Messaggio Colonna Derivatizzazione Utilizzando reazione flusso High Performance Liquid Chromatography Colonne

Summary

Viene presentato un protocollo per l'uso di colonne per cromatografia liquida ad alte prestazioni con flusso di reazione per metodi che utilizzano la derivatizzazione post-colonna (PCD).

Abstract

Viene presentato un protocollo per l'uso di colonne per cromatografia liquida ad alte prestazioni con flusso di reazione per metodi che utilizzano la derivatizzazione post-colonna (PCD). Una delle principali difficoltà nell'adattare la PCD ai moderni sistemi e colonne HPLC è la necessità di bobine di reazione di grande volume che consentano la miscelazione dei reagenti e quindi la reazione di derivatizzazione. Questo grande volume morto della colonna porta all'allargamento della banda, che si traduce in una perdita dell'efficienza di separazione osservata e del rilevamento della sensibilità. Nella derivatizzazione post colonna del flusso di reazione (RF-PCD), i reagenti di derivatizzazione vengono pompati contro il flusso della fase mobile in una o due delle porte esterne della colonna del flusso di reazione, dove vengono miscelati con l'effluente della colonna all'interno di una fritta alloggiata all'interno del raccordo terminale della colonna. Questa tecnica consente una miscelazione più efficiente dell'effluente della colonna e dei reagenti di derivatizzazione, il che significa che il volume dei cicli di reazione può essere ridotto al minimo o addirittura eliminato del tutto. È stato riscontrato che i metodi RF-PCD hanno prestazioni migliori rispetto ai metodi PCD convenzionali in termini di efficienza di separazione osservata e rapporto segnale/rumore. Un ulteriore vantaggio delle tecniche RF-PCD è la capacità di monitorare l'effluente proveniente dal porto centrale nel suo stato non derivatizzato. La RF-PCD è stata attualmente sperimentata su una gamma relativamente piccola di reazioni post-colonna, tuttavia, attualmente non vi è motivo di suggerire che la RF-PCD non possa essere adattata a qualsiasi reazione di derivatizzazione post-colonna esistente a uno o due componenti (purché entrambi i reagenti vengano aggiunti contemporaneamente).

Introduction

cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) accoppiata con la colonna montante derivatizzazione (PCD) è un potente strumento che è utile a risolvere una serie di questioni nel laboratorio di analisi. Può essere usato per rilevare composti che sono altrimenti non rilevabili con la serie di rivelatori disponibili ^1,2, aumentare il segnale dell'analita bersaglio, che permette limiti inferiori di rivelazione e quantificazione ^3-5 o selettivamente derivatize un analita bersaglio per evitare effetti di matrice ^6. Reazioni PCD comunemente usati includono la reazione di ammine, come aminoacidi, con orto-phthaladehyde ^7-9, ....

Protocol

Attenzione: Si prega di fare riferimento alle schede di sicurezza dei materiali (MSDS) per tutti i materiali e reagenti prima dell'uso (ad esempio, scheda di sicurezza per il metanolo). Garantire l'uso di tutte le pratiche di sicurezza appropriate durante la manipolazione di solventi e ad alte prestazioni cromatografia liquida eluente (HPLC). Garantire un uso appropriato di controlli tecnici di HPLC, analitica equilibrio e rilevatore di strumentazione, e garantire l'uso di dispositivi di protezione individuale (occhiali, guanti, camice, pantaloni a figura intera, e scarpe chiuse).

Nota: Questo protocollo descrive 3 modi di flusso di reazione derivatizzazione ....

Results

Il primo metodo PCD che è stato adattato per l'utilizzo da RF-PCD era la derivatizzazione di antiossidanti utilizzando la 2,2-difenil-1-picrylhydrazil radicale (DPPH ^{•) 24.} Questa reazione è stato introdotto da Koleva et al. ²⁵ ed è stato ampiamente utilizzato fin. Il rilevamento si basa sulla decolorazione del DPPH ^• radicalico in presenza di specie reattive dell'ossigeno, quindi, la presenza di antiossidanti risultati in una goccia assorbanza osservata. La reazione .......

Discussion

RF-PCD consente la miscelazione efficiente del reagente derivatizzazione con l'effluente post-colonna HPLC senza l'uso di bobine di reazione, minimizzando gli effetti di banda allargamento e migliorando le prestazioni di separazione. Metodi RF-PCD hanno anche mostrato miglioramenti nella risposta del segnale rispetto al metodo di rilevazione. Camenzuli et al. ²⁸ è stato il primo a segnalare l'uso di colonne di flusso di reazione con DPPH ^• per la rilevazione di ROS in un campio.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Strumento HPLC	Agilent	Serie 1290 HPLC
Pompa/e aggiuntiva/e per sistema di derivatizzazione	Shimadzu	LC-20A
Colum			Tubi in
PEEK	Sigma Aldrich	Z227307
Tappi a			Fornito con
colonna Tagliatubi in PEEK	Sigma Bilancia	Aldrich Z290882
Bilancia			analitica Bilancia analitica a 4 punti
Cronometro			Attrezzatura non scientifica Fiale
		raccolta dell'eluente	Qualsiasi fiala piccola con fondo piatto andrà bene, ad es, Fiale HPLC Fiale
		HPLC	Dipenderà dallo strumento utilizzato
Recipienti per la fase mobile e le soluzioni di derivatizzazione>	Sigma Aldrich	Z232211
Vetreria			Palloni volumetrici, pipette, ecc.
Metanolo	Sigma Aldrich	34860
DPPH	Sigma Aldrich	D9132
Acetato di ammonio	Sigma Aldrich	17836
Ammoniaca	Sigma Aldrich	320145	Acetonitrile corrosivo
	Sigma Aldrich	34998
Fluorescamina	Sigma Aldrich	F9015
4- amminoantipirene	Acros Organics BVBA	AC103151000
Ferricianuro di potassio	AnalaR	B10204-30