Articolo metodologico

Rene Murine Tecnica trapianto

DOI:

10.3791/52848

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20 ottobre 2015

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1Colorado Center for Transplantation Care, Research and Education, University of Colorado, Denver, 2Division of Pulmonary Sciences and Critical Care Medicine, University of Colorado, Denver, 3Department of Medicine, Division of Renal Diseases and Hypertension, Medical Center and University of Colorado, Denver, 4Department of Surgery, Division of Transplant Surgery, University of Colorado School of Medicine, University of Colorado-Denver, 5Renal Section, Denver Veterans Affairs Medical Center

In questo articolo

Sommario

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L'obiettivo di questo manoscritto è descrivere i passaggi necessari per eseguire un trapianto di rene in un topo, prestando particolare attenzione ai dettagli dell'anastomosi arteriosa.

Abstract

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La prima tecnica di trapianto di rene di topo è stata pubblicata nel 19731 dal laboratorio Russell. Sebbene ci siano voluti alcuni anni prima che altri laboratori diventassero esperti e utilizzassero questa tecnica, ora è ampiamente utilizzata da molti laboratori in tutto il mondo. Un significativo perfezionamento della tecnica originale che utilizzava l'aorta del donatore per formare l'anastomosi arteriosa al posto dell'arteria renale è stato sviluppato e riportato nel 1993 da Kalina e Mottram 2 con un ulteriore progresso proveniente dallo stesso laboratorio nel 1999 3. Sebbene si possa diventare esperti in questo modello, una ricerca in letteratura rivela che molti laboratori sperimentano ancora un'alta percentuale di perdita di innesto a causa di trombosi arteriosa. Descriviamo qui una tecnica che è stata ideata nel nostro laboratorio che riduce notevolmente il trombo arterioso riportato da altri 4,5. Ciò si ottiene formando una cuffia del tallone e della punta dell'aorta infra-renale del donatore che facilita un'anastomosi più ampia e un flusso sanguigno più diretto nel rene.

Introduzione

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Dal 1973 il modello di trapianto di rene nei topi è stato un valido strumento di ricerca, ma problemi tecnici hanno ostacolato la sua diffusione. Nel corso degli anni numerosi lavori sono stati pubblicati in dettaglio i miglioramenti / perfezionamenti a questa procedura. Come modello di principalmente vascolarizzato trapianto di organo solido questa procedura è probabilmente secondo solo al modello di trapianto di cuore eterotopico che è stato anche ideato dal laboratorio di Russell nel 1973 6. Entrambi i modelli si prestano alla ricerca sulle risposte di rigetto allogenico, lo sviluppo di ritardata funzionalità del trapianto e danno da ischemia riperfusio....

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Protocollo

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Tutti i topi sono stati acquistati da The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME), e sono stati alloggiati in condizioni di libero patogeni presso l'Università del Colorado Denver, Facility Barbara Davis Animal Center secondo Linee Guida NIH e con l'approvazione della University of Colorado Denver IACUC.

1. Trapianto renale Harvest

  1. Sterilizzare tutti gli strumenti, indossare guanti sterili durante tutta la procedura e mantenere un campo sterile. Eseguire tutti gli interventi chirurgici con l'uso di un microscopio operatorio.
  2. Rimuovere chirurgicamente reni topo donatore da (kg IP 60mg /) donatori pentobarbital-....

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Risultati

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Questa tecnica chirurgica consente sia per i semplici studi di sopravvivenza / rigetto dell'organo o protocolli sperimentali piuttosto complessi. Nelle figure di seguito dimostriamo i vantaggi di utilizzare questo miglioramento tecnica anastomosi arteriosa. Utilizzando questa tecnica abbiamo ridotto significativamente l'incidenza di trombosi arteriosa dal 35% allo 0%, aumentando così la produttività. Abbiamo usato questa tecnica per oltre un anno con lo stesso risultato trombosi 0% mantenuto. La Figura .......

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Discussione

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Padroneggiare questa tecnica di trapianto è difficile, ma una volta realizzato, è uno strumento di ricerca molto potente. Il paziente chirurgo / ricercatore sarà ricompensato dalla cura dei dettagli e la coerenza della tecnica, che è la chiave per padroneggiare qualsiasi procedura chirurgica, a maggior ragione nei piccoli modelli animali. Le difficoltà tecniche di padroneggiare il trapianto di rene di topo sono molte pieghe, ed è molto probabile che l'esperienza in altri modelli di piccole dimensioni trapianto anima.......

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

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Questo lavoro è stato sostenuto in parte da 1R03DK096151.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
StrumentoRoboz #Fine Science Tools #Arosurgical #
Pinza per microdissezione diritta #5RS-501511295-51
Pinza per microdissezione curva #7RS-504711297-00
Pinza perRS-513711052-10
Forbici per microdissezione Vannas, corteRS-561009.140.08
Forbici per microdissezione, dritte, affilate, lunghe11.602.11
Porta aghi con manico a molla micro11.549.15
per zanzare diritta91308-12
Forbici per microdissezione, diritte, smussateRS-596214078-10
Forbici per microdissezione, curve, smussateRS-598114079-10
Micro divaricatoreRS-6540
Vassoio portastrumenti, 10" x 6 ½ ” x ¾ "RT-1350S
Sutura in seta, 5/0, bobina da 22,5 m18020-50
Applicatori in
BD 1cc insulina, #329424Fisher-brand, #23-400-100
di iodio povidone
PDI, #B40600
4/0 Cravatte
Cotone domestico autoclavato con strumenti
microdissezione curva Pinza Sutura 10/0 in nylon T4A10Q07 5/0 in seta E19A05N Guanti Drappeggi Biogel da Medex Supply Precept, #64-9012-9 Siringhe cotoneTamponi in cotone

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplant Proc. 5 (1), 721-725 (1973).
  2. Kalina, S. L., Mottram, P. L. A microsurgical technique for renal transplantation in mice. Aust N Z J Surg.

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