Questo articolo descrive un protocollo dettagliato per produrre una ferita da taglio al proencefalo nei topi adulti. La coltellata induce una grave gliosi reattiva e la formazione di cicatrici gliali che possono essere successivamente esaminate con i metodi standard di immunoistochimica.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Attivazione reattiva Gliosi
In questo articolo
Sommario
Abstract
A seguito di una lesione al SNC, gli astrociti subiscono un'ampia gamma di cambiamenti biochimici, morfologici e molecolari collettivamente indicati come astrogliosi reattiva. Gli astrociti reattivi esercitano effetti sia infiammatori che protettivi che inibiscono e promuovono, rispettivamente, la riparazione neurale. I meccanismi alla base delle diverse proprietà funzionali dell'astrogliosi reattiva non sono ben compresi. Raggiungere una maggiore comprensione di questi meccanismi è fondamentale per lo sviluppo di strategie terapeutiche per il trattamento del SNC danneggiato. Qui dimostriamo un metodo per innescare l'astrogliosi reattiva nel prosencefalo del topo adulto utilizzando una lesione da taglio del proencefalo. Questo modello di lesione è semplice, affidabile e richiede solo un dispositivo stereotassico e una lama di bisturi per produrre la lesione. L'uso delle lesioni da taglio come modello di lesione nel proencefalo è ben consolidato e suscettibile di studi che affrontano un'ampia gamma di esiti neuropatologici, come la degenerazione neuronale, la neuroinfiammazione e le interruzioni della barriera ematoencefalica (BEE). Pertanto, il modello di coltellata del proencefalo funge da potente strumento che può essere applicato per un'ampia gamma di studi sulla risposta del SNC al trauma.
Introduzione
Una delle principali sfide per lo sviluppo di terapie efficaci per il trattamento del SNC danneggiato è una comprensione incompleta dei complessi eventi multicellulari che vengono innescati dal trauma. Gli astrociti reattivi stanno ottenendo sempre più riconoscimenti come bersaglio promettente per nuove terapie1. Sebbene storicamente considerati ostili alla riparazione neurale, gli astrociti reattivi sono ora riconosciuti come componenti critici di una complessa risposta neuroprotettiva multicellulare che include l'attenuazione dei processi infiammatori e la limitazione del danno secondario e della neurodegenerazione2-6. Sebbene le caratteristich....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Adulti (3-4 mesi) topi maschi su un misto C57BL / 6 di fondo sono stati utilizzati in questo protocollo. Gli animali sono stati tenuti al 12 hr luce / buio ciclo, e consentito l'accesso gratuito al cibo e all'acqua. Tutte le procedure eseguite in questo protocollo sono stati condotti secondo protocolli approvati dalla University Istituzionale cura e l'uso degli animali Comitato Drexel.
1. Preparazione Area Chirurgica
- Disinfettare tavolo operatorio con il 70% di etanolo, quindi coprire l'intera panchina chirurgica con assorbenti e organizzare strumenti chirurgici adiacente stereotassica.
- Impostare attre....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Dato che gli animali sottoposti a questa procedura non richiedono periodi sopravvivenza specializzati cura post-operatorio, brevi o time-lungo termine sono facilmente incorporati nello studio, a seconda delle necessità di indagare patologie acute o croniche a seguito di infortunio. Caratteristiche principali di gliosi reattiva, come l'up-regolazione di GFAP e l'ipertrofia del soma, si può osservare come già 2-3 giorni dopo un trauma. La fase di picco della proliferazione di astrociti reattivi è nei giorni 3-5 se.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
E 'fondamentale che il cranio o dura sottostante non vengano danneggiati durante la perforazione. Utilizzare una leggera pressione durante la perforazione al fine di garantire il cranio non è forato. Inoltre, si deve prestare attenzione mentre si solleva il pezzo del cranio per garantire la dura non è decollato con l'osso.
L'infortunio prosencefalo pugnalata qui descritto modelli una ferita penetrante al SNC. Anche se meno clinicamente traducibile di modelli TBI come la FPI e CCI.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo Katherine Clark per l'assistenza tecnica. A.D.R.G. è finanziato in parte da 5K01MH097957-03
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Stereotax | Harvard Apparatus | 726049 | |
| Micro trapano ad alta velocità | Harvard Apparatus | 724950 | |
| lama per bisturi in acciaio inossidabile, #11 | MedVet | JOR581S | |
| 5/45 pinze angolate | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Spugna Gelfoam 12 cm x 7 mm | Fisher | NC9841478 | |
| Rb anti-GFAP | DAKO | Z033429-2 | Diluizione - 1:20.000 (campo chiaro); 1:1.000 (fluorescenza) |
| Shp anti-BrdU | Abcam | ab1893 | Diluizione - 1:20.000 (campo chiaro); 1:500 (fluorescenza) |
| Capra biotinilata anti-coniglio | Vector Laboratories | BA-1000 | Diluizione - 1:400 (campo chiaro) |
| Coniglio biotinilato anti-pecora | Vector Laboratories | BA-6000 | Diluizione - 1:400 (campo chiaro) |
| Alexafluor 488 capra anti-coniglio | Technologies | A-11008 | Diluizione - 1:400 (campo chiaro) |
| Alexafluor 568 asino anti-pecora | Life Technologies | A-21099 | Diluizione - 1:1.000 (fluorescenza) |
| DAPI Nucleic Acid Stain | Life Technologies | D3571 | Diluizione - 1:1.000 (fluorescenza) |
| Cresyl Violet Acetate | Sigma Aldrich | C5042-10G | Diluizione - 1% (campo chiaro) |
Riferimenti
- Hamby, M. E., Sofroniew, M. V. Reactive astrocytes as therapeutic targets for CNS disorders. Neurotherapeutics. 7 (4), 494-506 (2010).
- Bush, T. G., et al. Leukocyte infiltration, neuronal degenerati....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
