A Corsa Versatile Modello murino di Subcortical bianco Materia per lo Studio della assonale degenerazione e bianco Materia Neurobiologia

Sommario

Qui presentiamo la metodologia per la produzione di un ictus focale nella sostanza bianca murina mediante iniezione locale di un inibitore irreversibile dell'ossido nitrico sintasi endoteliale (eNOS) (L-Nio). Vengono presentate due varianti stereotassiche, il tracciamento neuronale retrogrado e la marcatura e dissezione di tessuti freschi che ampliano le potenziali applicazioni di questa tecnica.

Abstract

Ictus colpisce conti sostanza bianca fino al 25% delle presentazioni ictus cliniche, avviene automaticamente a velocità che possono essere 5-10 volte maggiore, e contribuiscono alla sviluppo di demenza vascolare. Pochi modelli di focale ictus sostanza bianca esistono e questa mancanza di modelli appropriati ha ostacolato la comprensione dei meccanismi coinvolti nella risposta neurobiologiche danno e la riparazione dopo questo tipo di ictus. La principale limitazione di altri modelli di ictus subcorticali è che essi non focally limitano l'infarto alla materia bianca o sono stati in primo luogo convalidato in specie non murini. Questo limita la capacità di applicare l'ampia varietà di strumenti di ricerca murini per studiare la neurobiologia di bianco ictus materia. Qui presentiamo una metodologia per la produzione affidabile di un ictus focale nella materia bianca murino utilizzando una iniezione locale di un inibitore irreversibile eNOS. Presentiamo anche diverse variazioni sul protocollo generale di cui due stereotassica unicovariazioni, retrograda tracing neuronale, nonché di etichettatura tessuto fresco e sezionamento che ampliare notevolmente le potenziali applicazioni di questa tecnica. Queste variazioni permettono di molteplici approcci per analizzare gli effetti neurobiologiche di questa forma comune e poco studiato di ictus.

Introduzione

L'ictus che colpisce la sostanza bianca sottocorticale è un'entità clinica comune, che rappresenta fino al 25% degli ictus clinici ogni anno negli Stati Uniti ¹. Anche il danno ischemico alla sostanza bianca si verifica silenziosamente a un tasso significativamente più elevato e contribuisce allo sviluppo della demenza vascolare ^2,3. Attualmente, i pazienti con questa forma di ischemia cerebrale hanno poche, se non nessuna, scelta terapeutica. Nonostante l'importanza clinica di questa malattia, esistono pochi modelli animali clinicamente rilevanti ^4,5.

L'obiettivo di questo protocollo è produrre una lesione....

Protocollo

L'uso di animali in questo protocollo è stata eseguita in conformità con le procedure approvate dalla University of California Los Angeles cura degli animali e del Comitato Usa.

Nota: Iniziare identificando la popolazione murina bersaglio. In studi precedenti, wild-type topi C57 / BL6 solo di sesso maschile sono stati utilizzati, tuttavia diversi topi transgenici o knockout possono anche essere utilizzati. Si noti che le coordinate stereotassica sono basati su C57 / BL6 anatomia. Si raccomanda che ogni utente inizialmente verificare la localizzazione del tratto di materia bianca.

1. Bianco Materia fase di as....

Risultati

Utilizzando il modello presentato, la sostanza bianca zampa anteriore sottostante sensomotorio corteccia può essere mirata in modo affidabile. Questo modello di ictus indotto chimicamente produce assonale focale e la perdita di mielina, astrocitosi, e microgliosis (figura 1), come è tipicamente visto in infarti lacunari umani. Utilizzando tre iniezioni, un modello clinicamente utile è stabilito con insufficienza presto compiti motori zampa anteriore ⁷ e una pi.......

Discussione

Un certo numero di modelli precedenti di ictus sottocorticale sono stati descritti tra cui iniezioni focali di endotelina-1 nella capsula interna, sostanza bianca sottocorticale e striato nel ratto ^{6,15 12-14} e mouse. Modelli più recenti di piccoli colpi focali hanno utilizzato il colesterolo microemboli iniezione nella carotide ¹⁶ e l'occlusione photothrombotic di un singolo arteriole penetrante ^17. Ognuno di questi modelli presenta vantaggi e svantaggi ^5. Il m.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
L-N5-(1-Iminoetil)ornitina, dicloridrato	Calbiochem	400600-20MG
Isoflurano	Phoenix Pharmaceutical, Inc.	NDC 57319-559-06
Tubi capillari	World Precision Instruments	50-821-807
Picospritzer	Parker Strumentazione	Picospritzer II
Configurazione stereotassica	Kent Scientific	KSC51725
Estrattore di pipette	KOPF	Modello 720
Stereomicroscopio SZ51	Olympus	88-124
Forbici fini	Strumenti scientifici fini	14084-08
Pinze	Harvard Apparatus	PY2 72-8547
Pinze curve	Harvard Apparatus	PY2 72-8598
Strumento di dissezione smussato	Fine Scientific Tools	10066-15
Drill	Dremel	8220-1/28
Punte da trapano	Fine Strumenti scientifici	19007-05
Vetbond	3M	1469SB
Marcaina	HOSPIRA	NDC 0409-1610-50
Trimetoprim-Sulfamethaxole	STI Farmacia	NDC 54879-007-16
Fluororubino	Fluorocromo Inc	30 mg
Paraformaldeide	Fisher	O4042-500
Saccarosio	Fisher	BP220-10
Cryostat	Leica CM3050 S
Vetrini	Fisher	12-544-7
Fast Green	Microscopio da dissezione Sigma	F7252-5G
	Nikon	SMZ1500
23 G ago a farfalla	Fisher	14-840-35
10x Hank's Balanced Salt Solution	Life Technologies	14065056
1 M HEPES-KOH, pH 7,4	Affymetrix	16924
D-Glucose	Sigma	G8270
Bicarbonato di sodio	Sigma	S5761
Cicloexamide	Sigma	01810

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