Visualizzare e accedere all'embrione di pollo durante lo sviluppo può essere impegnativo. Abbiamo sviluppato un metodo ex ovo che è semplice, economico e può essere facilmente utilizzato in classe o in un ambiente di ricerca. Questo metodo consente l'accesso all'embrione nelle fasi avanzate dello sviluppo embrionale (HH 40).
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Ottimizzato Ex-ovo Coltura di Chick embrioni a stadi avanzati di sviluppo
In questo articolo
Sommario
Abstract
La ricerca in anatomia, embriologia e biologia dello sviluppo si è in gran parte basata sull'uso di organismi modello. Per studiare lo sviluppo in embrioni vivi, vengono spesso utilizzati organismi modello, come il pollo. Il pollo è un eccellente organismo modello grazie al suo basso costo e alla manutenzione minima, tuttavia presenta sfide osservative perché è racchiuso in un guscio d'uovo opaco. Per vedere correttamente l'embrione mentre si sviluppa, il guscio deve essere finestrato o rimosso. Sia la tecnica di windowing che quella ex ovo sono state sviluppate per assistere i ricercatori nello studio dello sviluppo embrionale. Tuttavia, ciascuno dei metodi presenta limitazioni e sfide. Qui presentiamo una tecnica di coltura ex ovo semplice e ottimizzata per embrioni di pollo che consente di osservare lo sviluppo embrionale dallo stadio HH 19 fino agli stadi avanzati di sviluppo (HH 40), quando molti organi si sono sviluppati. Questa tecnica è facile da adottare sia nelle classi universitarie che nei laboratori di ricerca più avanzati in cui vengono condotte manipolazioni embrionali.
Introduzione
L'ex coltura ovo ha svolto un ruolo importante nello studio dello sviluppo del pollo1, 2. Questo metodo di coltura è stato utilizzato per studiare le malattie neurologiche, lo sviluppo degli arti, lo sviluppo craniofacciale e come modello per studiare le malformazioni associate al diabete 3, 4, 5.
Ci sono molte varianti alla tecnica ex ovo. L'approccio più comune consiste nell'utilizzare una tazza di polistirolo6,7,8 o una ciotola di vetro5. In questi metodi, la tazza o la ciotola viene rivestita con un involucro di plastica per cullare l'embrione, viene posizionato un coperchio ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Nota: Tutte le forniture sono elencati nella tabella 1.
1. Memorizzare il pollo embrioni
- Incubare uova di gallina del ceppo Gallus gallus orizzontalmente a 37 ° C con circa il 40% di umidità e girare le uova una o due volte al giorno. Passando uova è importante per evitare l'embrione di aderire al guscio d'uovo.
- Non per non trasformare l'uovo in 24 ore prima di impostare la cultura, altrimenti l'embrione sarà situato ventrale alla massa tuorlo e verrà danneggiato aprendo l'uovo al punto 3. Inoltre, tenere le uova a 4 o C ° per non più di una settimana prima di incubaz....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Questo ex ovo metodo consente l'osservazione di embrioni dalle prime fasi di sviluppo (HH 19/20) in fase avanzata di sviluppo (HH 40-41) (Figura 1A e 1B). Impostazione della cultura a HH 19-20 aumenta sopravvivenza degli embrioni nella cultura. Prima della testa di svolta (prima 53 HPF) di sopravvivenza è molto bassa nella cultura e dopo la tappa 21, l'embrione tende ad attaccare di più per la shell alla rimozione così si ottengono un numero inferiore di embrioni intatti. In ge.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Ex ovo coltura e di finestre entrambi hanno vantaggi e le sfide. Qui mettiamo a confronto i vantaggi e le sfide del bicchiere di polistirolo ex ovo metodo e il metodo a finestre al nostro ex ottimizzato ovo metodo illustrato qui. Il nostro metodo permette la manipolazione e semplice osservazione del embrione di pollo in fase avanzata di sviluppo e dei nostri filtri alla ex ovo tradizionale metodo 1, 2, 3 rendono inoltre molto facile da usare in classi di laurea lab.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti per quanto riguarda le informazioni presentate in questo manoscritto.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Paul Poirier, il produttore di media, a Mount Saint Vincent Università per il suo lavoro in ripresa e modifica la parte video di questo manoscritto. Riconosciamo Scienze Naturali e di Ingegneria Research Council del Canada per il finanziamento.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Penicillina/Streptomicina | Sigma | P4458 | Fare piccole aliquote per evitare eventi di congelamento/scongelamento |
| di Petri quadrata | 9,5 cm x 9,5 cm | ||
| Pesa Barca | Fischer Scientific | 8732113 | 88 x 88 x 23 mm |
| Contenitore con chiusura lampo | Chiusura lampo | N/A | 12 cm x 12 cm x 6 cm |
Riferimenti
- Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos. Dev. Biol. 41, 391-394 (1974).
- Gennaro, L. D., Packard, D. S., Stach, R. W., Wagner, B. J. Growth and differentiation of....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
