Valutazione del rene Zebrafish Funzione Con un test Clearance fluorescente

Summary

Il pesce zebra è uno strumento popolare per modellare la malattia renale cronica (CKD). Tuttavia, la loro piccola dimensione rende impossibile valutare la funzione renale con metodi tradizionali. Descriviamo un colorante fluorescente rene liquidazione test ¹ che permette l'analisi quantitativa della funzione renale zebrafish in CKD.

Abstract

L'embrione zebrafish offre un modello per lo studio trattabili organogenesi e modello di malattia genetica umana. Nonostante la sua relativa semplicità, il rene zebrafish sviluppa e funzioni quasi nello stesso modo come gli esseri umani. Una differenza importante nella costruzione del rene umano è la presenza di milioni di nefroni rispetto al zebrafish che ha solo due. Tuttavia, semplificando un sistema così complesso in unità funzionali di base ha aiutato la nostra comprensione di come si sviluppa il rene e gestisce. In zebrafish, la linea mediana trova glomerulo è responsabile per la filtrazione del sangue iniziale in due tubuli pronephric che divergono per eseguire bilateralmente lungo l'asse embrionale prima di fondersi tra loro a cloaca. I tubuli pronephric sono fortemente popolate da cilia motili che facilitano il movimento di filtrato lungo il tubulo segmentato, permettendo lo scambio di vari soluti prima infine di uscire attraverso la cloaca ^2-4. Molti geni responsabili di CKD, incLuding quelli relativi alla ciliogenesis, sono stati studiati in zebrafish ^5. Tuttavia, un grande inconveniente è stata la difficoltà di valutare la funzione renale zebrafish dopo manipolazione genetica. Saggi tradizionali per misurare disfunzioni renali nell'uomo hanno dimostrato non traslazionale per zebrafish, dovuto principalmente al loro ambiente acquatico e le dimensioni ridotte. Ad esempio, non è materialmente possibile estrarre sangue da embrionale scena pesci per l'analisi del contenuto di urea e creatinina, in quanto sono troppo piccole. Inoltre, zebrafish non produce abbastanza urine per il test su un semplice proteinuria 'astina', che viene spesso eseguita durante gli esami iniziali paziente. Descriviamo un test di fluorescenza che utilizza la trasparenza ottica della zebrafish per monitorare quantitativamente il passaggio di un colorante fluorescente, nel tempo, dal sistema vascolare e fuori attraverso il rene, per dare una lettura fuori della funzione renale ^1,6-9.

Introduction

Il rene umano gioca un ruolo cruciale nel filtraggio rifiuti metabolici dal sangue e il recupero soluti necessarie per sostenere l'omeostasi cellulare. Ci sono un certo numero di malattie genetiche umane che causano disfunzioni renali. La malattia renale ereditaria più comune è autosomica dominante malattia del rene policistico (ADPKD) caratterizzato dallo sviluppo di fluidi riempita sacs all'interno tubuli pochechnykh; i danni provocati da cystogenesis è dannoso per la funzione renale ^10. ADPKD ha una occorrenza di 1: 800 - 1: 1.000 e rappresenta il 8-10% dei pazienti con insufficienza renale allo stadio terminale (ESRF) ^11. Diversi gen....

Protocol

Etica Dichiarazione: animali di manutenzione, allevamento, e le procedure sono definiti e controllati dagli Animali (procedure scientifiche) Act 1986. Tutti sperimentazione animale è stata effettuata sotto licenze concesse dallo Home Secretary (PIL No. 70/7892) in conformità con Biologica Servizi Management Group e il Comitato Etico Servizi biologica, SGUL, Londra, UK. Sono stati fatti tutti gli sforzi per ridurre il numero di animali utilizzati e di affinare sia le procedure e allevamento, al fine di ridurre al minimo le sofferenze e migliorare il benessere.

1. Preparazione degli strumenti, anestetici, e fluorescente Dye

1. Utili....

Results

Sindrome di Bardet-Biedl (BBS) è una ciliopathy eterogeneo rara che colpisce circa 1: 160.000 persone in tutto il mondo ^16. I pazienti presentano una serie di problemi connessi compresi reni policistici, successivamente i pazienti spesso richiedono dialisi o il trapianto ^24. ESRF è la causa più comune di morte in BBS, con circa il 30% dei pazienti che sviluppano CKD ^16. Attualmente, 20 geni non correlati sono stati implicati in BBS senza pubblicato associazione genotipo-fenotipo. Le prot.......

Discussion

Zebrafish offrire un prezioso strumento per modellare malattia genetica umana, il loro impiego come strumento scientifico per la ricerca in vivo hanno consentito studi dettagliati sulla composizione genetica di molti sistemi biologici, tra cui il rene. Ora molto è capito su come si sviluppa il rene zebrafish e funzioni. Le somiglianze sorprendenti per nefrogenesi umana e omologia con i geni che causano malattie ²¹ ha illustrato come zebrafish sono diventati fondamentali per capire come difetti di fun.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
P-97 SUTTER Estrattore per micropipette di tipo fiammeggiante/marrone	Intracel	P-97
capillari a parete standard in borosilicato	Harvard Apparatus	30-0017
Vetrini per microscopio VWR	International	631-0109
Colla per resina epossidica	Evo-Stik
Rhodamine B 10.000 MW etichettato Dextran	Life technologies	D-1824
N-feniltiourea	Sigma-Aldrich	P7629
Blu di metilene	Sigma-Aldrich	M9140
Etile 3-amminobenzoato metanosolfonato sale	Sigma-Aldrich	A5040
metilcellulosa	Sigma-Aldrich	M0512
compressore d'aria	Jun-Air	OF302-15
Picospritzer III	Strumenti Parker	051-0500-900
Micromanipolatore compatto di controllo a 3 assi	Marzhauser	MM33
Stereomicroscopio da dissezione	Nikon	SMZ1000
punte per microloader	Eppendorf	5242956003
Dumont #5 pinze	Micrometro da palcoscenico Sigma-Aldrich	F6521
	Pyser- SGI	02A00404