Un metodo semplice per Automated fase solida estrazione di campioni di acqua per l'analisi immunologiche di piccole inquinanti

Summary

Viene presentato un protocollo per l'estrazione e la pre-concentrazione di estradiolo da campioni d'acqua utilizzando un sistema automatizzato e miniaturizzato.

Abstract

Si propone un nuovo metodo per l'estrazione in fase solida (SPE) di campioni di acqua ambientale. Il prototipo sviluppato è conveniente e facile da usare, e consente di eseguire un rapido, automatizzato e semplice SPE. La soluzione pre-concentrata è compatibile con l'analisi mediante immunodosaggio, con un basso contenuto di solvente organico. Un metodo è descritto per l'estrazione e pre-concentrazione di ormone naturale 17β-estradiolo in 100 ml campioni di acqua. Fase inversa SPE viene eseguita con sorbente ottadecil-silice e eluizione avviene con 200 ml di metanolo al 50% v / v. Eluente viene diluito con l'aggiunta di acqua per abbassare la quantità di metanolo. Dopo aver preparato manualmente colonna SPE, la procedura generale viene eseguita automaticamente entro 1 ora. Al termine del processo, la concentrazione di estradiolo è misurato utilizzando un commerciale immuno-adsorbente assay enzimatico (ELISA). 100 volte pre-concentrazione si ottiene e il contenuto di metanolo in solo il 10% v / v. Recuperi completi della molecolavengono raggiunti con 1 ng / L spillo campioni deionizzata e sintetici acqua di mare.

Introduction

La preparazione del campione è un passo importante in ogni processo di analisi. In particolare, la rimozione degli effetti matrice, diminuzione delle interferenze e arricchimento dell'analita sono necessari per ottenere risultati precisi e raggiungere limiti di rilevabilità. Sistema endocrino composti (IE) sono di particolare interesse per la loro azione su organismi viventi, anche quando presenti a livelli molto bassi per l'ambiente. L'ormone naturale 17β-estradiolo è presente sul inquinamento delle acque dell'UE selezione e soggetto ad essere aggiunto alla lista delle sostanze prioritarie disciplinati dalla direttiva quadro sulle acque europee. Estr....

Protocol

Nota: Il protocollo seguente descrive la SPE effettuato su 100 ml del campione d'acqua con C18 sorbente e eluizione con 50% v / v di metanolo. Il campione arricchito viene diluita a raggiungere il 10% v / v di metanolo prima analisi con un enzima linked immunosorbent assay (ELISA) Kit.

1. Preparazione dei reagenti

1. Preparare i campioni di acqua
   1. Prima di qualsiasi altro passo, filtrare ogni campione di 100 ml di acqua con filtri a 0,2 micron di dimensione dei pori.
   2. Additiva con concentrazione desiderata diluendo il volume appropriato di soluzione di riferimento in un volume di acqua. Ad esempio, preparare 1....

Results

Riproducibilità dell'imballaggio sorbente è stata valutata con l'essiccazione e la ponderazione del sorbente pipettato in flaconcini di vetro ed il risultato è mostrato in Figura 1. Riproducibilità del tempo di iniezione è stato testato per 100 ml di campioni, come mostrato nella Figura 2. Concentrazione iniziale e pre concentrato spillo campioni sono stati determinati utilizzando un kit ELISA commerciale per 17β-estradi.......

Discussion

È stato proposto un nuovo metodo per la preparazione dei campioni di acqua seguita da analisi mediante immunodosaggio. Lo strumento permette di eseguire l'estrazione in fase solida in modo automatizzato e facile da usare.

La filtrazione del campione di acqua prima della sua iniezione nel sistema è critica. Eventuali particelle ancora presenti nella soluzione potrebbe potenzialmente causare l'intasamento della rete fluidica e ostacolare colonna SPE. Un altro passo importante è la prep.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Membrana filtrante 0,2 μ m dimensione dei pori	Merck Millipore	GNWP04700	Per la filtrazione del campione
Membrana in nylon 11 μ m dimensione dei pori	Merck Millipore	NY1104700	per colonna SPE
Punzone per biopsia monouso 5 mm	Budget medico	39302439
Nucleodur C18 ec	Macherey Nagel	713550.01	50 μ m diametro delle particelle
Acqua di mare sintetica	Sigma Aldrich	SSWS500-500ML
Metanolo	VWR
17beta-estradiolo standard	Enzo Life Science		300 ng/ml
17beta-estradiolo Kit ELISA	Enzo Life Science	ADI-900-008	96 pozzetti, intervallo 30 - 3.000 ng/L