efficienze produttive potrebbero essere migliorati. Il video associato a questo articolo viene descritto un test biologico in vitro sviluppati per i composti dello schermo per vasoactivity in isolate sezioni di bovini mesenterica arteria e vena con un multimyograph. Una volta che i vasi sanguigni sono montati ed equilibrati nel myograph, il saggio biologico in sé può essere utilizzata: come strumento di screening per valutare la risposta contrattile o vasoactivity di composti di interesse; determinare la presenza di tipi di recettori da parte farmacologicamente mira recettori con agonisti specificis; determinare il ruolo di un recettore con la presenza di uno o più antagonisti; o determinare potenziali interazioni di composti di interesse con antagonisti. Attraverso tutto questo, i dati vengono raccolti in tempo reale, il tessuto prelevato da un singolo animale può essere esposto a un gran numero di diversi trattamenti sperimentali (un vantaggio in vitro), e rappresenta vascolare su entrambi i lati del letto capillare per fornire un accurato immagine di ciò che potrebbe accadere nel afferenti ed efferenti apporto di sangue sostenere il piccolo intestino.
Introduzione
Le alterazioni del flusso sanguigno in un letto di tessuto può avere un grande impatto sulla funzione d'organo. Una funzione primaria del piccolo intestino è l'assorbimento dei nutrienti. Arteriosa flusso di sangue verso la superficie di assorbimento dell'intestino è necessario per l'assorbimento dei nutrienti e aumenta il flusso sanguigno per aiutare l'assorbimento dei nutrienti come Digesto si muove lungo la superficie 1. Una diminuzione del flusso sanguigno può causare una riduzione dell'assorbimento dei nutrienti a causa di una diminuzione del gradiente transepiteliale 2. Oltre ai nutrienti, il piccolo intestino può e....
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Protocollo
Le procedure utilizzate in questo studio non hanno richiesto l'approvazione presso l'Università del Kentucky Animal Care and Use Committee, perché non sono stati utilizzati animali vivi. Prima di raccolta di ogni campione utilizzato nel presente documento, tutti gli animali sono stati storditi con un proiettile captivo e dissanguato. Questo è stato condotto in una struttura federale mattatoio ispezionato presso l'Università del Kentucky. Un rappresentante ufficiale della sicurezza alimentare e Inspection Servizio USDA ha osservato tutte le attività che si sono occupati con il live degli animali e la manipolazione della carcassa.
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Risultati
I vasi sanguigni utilizzati per generare i risultati inclusi sono stati raccolti da 6 manzi Holstein (425 ± 8 kg) all'interno di un intervallo di 3 settimane. Un esempio di una tipica mesenterica risposta contrattile vena di KCl e aggiunte di trattamento in aumento in concentrazione è presentato in Figura 2. L'entità della risposta varierà alcuni con le dimensioni del vaso (correlata alla dimensione dell'animale donatore), ma può anche essere influenzato (negativamente) da un uso improprio (stretching) .......
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Discussione
La sfida iniziale per lo sviluppo di questo saggio biologico è stato la creazione di un centro di raccolta ripetibile per vascolarizzazione mesenterica. Consistenza sito campione è critica, in quanto alcune delle funzioni del piccolo intestino cambiamento durante la progressione del digiuno attraverso l'ileo e conseguentemente il mesentere variano in un modello simile. I rami ileali di mesenterica e vena sono stati i più facilmente identificabili attraverso punti di riferimento anatomici. Collocando il cieco e segue.......
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Dichiarazioni
Menzione del nome commerciale, prodotto proprietario, o equipaggiamenti specificati non costituisce una garanzia o garanzia da parte del USDA e non comporta l'approvazione ad esclusione di altri prodotti che possono essere disponibili.
Ringraziamenti
Gli autori riconoscono Ryan Chaplin e il dottor Gregg Rentfrow della University of Kentucky Carni Lab e Dipartimento di Scienze degli Alimenti animali e per fornire opportunità di raccogliere i tessuti sperimentali utilizzati nel presente documento.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Multi Myograph | Danish Myo Technologies | 610M | Un miografo è fondamentale per questo biotest, ma ci sono altre piattaforme disponibili per l'uso che saranno sufficienti. |
| Powerlab 8/sp | ADIntruments | ML785 | |
| LabChart 7 | ADInstruments | Versione 7 | |
| Kit di calibrazione della forza | Danish Myo Technologies | 100055 | Specifico per miografi DMT |
| Filtro per flaconi | Nalgene | 595-4520 | 0.22 μ m dimensione dei pori; Misura del manico 45 mm |
| #5 Jewler' s Pinze | Miltex | 555008FT | È possibile utilizzare qualsiasi marca di pinze |
| Noyes Forbici per iride | Miltex | 18-1510 | È possibile utilizzare qualsiasi marca di forbici |
| Cannocchiale da dissezione | Zeiss | Stemi 2000-C | Qualsiasi marca di microscopio ottico da dissezione sarà sufficiente |
| Tessuto regolabile Matrice | Braintree Scientific | TM C12 | Questo non è fondamentale per il test, ma riduce notevolmente la variazione di lunghezza da sezione a sezione e accelera notevolmente il processo di affettatura |
| Krebs-Hensleit Buffer | Sigma-Aldrich | K3753-10x1L | Non è necessario acquistare Krebs, questo può essere fatto in casa |
| Cloruro di calcio disidratato | Sigma-Aldrich | C7902-500G | |
| Bicarbonato di sodio | Sigma-Aldrich | S5761-500G | |
| Desipramina-HCl | Sigma-Aldrich | D3900-5G | |
| Propranolol-HCl | Sigma-Aldrich | P0884-1G | |
| KCl | Sigma-Aldrich | P9333-500G | |
| 95% O2/5% CO2 | Scott Gross | UN3156 |
Riferimenti
- Matheson, P. J., Wilson, M. A., Garrison, R. N. Regulation of intestinal blood flow. The Journal of surgical research. 93, 182-196 (2000).
- Dobson, A. Blood flow and absorption from the rumen. Quarterly journal of experimental physiology. 69, 599-606 (1984).
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Ristampe e permessi
