Analisi di reclutamento delle cellule di tumore del polmone

Sommario

Questo manoscritto descrive un metodo per quantificare l'accumulo di cellule del tumore nei polmoni in un modello animale della metastasi del tumore.

Abstract

Per studiare i meccanismi molecolari che regolano la metastasi del tumore, sono stati proposti vari saggi usando il mouse come un animale di modello. Qui, dimostriamo un semplice test per valutare lo stravaso delle cellule di tumore o micrometastasi. In questa analisi, le cellule del tumore sono state iniettate attraverso la vena caudale, e dopo un breve periodo, i polmoni erano dissecati e digeriti per contare le cellule del tumore con etichetta accumulato. Questo test salta il passaggio iniziale dell'invasione del tumore primario nel vaso sanguigno e facilita lo studio di eventi in organi distanti dove si verifica la metastasi del tumore. Il numero di cellule iniettate nel vaso sanguigno può essere ottimizzato per osservare un numero limitato di metastasi. È stato segnalato che le cellule stromal in organi distanti contribuiscano alla metastasi. Così, questo test potrebbe essere uno strumento utile per esplorare il potenziale terapeutici farmaci o dispositivi per la prevenzione della metastasi del tumore.

Introduzione

Metastasi del tumore rappresenta alta mortalità nelle malattie legate al cancro. Dal punto di vista delle indagini a livello molecolare, metastasi può essere diviso in più fasi: l'inizio del tumore al luogo primario del tumore, la crescita del tumore primario e invasione nei circostanti tessuti, intravasation, circolazione attraverso i vasi sanguigni , lo stravaso in organi distanti e la ricrescita del tumore. Ogni fase prevede diversi insiemi di molecole/segnali¹.

Gli studi fin qui sono stati interessati con eventi che si verificano in organi distanti, prima le cellule tumorali circolanti nel sangue, che è anche con....

Protocollo

Tutte le procedure eseguite con i topi sono state approvate da Medical University animale ricerca comitato di Tokyo femminile.

1. iniezione della vena della coda del polmone di Lewis (LLC) delle cellule di Carcinoma

1. Mantenere le cellule LLC in DMEM completati con 10% FCS, in un umidificata 5% CO₂ incubatore a 37 ° C. Le cellule devono contenere un sistema di espressione della proteina fluorescente (ad es., GFP).
2. Rimuovere le cellule dalla piastra di coltura utilizzando un reagente di dissociazione non enzimatica delle cellule. Seguire il protocollo del produttore.
3. Raccogliere le cellule in u....

Risultati

I polmoni presentano molte cellule GFP-LLC 2 h dopo l'iniezione (Figura 1A). Dovrebbe essere notato che le macchie fluorescenti anche rilevate nel filtro rosso devono essere escluso dal conteggio del numero di cellulare. La maggior parte delle cellule LLC scomparsa dai polmoni 24 h dopo l'iniezione (Figura 1).

Per confermare il numero della GFP-LLC nei polmoni, uno dei .......

Discussione

Pre-trattamento dei topi con anticorpi, farmaci, una dieta ricca di grassi o medio del tumore-condizionato prima dell'iniezione delle cellule del tumore è possibile. Il passo più difficile in questo dosaggio è l'iniezione della vena della coda. Iniezione incompleta provoca dati inconcludenti. La vena della coda in C57BL/6 è particolarmente difficile da identificare, con conseguente iniezioni non riuscite. Ponendo i mouse su un rilievo di riscaldamento (° C 37) aiuta a dilata la vena di coda affinché iniezione diventa più.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Collagenasi	Sigma	C6885
Dispasi	Gibco	17105-041
Albumina sierica bovina	Sigma	A7030
DPBS	Gibco	14190-144	senza calcio, senza magnesio
Desossiribonucleasi I	Sigma	DN-25	tracce
tampone di lisi RBC	Sigma	R7757
Filtro cellulare	BD	352340	maglia 40 micrometri
Kit di marcatura a fluorescenza	Sigma	MIN26-KIT
DMEM	Gibco	11965-092
0.22 μ m filtro per siringa	sartorius	17597K
O.C.T. composto	Sakura Finetek	4583
4% Paraformaldeide fosfato soluzione tampone	Wako	163-20145