Gli autori presentano un protocollo per raccogliere salviette nasali suine per rilevare e isolare i virus dell'influenza A.
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Articolo metodologico
Panni nasale per l'influenza A rilevazione antivirus e isolamento da Suina
In questo articolo
Sommario
Abstract
Sorveglianza di virus dell'influenza A in suina è fondamentale per la salute umana e animale perché virus evolve rapidamente nella popolazione suina e nuovi ceppi sono continuamente emergendo. Swine sono in grado di essere infettati da diversi lignaggi di virus influenzale che li ospita importanti per la formazione e il mantenimento di nuova influenza A ceppi di virus. Campionamento suini in contesti diversi, quali aziende agricole suini, fiere agricole e mercati di animali vivi è importante fornire una visione completa di ceppi attualmente in circolazione IAV. La corrente ante mortem tecnica di campionamento gold-standard (ossia la raccolta di tamponi nasali) è laborioso perché richiede contenzione fisica dei suini. Salviette nasale coinvolgere strofinando un pezzo di tessuto attraverso il muso del maiale con minima o nessuna moderazione dell'animale. Il nasale wipe procedura è semplice da eseguire e non richiede personale con veterinaria professionale o formazione trattamento degli animali. Wentre leggermente meno sensibile di tamponi nasali, tassi di rilevazione di virus e l'isolamento sono sufficienti per fare nasale pulisce una valida alternativa per il campionamento singoli suini quando sono richiesti bassi di stress metodi di campionamento. Il protocollo procedura delinea i passi necessari per raccogliere un nasale valida wipe da un maiale individuo.
Introduzione
I virus influenzali A (IAV) causano malattie respiratorie in molte specie, tra cui uccelli domestici, suina, e gli esseri umani. A causa riassortimento del genoma segmentato IAV rapida evoluzione virale possono verificarsi e nuovi ceppi IAV emergere frequentemente. Maiali sono una specie che può servire come un vaso di miscelazione per riassortimento di IAV da più specie ospiti. 1 Al momento non ci sono tre principali sottotipi di IAV comunemente circolano tra nordamericano suina (H1N1, H1N2, H3N2), ma più introduzioni IAV da esseri umani hanno ha portato alla vasta diversità IAV all'interno di tali sottotipi. 2 rapida evoluzione della....
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Protocollo
Tutti i suini utilizzati per la raccolta dei seguenti dati sono stati protetti ai sensi della Istituzionale Animal Care and Use Committee Ohio State University (uso animale numero di protocollo 2009A0134-R1).
1. Preparazione di trasporto virale media e provate Fiale Collection
- Aggiungere 37 g di Brain Heart Infusion a 900 ml di acqua purificata e mescolare accuratamente con un ancoretta e agitatore magnetico mentre il riscaldamento a 70 ° C per sciogliere completamente la polvere.
- Autoclavare il brodo a 121 ° C per 15 min. Raffreddare sul banco fino brodo raggiunge la temperatura ambiente. Mettete in frigorifero a 4 °....
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Risultati
Uso di successo di questo metodo produce rRT-PCR risulta che, accompagnato con l'uso di un controllo interno durante l'estrazione di RNA e rRT-PCR, mostrano campioni non contenevano inibitori della PCR da eventuali detriti ambientali prelevati durante il campionamento. Dopo il campione inoculazione, virus sacche di isolamento dovrebbe essere libero di detriti visibile ambientale dal campione. Vi è ragionevole concordanza tra i risultati rRT-PCR e risultati di isolamento del virus con la consapevolezza che la PCR.......
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Discussione
La raccolta di campioni da suini utilizzando tamponi nasali di poliestere con la punta si è dimostrato utile nel condurre sorveglianza IAV; Tuttavia, l'uso della procedura di tampone nasale ostacola gli sforzi di sorveglianza dovuti all'uso richiesto di un laccio per contenzione. Salviette nasale rappresentano un affinamento delle attuali tecniche di campionamento suina per minimizzare lo stress sulle persone e maiali durante la raccolta del campione. Mentre il metodo è stato messo a punto e validato in contesti.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato finanziato in parte con fondi federali dai Centri di Eccellenza per la Ricerca e la Sorveglianza dell'Influenza (CEIRS), dall'Istituto Nazionale di Allergia e Malattie Infettive, dal National Institutes of Health, dal Dipartimento della Salute e dei Servizi Umani, nell'ambito del Contratto n. HHSN272201400006C.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| BBL Brain Infusione Cardiaca | Becton, Dickinson and Company | 211059 | |
| Penicillina G Sale di Sodio | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 u/mg |
| di Streptomicina Solfato | AMRESCO LLC | 0382 | |
| Soluzione di gentamicina | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
| Soluzione di amfotericina B | Fisher | S 24 25 | 250 ug/ml |
| Kanamicina solfato | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
| TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
| Flaconi diagnostici Nalgen | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE con chiusura in PP bianco |
| Spugna di garza Dermacea, 8 strati | Covidien | 441211 | 5,08 cm & volte; 5,08 cm (2 pollici & volte; 2 pollici) |
| Guanti da esame in nitrile | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |
Riferimenti
- Ma, W., Kahn, R. E., Richt, J. A. The pig as a mixing vessel for influenza viruses: Human and veterinary implications. J. Mol. Genet. Med. 3 (1), 158-166 (2008).
- Nelson, M. I., Vincent, A. L. Reverse zoonosis of influenza to swine: ne....
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Ristampe e permessi
