Viene presentato un protocollo per l'estrazione e la pre-concentrazione di estradiolo da campioni d'acqua utilizzando un sistema automatizzato e miniaturizzato.
Articolo metodologico
Viene presentato un protocollo per l'estrazione e la pre-concentrazione di estradiolo da campioni d'acqua utilizzando un sistema automatizzato e miniaturizzato.
Si propone un nuovo metodo per l'estrazione in fase solida (SPE) di campioni di acqua ambientale. Il prototipo sviluppato è conveniente e facile da usare, e consente di eseguire un rapido, automatizzato e semplice SPE. La soluzione pre-concentrata è compatibile con l'analisi mediante immunodosaggio, con un basso contenuto di solvente organico. Un metodo è descritto per l'estrazione e pre-concentrazione di ormone naturale 17β-estradiolo in 100 ml campioni di acqua. Fase inversa SPE viene eseguita con sorbente ottadecil-silice e eluizione avviene con 200 ml di metanolo al 50% v / v. Eluente viene diluito con l'aggiunta di acqua per abbassare la quantità di metanolo. Dopo aver preparato manualmente colonna SPE, la procedura generale viene eseguita automaticamente entro 1 ora. Al termine del processo, la concentrazione di estradiolo è misurato utilizzando un commerciale immuno-adsorbente assay enzimatico (ELISA). 100 volte pre-concentrazione si ottiene e il contenuto di metanolo in solo il 10% v / v. Recuperi completi della molecolavengono raggiunti con 1 ng / L spillo campioni deionizzata e sintetici acqua di mare.
La preparazione del campione è un passo importante in ogni processo di analisi. In particolare, la rimozione degli effetti matrice, diminuzione delle interferenze e arricchimento dell'analita sono necessari per ottenere risultati precisi e raggiungere limiti di rilevabilità. Sistema endocrino composti (IE) sono di particolare interesse per la loro azione su organismi viventi, anche quando presenti a livelli molto bassi per l'ambiente. L'ormone naturale 17β-estradiolo è presente sul inquinamento delle acque dell'UE selezione e soggetto ad essere aggiunto alla lista delle sostanze prioritarie disciplinati dalla direttiva quadro sulle acque europee. Estr....
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Nota: Il protocollo seguente descrive la SPE effettuato su 100 ml del campione d'acqua con C18 sorbente e eluizione con 50% v / v di metanolo. Il campione arricchito viene diluita a raggiungere il 10% v / v di metanolo prima analisi con un enzima linked immunosorbent assay (ELISA) Kit.
1. Preparazione dei reagenti
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Riproducibilità dell'imballaggio sorbente è stata valutata con l'essiccazione e la ponderazione del sorbente pipettato in flaconcini di vetro ed il risultato è mostrato in Figura 1. Riproducibilità del tempo di iniezione è stato testato per 100 ml di campioni, come mostrato nella Figura 2. Concentrazione iniziale e pre concentrato spillo campioni sono stati determinati utilizzando un kit ELISA commerciale per 17β.......
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È stato proposto un nuovo metodo per la preparazione dei campioni di acqua seguita da analisi mediante immunodosaggio. Lo strumento permette di eseguire l'estrazione in fase solida in modo automatizzato e facile da usare.
La filtrazione del campione di acqua prima della sua iniezione nel sistema è critica. Eventuali particelle ancora presenti nella soluzione potrebbe potenzialmente causare l'intasamento della rete fluidica e ostacolare colonna SPE. Un altro passo importante è la prep.......
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Questo lavoro è stato finanziato dal Settimo Programma Quadro dell'Unione Europea FP7/2007-2013 nell'ambito dell'accordo di sovvenzione n. 265721. Gli autori ringraziano l'Istituto RIKILT per la Sicurezza Alimentare (NL) per il loro sostegno in questo progetto.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Membrana filtrante 0,2 μ m dimensione dei pori | Merck Millipore | GNWP04700 | Per la filtrazione del campione |
| Membrana in nylon 11 μ m dimensione dei pori | Merck Millipore | NY1104700 | per colonna SPE |
| Punzone per biopsia monouso 5 mm | Budget medico | 39302439 | |
| Nucleodur C18 ec | Macherey Nagel | 713550.01 | 50 μ m diametro delle particelle |
| Acqua di mare sintetica | Sigma Aldrich | SSWS500-500ML | |
| Metanolo | VWR | ||
| 17beta-estradiolo standard | Enzo Life Science | 300 ng/ml | |
| 17beta-estradiolo Kit ELISA | Enzo Life Science | ADI-900-008 | 96 pozzetti, intervallo 30 - 3.000 ng/L |
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