Gli astrociti nel SNC cambiano le loro proprietà funzionali e strutturali in risposta a stimoli dannosi. Questo rapporto presenta un protocollo per la valutazione della morfologia tridimensionale degli astrociti in condizioni di malattia o dopo interventi terapeutici.
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Articolo metodologico
Protocollo per tridimensionale confocale morfometrica Analisi di astrociti
In questo articolo
Sommario
Abstract
Mentre le cellule gliali del cervello, astrociti hanno diversi ruoli funzionali nel sistema nervoso centrale. In presenza di stimoli nocivi, astrociti modificano le loro proprietà funzionali e strutturali, una condizione chiamata astrogliosis reattiva. Qui, un protocollo per la valutazione delle proprietà morfologiche di astrociti è presentato. Questo protocollo include quantificazione dei 12 parametri diversi cioè la superficie e il volume del tessuto coperto da una astrociti (territorio astrociti), l'intero astrociti compresi rami, corpo cellulare, e nucleo, così come la lunghezza totale e il numero di rami, l'intensità della fluorescenza immunoreattività di anticorpi utilizzati per il rilevamento astrociti, e la densità astrociti (numero / 1.000 micron 2). A questo scopo tridimensionali (3D) immagini microscopiche confocale sono stati creati, e immagini 3D software di analisi come Volocity 6.3 è stato utilizzato per le misurazioni. Tessuto cerebrale di ratto esposti a beta amiloide 1-40 1-40), con o senza un intervento terapeutico è stato utilizzato per presentare il metodo. Questo protocollo può essere utilizzato anche per l'analisi morfometrica 3D di altre cellule da in vivo o in vitro condizioni.
Introduzione
Nel sano il sistema nervoso centrale (SNC), astrociti svolgono un ruolo importante nella regolazione del flusso di sangue, metabolismo energetico, la funzione sinaptica e plasticità, e ionico extracellulare e neurotrasmettitore omeostasi 1-3. Inoltre, astrociti rispondono a stimoli diversi nocive e condizioni anomale, come traumi, infezioni, ischemia o neurodegenerazione con astrogliosi reattiva che è caratterizzata da ipertrofia, la proliferazione e rimodellamento funzionale degli astrociti 4,5.
Astrogliosis reattiva può progettare la risposta infiammatoria e processo di riparazione del tessuto e, quindi, può influe....
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Protocollo
Questo studio è stato condotto in conformità con le politiche contenute nel Manuale per la cura e l'uso di animali da laboratorio (NIH) approvate dal Comitato Etico dell'Iran dell'Università di Scienze Mediche (Teheran, Iran).
1. Gli animali, Chirurgia e campioni preparati
NOTA: Preparare il tessuto cerebrale per il 3D confocale analisi microscopica.
- Animali Dividere casualmente in due gruppi: Ap 1-40 -injection (n = 8), e Ap 1-40 -injection con trattamento genisteina (n = 8); amministrare genisteina (10 mg / kg diluito in un veicolo come olio di ricino polietossila....
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Risultati
Questa sezione presenta alcuni esempi delle osservazioni qualitativi e quantitativi prodotti da analisi morfometrica 3D. Per i risultati completi di tutti i 12 parametri menzionati in precedenza, si prega di consultare la nostra precedente pubblicazione 10.
Osservazioni qualitative
Gli astrociti esposti rami sottili o spessi che erano solitamente lunghi in Ap 1-40 ratti iniettati (Figura 1). Alcuni piccoli astrociti a forma .......
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Discussione
Nel protocollo corrente, abbiamo impiegato 3D morfometria confocale per valutare 12 parametri diversi che sono stati associati con astrociti morfologia. A questo scopo, tessuti ippocampali di ratto con Ap 1-40 - stati usati astrogliosis indotta, con o senza pretrattamento genisteina come agente anti-infiammatorio. Utilizzando le immagini 3D e software morfometriche, siamo stati in grado di mostrare l'effetto di genisteina sulla astrogliosi cioè morfologia degli astrociti.
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Dichiarazioni
Questo lavoro è stato sostenuto da finanziamenti del Consiglio della Contea di Östergötland, (Svezia) e il cellulare e molecolare Research Center presso l'Iran Università degli Studi di Scienze Mediche (Teheran, Iran).
Ringraziamenti
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Beta amiloide 1-40 | Sigma Aldrich | 79793 | Mantenere in -70 ° C |
| Genistein | Sigma Aldrich | 446-72-0 | mantenere in -20 ° |
| C anticorpi policolonali di coniglio contro la proteina acida fibrillare gliale | DAKO | Z0334 | |
| suino coniugato con fosfato alcalino anti-coniglio Anticorpi IgG | DAKO | ||
| Cromogeno permanente liquido | DAKO | K0640 | |
| Tampone substrato rosso permanente liquido | DAKO | K0640 | |
| Cremophor EL | Sigma Aldrich | 27963 | Olio di ricino polietossilato - Passaggio 1.1 |
| LSM 700 Microscopia a scansione laser confocale | Carl Zeiss | ||
| Volocity 6.3 | Perkin Elmer Inc., | ||
| Analisi delle immagini 2000 | Tekno | ||
| Stoelting | |||
| Graph pad Prism 5 | Graph pad software Inc. |
Riferimenti
- Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
- Pellerin, L., et al. Activity-dependent regulation of energy metabolism by astrocytes: an update. Glia. 55
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Ristampe e permessi
