Isolamento e propagazione di cellule tumorali circolanti da un mouse cancro modello

Sommario

È stato dimostrato che le cellule tumorali circolanti (CTC) svolgono un ruolo importante nelle metastasi tumorali. Qui, viene descritto un metodo per l'isolamento e la propagazione di CTC dal sangue intero di un modello di tumore murino singenico di metastasi da carcinoma epatocellulare (HCC).

Abstract

Le metastasi tumorali sono la principale causa di decessi associati al cancro. Studi recenti hanno dimostrato che le cellule tumorali circolanti (CTC) sono importanti nelle metastasi del cancro. Infatti, il numero di CTC è correlato alle dimensioni del tumore. Qui, viene fornita una descrizione dettagliata di una metodologia per l'isolamento e la propagazione di CTC da un modello murino singenico di carcinoma epatocellulare (HCC) che consente l'analisi a valle di meccanismi molecolari potenzialmente importanti delle metastasi del tumore d'organo solido. Questo metodo è efficiente e riproducibile. È una tecnica non invasiva e, quindi, ha il potenziale per sostituire la biopsia invasiva dei tessuti dell'uomo che può essere associata a complicanze. Pertanto, il metodo qui discusso consente l'isolamento e la propagazione delle CTC da campioni di sangue intero in modo che possano essere esaminate e caratterizzate. Ciò ha il potenziale per l'adattamento futuro per applicazioni cliniche come la diagnosi e la terapia mirata personalizzata.

Introduzione

La comunità di ricerca sul cancro è a conoscenza dell'esistenza di cellule tumorali circolanti (CTC) da quando è stata osservata per la prima volta da Thomas Ashworth nel 1869¹. Da allora, le CTC hanno dimostrato di essere importanti nelle metastasi tumorali e nella progressione della malattia^2-5. Oggi, i tumori solidi sono una delle principali cause di morbilità e mortalità in tutto il mondo. Le CTC sono cellule rare che originano da tumori primari e viaggiano attraverso il flusso sanguigno verso diversi organi, di cui solo una piccola frazione si sviluppa in metastasi^2-5. In particolare, esiste una correlazione positiva tra le dimens....

Protocollo

Etica Dichiarazione: Tutti gli studi su animali sono stati approvati dalla cura e l'uso degli animali Comitato Istituzionale (IACUC) di Hunter College della City University di New York.

1. Procedure di pre-esperimento

1. All'arrivo alla struttura animale, inizialmente ospitare 3 topi BALB / c ad una gabbia con un letto di top e trucioli di legno filtrata. Assicurarsi che i topi hanno libero accesso a cibo, Purina roditori chow, e acqua. Biancheria da letto e cibo devono essere cambiati due volte a settimana, mentre le gabbie devono essere puliti una volta a settimana.
2. Un'anestesia generale in topi usando un v....

Risultati

La metodologia qui descritta ha dimostrato che CTC possono essere isolati. I topi sono stati umanamente eutanasia alla sperimentale punto finale. Il processo ha coinvolto anidride carbonica per asfissia, dissanguamento intra-cardiaca, e dislocazione cervicale. Uno schema di passi principali della procedura sono illustrati in Figura 2. Campioni di sangue intero prelevato da dissanguamento intra-cardiaca sono stati elaborati usando il protocollo descritto sopra. Dopo di che, la centrifuga.......

Discussione

In questo studio, è stato descritto come isolare e propagare le CTC dal sangue intero di un topo singenico con HCC. L'obiettivo di questo lavoro è quello di migliorare gli studi in corso sui meccanismi delle metastasi tumorali.

Un fattore che contribuisce alla prognosi infausta di molti tumori è la mancanza di una diagnosi tempestiva e la conseguente diffusione diffusa della neoplasia3^. Le CTC originano da tumori primari e si diffondono attraverso il flusso sanguigno a organi dista.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Eparina Sale Sodico 1 g	VWR	89508-852
BTX Tubo Micro 1,5 ml Trasparente NS	VWR	89511-254	1,5 ml  apirogeno Eppendorf
Tubes Ago Sterile Disp BD 25 G x 1 in	VWR	BD305125	25 G Ago
Slp Tip SRNG 1 ml 200 ciascuno per confezione	VWR	BD309659	1 ml di punta per siringa
Siringa 1 ml leur lok Pk 100	VWR	BD309628	siringa da 1 ml
VWR Pinze Tessuto 6	VWR	82027-446	Pinze
Cyromold intrm 15 x 15 x 5 mm PK 100	VWR	25608-924	Cyromold
Cryo-oct compund 4 oz	VWR	25608-930	Oct compound
VWR Slide sprfrst 25 x 75 mm PK72	VWR	48311-703	Vetrini
VWR Cover Glass #2 22 x 50 mm	VWR	48-382-128	Vetro di copertura
VWR Slide Box True North Fm Pu	VWR	89140-278	Slide Box
Super HT PAP Pen	VWR	89427-058	PAP pen
Water RNASe and DNAse free 2 L	VWR	101454-204	Tampone acqua privo di nucleasi
Tris Ultra Pure Grade 500 g	VWR	97061-796	Tris Buffer
Ammonium Chloride ACS Grade 2, 5 Kg	VWR	97062-048	Tampone per cloruro di ammonio
Piatto per coltura tissutale per falco 60 x 15 mm	Piatto per coltura tissutale	VWR	353002
Candeggina germicida Clorox, normale	VWR	89501-620	Candeggina Clorox
PBS, 1x (soluzione salina tamponata con fosfato) senza calcio e magnesio (500 ml)	Thermo Fischer Scientific	21-040-CV	PBS, 1x
DMEM, 1x  con 4,5 g/L di glucosio & L-glutammina senza piruvato di sodio	Thermo Fischer Scientific	10-017-CV	DMEM 1x terreno per cellule BNL 1ME A.7R.1
Siero fetale bovino	Thermo Fischer Scientific	35-010-CV	FBS
Penicillina Streptomicina soluzione, 100x	Thermo Fischer Scientific	30-002-Cl	Penicillina Streptomicina
Sorvall Biofuge pico	Thermo Fischer Scientific	75002411	Centrifuga 13.000 giri/min

in polistirene