Un metodo semplice e poco costoso per la determinazione fredda sensibilità e adattamento nei topi

Summary

Il Cold Plantar Assay (CPA) misura la risposta al freddo tra 30 °C e 5 °C e può anche misurare l'adattamento al freddo. Questo protocollo descrive come utilizzare il CPA per misurare l'ipersensibilità al freddo, l'analgesia e l'adattamento nei topi.

Abstract

L'ipersensibilità al freddo è un problema clinico serio, che colpisce un ampio sottogruppo di pazienti e causa una significativa diminuzione della qualità della vita. Il test plantare a freddo consente la valutazione oggettiva ed economica della sensibilità al freddo nei topi e può quantificare sia l'analgesia che l'ipersensibilità. I topi vengono acclimatati su una lastra di vetro e una pallina di ghiaccio secco compressa viene tenuta contro la superficie di vetro sotto la zampa posteriore. La latenza al prelievo dal vetro di raffreddamento viene utilizzata come misura della sensibilità al freddo.

La sensazione di freddo è importante anche per la sopravvivenza nelle regioni con sbalzi di temperatura stagionali e, per mantenere la sensibilità, gli animali devono essere in grado di regolare le loro soglie di risposta termica in modo che corrispondano alla temperatura ambiente. Il Cold Plantar Assay (CPA) consente anche lo studio dell'adattamento ai cambiamenti della temperatura ambiente testando la sensibilità al freddo dei topi a temperature comprese tra 30 °C e 5 °C. I topi vengono acclimatati come descritto sopra, ma la lastra di vetro viene raffreddata alla temperatura iniziale desiderata utilizzando scatole di alluminio (o pacchetti di fogli di alluminio) riempite con acqua calda, ghiaccio umido o ghiaccio secco. La temperatura della piastra viene misurata al centro utilizzando una sonda a termocoppia a filamento T. Una volta che la piastra ha raggiunto la temperatura di partenza desiderata, gli animali vengono testati come descritto sopra.

Questo test permette di testare i topi a temperature che vanno da innocue a nocive. Il CPA produce risposte comportamentali inequivocabili e coerenti nei topi non feriti e può essere utilizzato per quantificare sia l'ipersensibilità che l'analgesia. Questo protocollo descrive come utilizzare il CPA per misurare l'ipersensibilità al freddo, l'analgesia e l'adattamento nei topi.

Introduction

Misurare reattività freddo nei roditori è importante per migliorare la comprensione dei potenziali meccanismi di sensibilità freddo negli esseri umani sia in condizioni normali e patologiche. The Cold plantare Assay (CPA), originariamente sviluppato diversi anni fa ^1, è stato progettato per generare risposte riproducibili, inequivocabili murine comportamentali a uno stimolo freddo consegnato a RT. Miglioramenti più recenti di questo test hanno permesso la misurazione riproducibile di sensibilità fredda in un ampio intervallo di temperature ^2. Entrambe le versioni sono inoltre progettati per essere relativamente alto rendimento, e poco costoso da....

Protocol

Tutti i protocolli topo erano in conformità con le linee guida del National Institutes of Salute e sono state approvate dal comitato Animal Studies di Washington University School of Medicine (St. Louis, MO).

1. Preparare la piastra di prova e Contenitori

1. Pulire la superficie del vetro.
2. Fissare la T-tipo di sonda termocoppia filamento alla superficie al centro della lastra di vetro con il nastro di laboratorio.
3. Posizionare dello stabulario sulla lastra di vetro in una singola linea lungo il centro del piatto.
4. Infilare la sonda della termocoppia attraverso il recinto degli animali centro e collegarl....

Results

Le risposte comportamentali indotte da topi a partire da 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C, e 12 ° C sono altamente riproducibili (Figura 4A) ^20. Per misurare lo stimolo freddo generato sotto il hindpaw, i topi sono stati anestetizzati con ketamina / xilazina / acepromazina cocktail e le zampe sono state fissate sul vetro sulla cima di una termocoppia di tipo T filamento (Figura 4B) ^20. Il vetro è stato raffreddato o riscaldato alla gamma di test desiderato. Sebbene la piastr.......

Discussion

Il CPA può essere utilizzato per valutare la sensibilità al freddo e l'adattamento al freddo nei topi. Fornisce un modo economico ed efficiente per misurare le risposte al freddo in animali acclimatati e non trattenuti in un'ampia varietà di intervalli di temperatura. Fornisce inoltre una risposta comportamentale inequivocabile con una variabile di output facilmente quantificabile e analizzabile. È già stato utilizzato per valutare i cambiamenti nella sensibilità al freddo indotti dall'infiammazione¹, dal .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sonda a termocoppia di tipo T	Physitemp	IT-24p	Utilizzato per misurare la temperatura superficiale del vetro (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)
Lastra di vetro	Azienda vetraria locale (a St. Louis, Stemmerich Inc)		Utilizziamo vetro pyrex (galleggiante borosilicato). Il nostro laboratorio utilizza generalmente 1/4'', ma anche 3/16'' e 1/8'' sono utili
Registratore di dati termici	Extech	EA15	Termologger per tenere traccia della temperatura del vetro (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
Siringa da 3 ml	BD	309657	La parte superiore viene tagliata e il ghiaccio secco viene compresso nella siringa per generare una sonda fredda
Computer	Se si utilizza il logger Extech, qualsiasi Pcwill funzionerà
Scatole di alluminio	University a St. Louis le scatole dell'officina		sono lunghe 3 ', larghe 4,5 '' e alte 3 '' con un coperchio sigillato. C'è un foro da 1/2" praticato in un lato corto di ogni scatola, vicino al fondo. Questi fori vengono riempiti con rubinetti di gomma quando le scatole sono riempite con ghiaccio umido o acqua calda.
Circolatore d'acqua riscaldato	VWR		Qualsiasi modello di circolatore d'acqua con pompa funzionerà
Ago da 21 G	BD	305165	La dimensione esatta dell'ago non è importante
Timer			Qualsiasi timer manuale funzionerà
Specchio			Qualsiasi specchio piatto funzionerà