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Questo video mostra la procedura di craniotomia che consente l'imaging cronico dei neuroni nella corteccia retrospleniale del topo (RSC) utilizzando la microscopia a due fotoni in vivo nella linea di topi transgenici Thy1-GFP. Questo approccio crea la possibilità di studiare la correlazione delle manipolazioni comportamentali con i cambiamenti nella morfologia neuronale in vivo.
La procedura di impianto della finestra cranica è stata considerata limitata solo alle regioni della corteccia facilmente accessibili come il campo del barile. Il nostro approccio consente la visualizzazione dei neuroni nell'RSC altamente vascolarizzato. L'RSC è un elemento importante del circuito cerebrale responsabile della memoria spaziale, precedentemente ritenuto problematico per l'imaging a due fotoni in vivo.
L'impianto della finestra cranica sopra l'RSC è combinato con un'iniezione di virus adeno-associato ricombinante che esprime mCherry (rAAVmCherry) nell'ippocampo dorsale. L'mCherry espresso si diffonde alle proiezioni assonali dall'ippocampo all'RSC, consentendo la visualizzazione dei cambiamenti sia nei bottoni assonali presinaptici che nelle spine dendritiche postsinaptiche nella corteccia.
Questa tecnica consente il monitoraggio a lungo termine della plasticità strutturale dipendente dall'esperienza in RSC.