Qui, presentiamo un protocollo per il funzionamento e l'ottimizzazione della colonna AFT (Active Flow Technology) in modalità Curtain flow (CF) per migliorare le prestazioni di separazione.
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Articolo metodologico
Tenda Colonna flusso: ottimizzazione dell'efficienza e della sensibilità
In questo articolo
Sommario
Abstract
La tecnologia a flusso attivo (AFT) è una forma di tecnologia a colonna che aumenta le prestazioni di separazione di una colonna HPLC attraverso l'uso di raccordi terminali multiporta appositamente costruiti. Le colonne Curtain Flow (CF) appartengono alla suite di colonne AFT, in particolare la colonna CF è progettata in modo che il campione venga iniettato nella regione centrale radiale del letto e un flusso a cortina di fase mobile che circonda l'iniezione di soluto impedisce la dispersione radiale del campione sulla parete. La colonna funziona come una colonna di "diametro infinito". Lo scopo del progetto è quello di superare l'eterogeneità radiale del letto della colonna e allo stesso tempo massimizzare il carico del campione nella regione centrale radiale del letto della colonna, il che serve ad aumentare la sensibilità di rivelazione. Il protocollo qui descritto delinea la configurazione del sistema e della colonna CF e il processo di messa a punto per una colonna "virtuale" ottimizzata a diametro infinito.
Introduzione
Negli ultimi anni la tecnologia colonna per cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) è progredita notevolmente; capacità di picco sono aumentate considerevolmente soprattutto grazie all'impiego di dimensioni delle particelle più piccole e le particelle core shell più efficienti. Poiché separazioni sono generalmente più efficienti, un flusso-on effetto è stato un aumento della sensibilità poiché picchi sono ora nitide e quindi più alto 1-8.
Tuttavia, bed radiale eterogeneità è ancora un fattore limitante nella esecuzione di tutte le colonne, ma questa non è una nuova storia dal cromatografi sanno da molti anni. Letti....
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Protocollo
Attenzione: Si prega di fare riferimento alle schede di sicurezza dei materiali (MSDS) per tutti i materiali e reagenti prima dell'uso (ad esempio, scheda di sicurezza per il metanolo). Garantire l'uso di tutte le pratiche di sicurezza appropriate durante la manipolazione di solventi e ad alte prestazioni cromatografia liquida eluente (HPLC). Garantire un uso appropriato di controlli tecnici di HPLC, analitica equilibrio e rilevatore di strumentazione, e garantire l'uso di dispositivi di protezione individuale (occhiali, guanti, camice, pantaloni a figura intera, e scarpe chiuse).
Nota: Questo protocollo contiene le i....
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Risultati
Colonne AFT sono stati sviluppati usando un disegno fritta specializzata (Figura 1) nella colonna multiporta finali raccordi per superare il letto eterogeneità colonna e migliorare le prestazioni di separazione. Uno studio interlaboratorio sul rendimento di separazione di colonne cromatografiche CF (Figura 2) è stata effettuata con un sistema a doppia pompa costituito (figura 3B), come descritto nella sezione 3 di questo protocollo .......
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Discussione
Questo studio ha coinvolto l'analisi interlaboratorio di CF colonne cromatografiche per verificare la prestazione analitica in termini di efficienza e sensibilità. La colonna CF è stato istituito con un doppio sistema di pompaggio, come descritto nella sezione '3. due pompe impostato 'per ottenere un rapporto di flusso di 40:60 (centro: periferica) in ingresso della colonna CF. Il 40:60 (centro: periferica) Rapporto flusso è stato ottenuto impostando la portata di ogni pompa al valore che rappresenta il 40% .......
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Dichiarazioni
Questo lavoro è stato supportato da UWS e ThermoFisher Scientific.
Ringraziamenti
Uno degli autori (DK) riconosce di aver ricevuto un Australian Postgraduate Award.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| HPLC | |||
| Pompa | Necessaria se si deve configurare un sistema CF a 2 pompe. | ||
| Colonna HPLC a flusso a tendina | Thermo Fisher Scientific | Non definito | Presto commercializzato |
| Metanolo | Qualsiasi marca | Grado HPLC | |
| Tubo PEEK | Qualsiasi marca | Varie lunghezze e i.d. | |
| Tagliatubi in PEEK | Qualsiasi marca | ||
| Bilancia analitica Qualsiasi | marca | ||
| Cronometro | Qualsiasi marca | ||
| Recipienti di raccolta dell'eluente | Qualsiasi marca | fiale di campionamento da 1-2 ml possono essere utilizzate come recipienti di raccolta dell'eluente | |
| Raccordo a T | di qualsiasi marca |
Riferimenti
- Camenzuli, M., et al. The use of parallel segmented outlet flow columns for enhanced mass spectral sensitivity at high chromatographic flow rates. Rapid Commun. Mass Sp. 26 (8), 943-949 (2012).
- Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A.
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Ristampe e permessi
