Valutazione della Planar-Cell-polarità fenotipi in Ciliopathy mouse Mutant Coclea

Helen May-Simera

doi:10.3791/53559

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Articolo metodologico

Valutazione della Planar-Cell-polarità fenotipi in Ciliopathy mouse Mutant Coclea

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DOI:

10.3791/53559

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21 febbraio 2016

Helen May-Simera¹

¹Cell and Matrix Biology, Institute of Zoology, Johannes Gutenberg-Universität Mainz

In questo articolo

Sommario

Le ciglia primarie influenzano varie vie di segnalazione. La coclea dei mammiferi è ideale per esaminare la segnalazione della polarità cellulare planare (PCP). La disfunzione delle ciglia colpisce la crescita cocleare, il patterning cellulare e l'orientamento delle cellule ciliate, le letture della PCP. Il nostro obiettivo è analizzare la segnalazione della PCP nella coclea murina attraverso l'analisi fenotipica, l'immunoistochimica e la microscopia elettronica a scansione.

Abstract

Negli ultimi anni, le ciglia primarie sono emerse come regolatori chiave nello sviluppo e nella malattia, influenzando numerose vie di segnalazione. Una delle prime vie di segnalazione che si è dimostrata associata alla funzione ciliare è stata la via di segnalazione Wnt non canonica, nota anche come segnalazione della polarità cellulare planare (PCP). Uno dei luoghi migliori in cui studiare gli effetti della segnalazione della polarità cellulare planare (PCP) durante lo sviluppo dei vertebrati è la coclea dei mammiferi. L'interruzione della segnalazione PCP nella coclea di topo interrompe la crescita cocleare, il patterning cellulare e l'orientamento delle cellule ciliate, tutti fattori influenzati dalla disfunzione delle ciglia. L'obiettivo di questo protocollo è quello di descrivere l'analisi del segnale PCP nella coclea dei mammiferi in via di sviluppo attraverso l'analisi fenotipica, l'immunoistochimica e la microscopia elettronica a scansione. I difetti di convergenza ed estensione si manifestano come un accorciamento del dotto cocleare e/o cambiamenti nel pattern cellulare, che possono essere quantificati in seguito alla dissezione da mutanti di topo in via di sviluppo. I cambiamenti nell'orientamento del fascio stereociliare e nella lunghezza o nel posizionamento della kinocilia possono essere osservati e quantificati utilizzando l'immunofluorescenza o la microscopia elettronica a scansione (SEM). Una comprensione più approfondita del ruolo delle proteine ciliari nelle vie di segnalazione cellulare e in altri fenomeni biologici è fondamentale per la nostra comprensione della biologia cellulare e dello sviluppo, nonché per lo sviluppo di strategie di trattamento mirate.

Introduzione

cilia primarie sono lunghe appendici microtubuli-based che si estendono dalla superficie della maggior parte delle cellule di mammifero. cilia primaria sono spesso confusi con cilia motilità, di cui ci sono sempre di più per cella, e il cui scopo è quello di spostare il fluido attraverso le superfici della membrana. cilia primaria, in contrasto, adottare ruoli sensoriali e sono quindi anche denominato cilia come sensoriale. Una volta lungo dimenticato, questo organello stato recentemente 'riscoperto' a causa della sua associazione con una moltitudine di malattie genetiche umane ^1. Idealmente posizionato come un organello segnalazione, il ciglio pri....