L'obiettivo di questo protocollo è valutare lo stordimento miocardico a seguito di arresto cardioplegico ischemico nei roditori.
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Articolo metodologico
Murino Isolato Cuore modello di infarto stordimento associati con arresto cardioplegica
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il protocollo seguito è utile per valutare la funzione cardiaca compromessa o miocardiche splendida seguenti moderati insulti ischemici. La tecnica è utile per modellare danno ischemico associato con numerosi fenomeno clinicamente rilevanti tra cui la chirurgia cardiaca con arresto cardioplegica e bypass cardiopolmonare, CABG off-pump, trapianto, angina, breve ischemia, ecc. Il protocollo presenta un metodo generale per modellare ipotermico arresto cardioplegico hyperkalemic e riperfusione nei cuori roditori concentrandosi su misura della funzione contrattile miocardica. In breve, un cuore mouse è perfuso in modalità Langendorff, strumentato con un palloncino intraventricolare, e parametri funzionali cardiaci di base sono registrate. Dopo la stabilizzazione, il cuore è quindi soggetta a brevi infusione di una soluzione cardioprotettivo cardioplegia ipotermico di avviare arresto diastolica. Cardioplegia viene consegnato in modo intermittente su 2 ore. Il cuore è quindi riperfuso e warmed a temperature normotermici e recupero della funzione miocardica è monitorata. L'uso di questo protocollo si traduce in affidabilità funzione contrattile cardiaca depressa esenti da danni ai tessuti del miocardio lordo nei roditori.
Introduzione
Miocardico stordimento è definito come reversibile attività contrattile ridotto nonostante il ripristino di un adeguato flusso di sangue dopo un breve periodo di ischemia o periodi prolungati di insulti ischemici con cardioprotezione 1,2,3,4,5. Il metodo presentato è specificamente utilizzato per modellare clinicamente rilevanti insulti ischemici che possono provocare alterazioni reversibili in funzione contrattile (vale a dire, gli insulti ischemici associati alla chirurgia cardiaca utilizzando arresto cardioplegico, brevi periodi di ischemia, angina, ecc). In contrasto con gli studi di ischemia gravi (infarto miocardico, necrosi) questo....
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Protocollo
NOTA: Tutte le procedure sono state approvate dal Istituzionale Cura e Comitato uso degli animali durata della vita e di tutti gli animali e le procedure secondo la Nazionale Guide Consiglio di ricerca per la cura e l'uso di animali da laboratorio 10.
1. Balloon Fabbricazione e ventricolare sinistra Pressure Monitoring Circuit
- Costruire palloni LV secondo Miller et al. 11 in un bicchiere con un ancoretta, miscelare 9.5 ml di acqua distillata, 14,2 ml di sciroppo di mais luce e 33,8 g di saccarosio, e il calore su un piatto caldo, mescolare fino a quando lo zucchero si scioglie . Continuare sol....
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Risultati
La Figura 1 presenta i risultati tipici da un esperimento del mouse. LVP (linea rossa), dP / dt (linea verde), e la temperatura (linea viola) sono state continusouly registrato oltre ~ 3 ore. Lettere indicano un - misurazione di base, b, c, d, e - consegna di soluzione cardioplegia, f - inizio della riperfusione, g, h, i, j - misurazione del flusso cornary durante la riperfusione. Nota, LVDP depresso e dP / dt su riperfusione rispetto al basale. Figura 1B include i dati da un registrato.......
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Discussione
I particolari del protocollo precedenti metodi per valutare stunning miocardico secondario all'ischemia globale associato con l'arresto cardioplegic. Nelle nostre mani questo protocollo produce un approssimativo ~ riduzione del 40% della funzione cardiaca (LVDP, +/- dP / dt) con modifiche minime della frequenza cardiaca al 30 min punto tempo di post-riperfusione. Mentre il cuore è riperfuso e rewarmed tutti i parametri di funzionalità cardiaca sono ridotte in momenti iniziali con una frequenza cardiaca molto rid.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione per cardioplegia (San Tommaso II) | Simbolo / Concentrazioni (mM) | ||
| Cloruro di | NaCl; 110 | ||
| Cloruro | KCl; 16 | ||
| Cloruro | CaCL2; 1,5 | ||
| Cloruro | MgCL2; 16 | ||
| Bicarbonato | NaHCO3; 10 | ||
| Krebs-Heinslet | |||
| Cloruro di | NaCl; 118 | ||
| Cloruro | KCl; 4,8 | ||
| Solfato | MgSO4; 1,7 | ||
| Bicarbonato | NaHCO3; 24,9 | ||
| Fosfato di potassio (monobasico) | KH2PO4; 1,2 | ||
| Cloruro | CaCL2; 1,4 | ||
| Piruvato | Na piruvato; 2 | ||
| C6H12O6 di glucosio | ; 6 | ||
| reagenti | |||
| Sciroppo | |||
| Spaghetti | |||
| Gel di dispersione di silicone | |||
| di polistirolo | |||
| forno/incubatore da laboratorio ( 50C) | |||
| perfusione Langendorff | |||
| Sistema cardiaco perfuso isolato (IH-SR (Hugo-Sachs) o equivalente) | |||
| Sistema di acquisizione dati (DSI, ADinstruments o equivalente) | |||
| Circolatore | |||
| Circolatore | |||
| di raffreddamento Pompa di perfusione in grado di erogare 2-30 ml/min | |||
| Filtri di perfusione in linea - 1 um di fibra | |||
| Sensori di pressione e amplificatori per LVP e pressione | |||
| Piccolo cilindro graduato (~10 mL) | |||
| Piccola sonda di temperatura e termometro (Werner o equivalente) | |||
| serbatoio di perfusione (1L) | |||
| serbatoio di cardioplegia (~200 mL) | |||
| gorgogliatore | |||
| 95/5 Miscela | |||
| Strumenti chirurgici e reagenti | |||
| Forbici chirurgiche Metzenbaum | |||
| due pinze Dumont misura 5 ketamina | |||
| xilazina | |||
| eparina | |||
| piccolo morsetto con lati morbidi per trattenere l'aorta (cioè morsetto terminale con estremità nastrate) | |||
| Suture |
Riferimenti
- Kloner, R. a, Jennings, R. B. Consequences of Brief Ischemia: Stunning, Preconditioning, and Their Clinical Implications: Part 1. Circulation. 104 (24), 2981-2989 (2001).
- Mentzer, R. M. Myocardial protection in heart surgery. J Cardiovasc Pharmacol Th....
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Ristampe e permessi
