Qui, presentiamo un protocollo per il funzionamento e la messa a punto di colonne per cromatografia a flusso segmentato parallelo per consentire il rilevamento multiplexato.
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Articolo metodologico
Ottimizzazione di una colonna parallela segmentata Flow e Abilitazione rilevamento Multiplexer
In questo articolo
Sommario
Abstract
La tecnologia a flusso attivo (AFT) è una nuova forma di tecnologia a colonna progettata per superare l'eterogeneità del flusso per aumentare le prestazioni di separazione in termini di efficienza e sensibilità e per consentire il rilevamento multiplexato. Questa forma di AFT utilizza una colonna a flusso segmentato parallelo (PSF). Un raccordo terminale di uscita a colonna PSF è costituito da 2 o 4 porte, che possono essere multiplexate per collegare fino a 4 rivelatori. La colonna PSF consente non solo una piattaforma per il rilevamento multiplexato, ma anche la combinazione di rivelatori distruttivi e non distruttivi, senza tubi di volume morto aggiuntivi, contemporaneamente. La quantità di flusso attraverso ciascuna porta può anche essere regolata attraverso la gestione della pressione per soddisfare i requisiti di uno o più rivelatori specifici. Per ottenere il rilevamento multiplexato utilizzando una colonna PSF, ci sono una serie di parametri che possono essere controllati per garantire prestazioni di separazione ottimali e qualità dei risultati; ovvero le dimensioni dei tubi per ogni porta, la scelta della porta per ogni tipo di rivelatore e la regolazione del flusso. Questo protocollo ha lo scopo di mostrare come utilizzare e regolare una colonna PSF funzionante in una modalità di rilevamento multiplexata.
Introduzione
Colonne di tecnologia di flusso attivo
Tecnologia di flusso attivo (AFT) colonne di cromatografia sono stati recentemente sviluppati per superare inefficienza in separazioni associati al flusso di eterogeneità 1-6 e anche per consentire il rilevamento multiplex. In questa particolare comunicazione abbiamo dettaglio il processo operativo del parallelo segmentato di flusso (PSF) colonna con rilevazione multiplex. I vantaggi funzionali chiave della colonna PSF sono: (1) il flusso dalla regione centrale radiale del letto della colonna è isolata dalla regione periferica o parete di flusso, (2) il volume di fase mobi....
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Protocollo
Nota: Questo protocollo contiene le istruzioni su come utilizzare una colonna di PSF in un sistema HPLC accoppiato con più rilevatori per il rilevamento multiplex. Il protocollo è stato scritto assumendo che il lettore abbia una conoscenza di base ed esperienza in cromatografia e diversi metodi di rilevamento HPLC.
Attenzione: Consultare le schede di sicurezza dei materiali (MSDS) per tutti i materiali e reagenti prima dell'uso (ad esempio, scheda di sicurezza per metanolo). Garantire l'uso di tutte le pratiche di sicurezza appropriate quando si maneggiano i solventi e ad alte prestazioni cromatografia liquida (HPLC) elue....
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Risultati
Una analisi HPLC multiplexed è stata effettuata utilizzando una colonna AFT in modalità PSF (Figura 1) e configurato come illustrato nella figura 2. Questo tipo di configurazione ha permesso un campione di caffè da analizzare simultaneamente utilizzando UV-Vis, DPPH • e MS in totale Count Ion modalità (TIC). I composti del campione caffè che ha risposto a DPPH • potrebbero quindi essere facilmente abbinati agli UV-Vis e MS - risposte TIC basati sul.......
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Discussione
Questo studio riguarda la caratterizzazione e la profilazione di caffè con HPLC con rilevamento multiplex impiegando una colonna parallela del flusso segmentato (FPF). Multiplexed HPLC utilizzando colonne PSF consente la caratterizzazione e identificazione di entità chimiche fondamentali riducendo la complessità dei dati del campione mentre ottenere un maggior grado di informazione specifica molecola in una frazione del tempo necessario utilizzando processi multi-rilevamento convenzionali. La colonna PSF permette non so.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da UWS e ThermoFisher Scientific. Uno degli autori (DK) riconosce di aver ricevuto un premio post-laurea australiano.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| HPLC | Rivelatori multipli a scelta per la rilevazione multiplexata. I rivelatori di scelta possono richiedere strumentazione aggiuntiva, ad es, pompa. | ||
| Colonna HPLC a flusso segmentato parallelo | Thermo Fisher Scientific | Non definito | Di prossima commercializzazione |
| Metanolo | Qualsiasi marca | di grado HPLC | |
| Qualsiasi marca | Varie lunghezze e i.d. | ||
| Tappi per colonne Qualsiasi | marca | Per bloccare le porte periferiche inutilizzate. | |
| Tagliatubi in PEEK | Qualsiasi marca | ||
| Bilancia analitica Qualsiasi | marca | ||
| Cronometro | Qualsiasi marca | ||
| Recipienti per la raccolta dell'eluente | di qualsiasi marca Le | fiale per campioni da 1-2 ml di qualsiasi marca possono essere utilizzate come recipienti per la raccolta dell'eluente |
Riferimenti
- Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. The design of a new concept chromatography column. Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).
- Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. Enhanced separation performance using a new column technol....
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Ristampe e permessi
