La sintesi di specie asimmetriche di ferrocene è impegnativa utilizzando tecniche di soluzione. Questo rapporto si concentra sui metodi effettuati per produrre un bioconiugato ferrocene-biotina utilizzando reazioni facili e pulite realizzate tramite sintesi in fase solida. È dimostrato che l'incorporazione di una porzione tiolata conferisce la capacità di immobilizzazione sulle superfici d'oro.
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Articolo metodologico
Metodologia sintetico per Asymmetric Ferrocene derivati sistemi bio-coniugati attraverso Solid Metodologia Resina a base di fase
In questo articolo
Sommario
Abstract
La diagnosi precoce è la chiave per il successo del trattamento della maggior parte delle malattie, ed è particolarmente importante per la diagnosi e il trattamento di molti tipi di cancro. Le tecniche più comuni utilizzate sono Imaging modalità, come la risonanza magnetica (MRI), tomografia ad emissione di Topografia (PET), e computerizzata Topografia (CT) e sono ottimali per la comprensione della struttura fisica della malattia, ma possono essere eseguite solo una volta ogni quattro sei settimane a causa dell'uso di agenti di imaging e costo complessivo. Con questo in mente, lo sviluppo di "point of care" tecniche, come biosensori, che valutano lo stadio della malattia e / o l'efficacia del trattamento in studio del medico e lo fanno in modo tempestivo, avrebbe rivoluzionato protocolli di trattamento. 1 come un mezzo per esplorare biosensori ferrocene base per la rilevazione di molecole biologicamente rilevanti 2, sono stati sviluppati metodi per produrre bio-coniugati ferrocene-biotina qui descritti. Questa relazione si concentrerà su un sistema biotina-ferrocene-cisteina che può essere immobilizzato su una superficie d'oro.
Introduzione
I biosensori sono piccoli dispositivi che utilizzano la tecnologia di riconoscimento biomolecolare come piattaforma per l'analisi selettiva e vengono utilizzati per la loro specificità, velocità e basso costo. Biosensori elettrochimici per la rilevazione di biomolecole sono all'avanguardia di questo campo per la loro semplicità, economicità, ed alta sensibilità. 1,3 L'anatomia generale di tali sensori è un elettrodo dotato di una molecola di riconoscimento specifico per il marcatore biologica di interesse . Il legame del biomarker dalla molecola di riconoscimento si traduce in una variazione locale del potenziale o corrente che può essere rilev....
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Protocollo
1. Sintesi di biotina-Fc-cisteina (1)
- Metodi in fase solida per la produzione di resina-legato 1.
- Inserire biotina resina caricata (250 mg, 0,145 mmol) in una siringa sinterizzato e gonfiare la resina elaborando dimetilformammide (5 ml) e agitando la siringa su un agitatore di laboratorio per 20 min. Espellere la soluzione e ripetere dimetilformammide gonfiore ancora una volta.
- Rimuovere il gruppo protettore Fmoc aggiungendo 4-6 ml di 20% piperidina in dimetilformammide alla siringa seguita da 10-15 minuti di agitazione. Ripetere il processo deprotezione con un altro 4-6 ml di piperidina. Lavare la resina con una sequenz....
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Risultati
La forma legata resina 1 è indicata in figura 2. L'attacco covalente del componente ferrocene dà luogo ad una tinta arancione alle perle di resina che è persistente con lavaggio in continuo e indicativa di un ferro immobilizzato contenente complessa rispetto a assorbimento di ferro dal componente PEG del tallone resina. La forma priva di resina 1 è identico a colori per le perle di resina. Dopo la rimozione del composto dalla resina perline, la purezza e resa (68%) .......
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Discussione
La sintesi di derivati asimmetrici ferrocene è impegnativo in soluzione. Ad esempio, i tentativi di produrre 1 in soluzione comportato basse rese di prodotto desiderato (meno del 20%). Analogamente, utilizzando reazioni 1'-ammino-ferrocene acido carbossilico (sans Fmoc) e resina biotina legata determinato prodotto insolubile coerente con il prodotto polimerizzato riportato da Baristic et al. e prodotto minima. 47 Questo è ulteriormente complicato dal ferrocene e suoi d.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
KG è stato sostenuto dalla concessione P-1760 RA Welch Foundation, TCU Andrews Istituto di Matematica e Scienze della formazione (per KG), TCU ricerca e creatività Activity Grant (al KG) e TCU SERC Grant (a JHS).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Biotina Novatag Resina | NovaBiochem | 8550510001 | |
| TORVIQ 10 ml Luer Lock Siringa fritta | Fisher | NC9299151 | |
| piperidina | Acros | P/3520 / PB05 | |
| test ninidrina | Sigma-Aldrich | 60017-1ea | |
| 1'-Fmoc-ammino-ferrocene-1-acido carbossilico | Omm Scientific Ordine | speciale | |
| N,N′ -Diisopropilcarbodiimmide | Sigma-Aldrich | D125407-5G | |
| Fmoc-Cys(Trt)-OH | Novabiochem | 8520080025 | |
| acido trifluoroacetico | Sigma-Aldrich | T5408 | |
| 1,2-etanedithiol | Sigma-Aldrich | 2930 | |
| triisopropyl silano | Sigma-Aldrich | 233781 | |
| Eppendorf tubes (20 ml) | Qualsiasi fonte | ||
| Metanolo | Qualsiasi fonte | Essiccare con setacci molecolari prima dell'uso e conservare in un flacone da 100 ml per un facile utilizzo | |
| Diclorometano | Qualsiasi fonte | Asciugare con setacci molecolari prima dell'uso e conservare in un flacone da 100 ml per un facile utilizzo | |
| Dimetilformammide | Qualsiasi fonte | asciugare con setacci molecolari prima dell'uso & Conservare in un flacone da 100 ml per un facile utilizzo | |
| Centrifugare | qualsiasi fonte |
Riferimenti
- Wang, J. Electrochemical biosensors: towards point-of-care cancer diagnostics. Biosens Bioelectron. 21 (10), 1887-1892 (2006).
- Scarborough, J. H., Brusoski, K., Brewer, S., Green, K. N. Solid phase synthesis of ferrocene-biotin bioconjugates and reactivity with avidin. A paradigm for development of electrochemical biosensors. , Texas Christian University. Fort Worth, Texas. (2014).
- Zhang, S., Zheng, F., Wu, Z., Shen, G., Yu, R.
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Ristampe e permessi
