La timectomia per roditori è una tecnica preziosa nella ricerca immunologica. Qui viene descritto un protocollo per la timectomia completa in ratti adulti che utilizza una mini-sternotomia insieme all'intubazione non invasiva e alla ventilazione a pressione positiva per ridurre al minimo la morbilità e la mortalità perioperatorie.
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Articolo metodologico
Thymectomy completa in ratti adulti con non-invasiva intubazione endotracheale
In questo articolo
Sommario
Abstract
Thymectomy nei roditori neonatale è una procedura consolidata e affidabile per studi immunologici. Tuttavia, in ratti adulti, complicanze di emorragia e pneumotorace di interruzione pleurico può provocare un notevole tasso di mortalità. Questo protocollo è un metodo semplice di timectomia topo che utilizza un mini-sternotomia e intubazione endotracheale. Intubazione è compiuto con un metodo non-invasivo e facilmente riproducibile e consente di ventilazione a pressione positiva per evitare pneumotorace e una via aerea controllata che permette un tempo sufficiente per un'attenta timo dissezione per minimizzare i disagi pleurico. A 1,5 centimetri un'incisione sternale diminuisce il contatto con i vasi del mediastino e pleura, pur fornendo una visualizzazione completa di timo. Dopo l'esposizione del mediastino, il timo viene rimosso per via smussa sotto ingrandimento. Lo spazio pleurico viene poi sigillata da sutura dei muscoli pre-tracheale seguita dall'applicazione di colla chirurgica. Iltorace è poi chiusa da sutura dello sterno, seguita da sutura della pelle. Tutti thymectomies erano completo come evidenziato da immunoistochimica (IHC) colorazione del tessuto mediastinica, e l'assenza di cellule T naive mediante citometria di flusso, e la procedura ha avuto un tasso di sopravvivenza del 96%. Questo metodo è adatto quando timectomia completo di complicazioni minime si desidera per ulteriori studi immunologici nei ratti adulti atimici.
Introduzione
Dall'inizio degli anni 1960, il timo è stato riconosciuto per il suo ruolo fondamentale nello sviluppo della tolleranza immunologica centrale. Roditore thymectomy ha dimostrato di essere una procedura essenziale nella definizione del ruolo del timo nella differenziazione dei linfociti, auto-tolleranza e immunotolleranza nella cornice del trapianto allogenico e metastasi tumorali. La rimozione del timo topo permette studi che coinvolgono la deplezione delle cellule T o il trasferimento adottivo di popolazioni di cellule T definiti senza il riemergere di cellule T naive nativi.
Thymectomies nei roditori neonatali può essere realizzato u....
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Protocollo
NOTA: Tutte le procedure sperimentali che prevedono l'uso di ratti sono stati fatti secondo protocolli approvati dalla cura e l'uso degli animali Comitato della Duke University.
1. Preparazione del tracheale intubazione cannula
- Tagliare la fine dell'ago di un 2 pollici 14 G angiocathether ago con taglienti.
- Pinch il lume dell'ago chiuso con pinze ad ago.
- Tagliare sezione pizzicato fino al bordo della porzione aperta lumen con le pinze di taglio, e quindi tagliare i bordi su entrambi i lati della restante estremità a 30 - 45 ° angolo al bordo dell'ago.
- Posizionare la parte inferi....
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Risultati
Questa procedura è stata eseguita su ratti adulti Lewis (n = 26). Il tempo di funzionamento medio è stato di 15 ± 3 min. Non c'era la mortalità intraoperatoria. Il tempo medio di intubazione - dal posizionamento del ratto su dell'apparato intubazione alla costituzione di ventilazione - è stato di 45 ± 5 sec. 24 ratti avevano un pieno recupero dall'operazione senza evidenza di difficoltà respiratorie o emorragia attraverso giornata post-operatoria (POD) 14. Un ratto sviluppato difficoltà respiratorie in POD 4 e sottopost.......
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Discussione
Il presente protocollo per completare timectomia fornisce un approccio mini-invasivo con una chiusura un'incisione a tre strati con l'applicazione colla chirurgica per ridurre al minimo le complicanze. La rimozione completa del timo è stata dimostrata dalla perdita di cellule T naive e IHC colorazione del tessuto linfoide mediastinica per citocheratina.
La procedura di ratto adulto timectomia è stata complicata dalla mortalità da 1,5 - 20% a causa di complicazioni perioperatorie, mol.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da AI101263 del National Institutes of Health (T.V.B), e da una sovvenzione della Hartwell Foundation (M.L.M). M.L.M. è membro del Duke Comprehensive Cancer Center.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 2 pollici 14 G | |||
| Microscopio operatorio | Zeiss | ||
| Pad | |||
| Monitor della frequenza cardiaca e dell'ossigenazione del sangue per roditori con sensori a piede | Apparecchio Harvard | ST1 72-8010, ST1 72-8098 (sensore del piede di ratto) | |
| Apparecchio per intubazione (plastica con barra metallica nella parte superiore) | Vedere Figura 2 | ||
| Sistema di anestesia per piccoli animali con scatola di induzione, serbatoio di isoflurano e serbatoio O2 | Apparecchio Harvard | ST1 72-6420 | |
| Ventilatore per piccoli animali con tubo | CWE | 12-02000 (ventilatore) e 12-04000 (gruppo valvola esterna per topi/ratti) | |
| Illuminatore a fibra ottica ad alta intensità | Dolan Jenner | EEG 2823M | |
| Pinze standard per studenti | Strumenti per le scienze | 91100-16 | |
| Forbici dritte fini | Strumenti per le scienze | 14060-09 | |
| Forbici da karitè con punta smussata | scienze | 14105-12 | |
| Divaricatore per alm piccolo (per sterno) | Strumenti per le scienze | 17008-07 | |
| Pinze per Graefe smussate | Strumenti per le scienze | 11050-10 | |
| Pinze Fine Dumont | Strumenti per la scienza | 11254-20 | |
| 5-0 Suture Maxon Suture | Ethicon | ||
| 4-0 Suture di seta (con ago da taglio) | Sutura in nylon Ethicon | ||
| 6-0 | Colla | ||
| (Endermil) | |||
| Gel lubrificante | Akorn Animal Salute | NDC 17478-162-35 |
Riferimenti
- Hard, G. C. Thymectomy in the neonatal rat. Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).
- Kobayashi, E., et al. A technique for complete thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0-3 (1994).
- Delrivière, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P.
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Ristampe e permessi
