Questo manoscritto descrive un protocollo di labirinto d'acqua Morris (MWM) su misura per l'uso con un modello murino di Alzheimer comunemente usato. L'MWM è ampiamente utilizzato nei modelli murini transgenici. L'implementazione di una procedura sensibile alla deformazione di fondo del modello murino è essenziale per rilevare le differenze di gruppo.
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Articolo metodologico
Morris water maze Test: Ottimizzazione per ceppo di topi e Ambiente di prova
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il labirinto d'acqua di Morris (MWM) è un compito comunemente usato per valutare l'apprendimento spaziale e la memoria ippocampale-dipendente in modelli murini transgenici di malattia, compresi i disturbi neurocognitivi come il morbo di Alzheimer. Tuttavia, il ceppo di fondo del modello murino utilizzato può avere un effetto sostanziale sul fenotipo comportamentale osservato, con alcuni ceppi che mostrano una capacità di apprendimento superiore rispetto ad altri. Per garantire che le differenze tra topi transgene negativi e transgenici positivi possano essere rilevate, è essenziale identificare una procedura di addestramento sensibile al ceppo di fondo. L'incapacità di adattare il protocollo MWM alla deformazione di fondo del modello murino può portare a un sottoallenamento o a un sovraallenamento, mascherando così le differenze di gruppo nelle prove con sonda. Qui viene descritto un protocollo MWM su misura per l'uso con lo sfondo F1 FVB/N x 129S6. Questo è un ceppo di fondo frequentemente utilizzato per studiare gli effetti dipendenti dall'età del mutante P301L tau (topi rTg(TauP301L)4510) sui deficit di memoria associati alla malattia di Alzheimer. Viene anche descritta una strategia per la riottimizzazione, come dettato dal particolare ambiente di test utilizzato.
Introduzione
Modelli di topi transgenici sono stati strumentali nel valutare la fisiopatologia della malattia di Alzheimer (AD), così come il potenziale di interventi terapeutici. Compiti cognitivi, come la Morris water maze (MWM), sono comunemente usati con questi modelli per identificare i correlati molecolari di deficit di memoria e per valutare l'efficacia dei farmaci pre-clinici. È essenziale, tuttavia, che la gamma dinamica del compito cognitivo essere sufficientemente ampia per rilevare gli effetti del trattamento sottili. Con i modelli murini di AD, deficit cognitivi sono tipicamente età-dipendente, e topi mostrano cali progressivi in termini di prestazioni (ad es....
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Protocollo
Tutte le procedure sperimentali sono state condotte in conformità con gli standard di cura e l'uso Comitato Istituzionale Animal (IACUC) e approvati dal IACUC della West Virginia University.
1. Pre-gestione
- Configurazione del Pool
- Prop piscina pre-trattamento per cui è sollevato ad un'altezza comoda.
- Inserire 2 L di acqua (21 ° C) in piscina pre-movimentazione ad un livello di circa 1 cm.
Nota: non aggiungere coloranti.
- Procedura
- Portare i topi dal vivaio alla sala prove.
- Verificare l'identificazione del soggetto (numero soggetto, coda tatuaggio, clip ....
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Risultati
Abbiamo usato il Morris water maze per studiare gli effetti del beta-amiloide (Tg2576 topi) e mutanti P301L tau (RTG (tauP301L) 4510 topi) sulla memoria di riferimento spaziale (ad esempio, 1,5,7,8). Figura 3 è il risultato rappresentativo segnalato nel nostro studio che esamina l'effetto di insorgenza nell'età adulta espressione P301L tau sull'apprendimento e la memoria 8, utilizzando il test Ambiente A. Per valutare le capacità motorie e visive, i topi sono s.......
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Discussione
Il compito MWM è ampiamente utilizzato per valutare l'apprendimento spaziale e la memoria. Tuttavia, la robustezza di questo compito può essere influenzata da molti fattori e richiede l'ottimizzazione sia bassa tensione e ambiente di prova. Come mostrato in figura 4, lo stesso protocollo di allenamento e applicata indicazioni visive utilizzate in due diverse camere di prova (dimensione equivalente e layout) ceduto prestazioni della sonda significativamente differenti. Dal momento che molte carat.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institute of scienze mediche generali (Reed / Engler-Chiurazzi - U54GM104942), l'Istituto nazionale per i disordini neurologici e Stroke (Ashe - R01NS33249, R01NS63249 e R01NS79374), Cobre (Engler-Chiurazzi - P20GM109098), il Associazione Alzheimer (Reed - NIRG-12-242187), un WVU Faculty Research Senato Grant (Reed), una borsa di WVU PSCOR (Reed), e fondi interni del WVU College of Ufficio Medicina Dean (Engler-Chiurazzi). Il contenuto è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente il punto di vista ufficiale della NIH o Associazione Alzheimer.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Software di tracciamento del visualizzatore | Biobserve | Questo particolare software non è un requisito: sono disponibili altri sistemi di tracciamento Piscina | |
| di pre-movimentazione | Dimensioni circa 1 piede di larghezza x 2 piedi di lunghezza x 1,5 piedi di profondità | ||
| Bicchiere di | 1 L | ||
| Paletta | |||
| Piccola rete | |||
| È | |||
| possibile utilizzare qualsiasi vernice colorata; tuttavia, la maggior parte dei programmi software di tracciamento richiede che la vernice contrasti con il colore dell'animale. | |||
| Piattaforma | Il colore dovrebbe essere in contrasto con quello del labirinto | ||
| Bastone per | |||
| Tende Vasca | |||
| Solitamente di colore bianco; circa 4 piedi di diametro | |||
| Piattaforma | Dipinto dello stesso colore dell'acqua |
Riferimenti
- Ramsden, M., et al. Age-dependent neurofibrillary tangle formation, neuron loss, and memory impairment in a mouse model of human tauopathy (P301L). The Journal of Neuroscience. 25, 10637-10647 (2005).
- Attar, A., et al.
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Ristampe e permessi
