Tridimensionale Tecnologia biomimetica: Novel Biorubber Consente di creare Definito micro e macro scala Architetture in collagene idrogel

Sommario

È stata sviluppata un'innovativa tecnica di biofabbricazione per ingegnerizzare costrutti tridimensionali che assomigliano alle caratteristiche architettoniche, ai componenti e alle proprietà meccaniche dei tessuti in vivo. Questa tecnica presenta un materiale sacrificale di nuova concezione, la gomma BSA, che trasferisce caratteristiche spaziali dettagliate, riproducendo le architetture in vivo di un'ampia varietà di tessuti.

Abstract

ponteggi tessuti giocano un ruolo cruciale nel processo di rigenerazione dei tessuti. L'impalcatura ideale deve soddisfare alcuni requisiti, come avere la composizione corretta, il modulo di mira, e le caratteristiche architettoniche ben definiti. Biomaterials che ricapitolano l'architettura intrinseca del tessuto vivo sono essenziali per lo studio delle malattie e per facilitare la rigenerazione del tessuto molle perduto e valido. Una tecnica biofabrication romanzo è stato sviluppato che combina stato di imaging arte, stampa tridimensionale (3D), e l'attività enzimatica selettiva per creare una nuova generazione di biomateriali per la ricerca e l'applicazione clinica. Il materiale sviluppato, gomma Bovine Serum Albumin, è reazione iniettato in uno stampo che sostiene specifiche caratteristiche geometriche. Questo materiale sacrificale permette l'adeguato trasferimento di caratteristiche architettoniche di un materiale impalcatura naturale. Il prototipo è costituito da un ponteggio collagene 3D con 4 e 3 canali mm che ReprESENT un'architettura ramificata. Questo documento enfatizza l'uso di questa tecnica biofabrication per la generazione di costrutti naturali. Questo protocollo utilizza un software per computer (CAD) per produrre uno stampo solido che sarà reazione iniettato con gomma BSA seguita dalla digestione enzimatica della gomma, lasciando le sue caratteristiche architettoniche all'interno del materiale scaffold.

Introduzione

Nel campo dell'ingegneria dei tessuti la capacità di fabbricare scaffold tessuto è vitale. Un ponteggio tessuto adatto ha una struttura 3D, è composto da materiali biocompatibili, e mima dell'architettura tessuto vivo per facilitare cellule e tessuti crescita e rimodellamento. Questo ponteggio deve consentire il trasporto delle sostanze nutritive e la rimozione dei rifiuti ^1-4. Uno dei principali ostacoli nella produzione di questi scaffold è la capacità di ricapitolare specifiche caratteristiche geometriche in un materiale biocompatibile. Diverse tecniche biofabrication sono stati segnalati per controllare le caratteristiche geometriche di questi ponteggi, esempi sono electrospinning ^5-8, solvente colata ^9, stereolitografia ^10, e 3D-stampa ^11, tra gli altri. Queste tecniche sono inferiori nel fornire una relativamente facile trasferimento di controllabili elementi architettonici interni ed esterni, sono costosi, sono limitati dalla risoluzione e la stampabilità ( ad esempio, calibro ugello, limitazione di materiale), o richiedono tecniche di post-fabbricazione che richiede un lungo periodo di tempo per produrre impalcature vitali ^12.

In molti sistemi di fabbricazione commerciali, la creazione di vuoti interni, canali e caratteristiche si ottiene utilizzando sabbia o altri materiali rimovibili o sacrificali adatti. La parte metallica o plastica è formata intorno allo stampo di sabbia, e una volta solidificato, la sabbia viene rimosso. Più o meno allo stesso modo, la prossima generazione di biomateriali ha bisogno della BioSand equivalente. Pertanto, la gomma BSA è stato sviluppato come un sostituto per BioSand. La gomma BSA è un materiale di nuova formulazione che consiste di albumina di siero bovino reticolata con glutaraldeide. L'obiettivo finale è quello di ricreare specifiche caratteristiche architettoniche in una impalcatura di collagene biodegradabile. Le caratteristiche del biorubber sacrificale che mantiene la fedeltà dimensionale con lo stampo del tessuto originale vengono descritti.

Diverse combinazioni di concentrazioni BSA e glutaraldeide sono stati testati utilizzando una varietà di solventi. Questo materiale è stato creato dalla reazione tra BSA e glutaraldeide. gomma BSA può essere reazione iniettato nelle geometrie complesse degli stampi tessuto. Reticolato BSA è tripsina labile e prontamente digeriti dall'enzima in condizioni di pH e temperatura miti. Al contrario, il tipo intatta collagene è molto resistente alla tripsina digestione. Queste caratteristiche sono stati capitalizzati per rimuovere selettivamente la gomma BSA lasciando dietro di sé il collagene. Il presente lavoro consisteva determinare i parametri ideali necessari per ottenere uno stampo labile in grado di fornire specifiche caratteristiche architettoniche di un'impalcatura biocompatibile. Le caratteristiche specifiche che sono stati valutati inclusi miscibilità, digestione enzimatica, portante, e la capacità di essere reazione iniettato in uno stampo negativo. La combinazione del 30% BSA e 3% glutaraldeide soddisfa questi requisiti. Questo protocollo prevede la necesslinee guida ary per creare queste impalcature tridimensionali. Il prototipo è costituito da un ponteggio collagene che rappresenta un'architettura ramificato con un afflusso e deflusso due canali con diametri rispettivamente 4 e 3 mm,. Questa tecnica ha il potenziale per imitare macro e micro-ambienti del tessuto di interesse. Questa tecnologia fornisce una tecnica praticabile per fornire una determinata istruttivo geometrico di un materiale biodegradabile in una questione relativamente facile e tempestiva con alta fedeltà, che può essere sintonizzata per imitare il vivo elasticità dei tessuti e altre caratteristiche del tessuto di interesse.

Protocollo

1. Determinare la percentuale di solidi in batch Collagene

1. Estrarre il collagene seguito di una procedura precedentemente pubblicato ^13. Scongelare un minimo di 20 ml di collagene. Determinare la percentuale iniziale di solidi collagene nel batch per manipolare la concentrazione collagene nel idrogel formati.
   1. Tagliare tre pezzi di foglio di alluminio (circa 6 x 6 cm) e la forma ciascuno come una vaschetta utilizzando il fondo di un bicchiere 25 ml. Registrare il peso di ciascun piatto.
   2. Aggiungere una piccola quantità di collagene per ogni vaschetta e registrare il peso totale della vaschetta di alluminio e collagene. Aggiungere 0,5 - 0,8 g di collagene su ogni vaschetta di alluminio.
      Nota: Dopo questo passo, ci sono tre vaschette foglio di alluminio e ognuno dovrebbero avere una piccola quantità di collagene. Assicurarsi di registrare il peso di ciascuna (totale 3) vaschetta di alluminio vuota e il peso della padella dopo l'aggiunta di collagene.
   3. Calcolare il peso del collagene in ciascuna vaschetta usando l'fopo formula:
      peso Collagene = Pan e peso collagene - peso Pan
   4. Posizionare i tre pentole in alluminio che trattengono il collagene in forno a 100 ° C per 24 ore.
   5. Dopo 24 ore, registrare il peso di ciascuna vaschetta di alluminio e il collagene disidratato.
   6. Calcolare il peso del collagene disidratato mediante la seguente equazione:
      Disidratata peso collagene = Pan e peso collagene disidratato - peso Pan
   7. Calcolare la percentuale di solido per i tre campioni per determinare la concentrazione di solidi collagene utilizzando la seguente formula:
      
   8. Calcolare il contenuto medio collagene solida del batch utilizzando la percentuale di solidi collagene per ciascuno dei tre campioni.
      Nota: Il collagene che verrà utilizzato è ciò che resta del collagene idratato. sarà utilizzato Nessuno di collagene disidratato.
   9. Dopo la determinazione della percentuale di collagene solido (ila concentrazione di collagene nitial) del lotto, continuare a utilizzare il collagene idratato rimanente. Utilizzare un pHmetro calibrato per regolare il pH del lotto collagene per 3.
      1. Aggiungere piccole quantità (2-5 ml per volta) di 12 N acido cloridrico (HCl). Tenere in ghiaccio in ogni momento. Non aggiungere cloridrico direttamente al collagene - aggiungere l'acido al lato del tubo. Dopo aver aggiunto l'acido, utilizzare la spatola per spingere l'acido al collagene e rapidamente mescolare.
   10. Una volta raggiunto un pH di 3, lasciate riposare il collagene O / N a 4 ° C.

2. Preparazione del BSA gomma

1. Preparare la soluzione di albumina sierica bovina (BSA) seguendo la procedura di seguito elencati.
   1. Preparare la soluzione 2x tampone fosfato (PBS). Aggiungere due compresse PBS a 100 ml di acqua per fare 0,02 soluzione M PBS.
   2. Combinare BSA con 2x PBS per creare una soluzione di BSA 30% utilizzando la procedura di seguito elencati.
      1. Ad esempio, per effettuare una BSA 30% con 30 ml di PBS 2x, utilizzare 12,9 g di BSA. Aggiungere 1/3 del 2x PBS (ad esempio, 10 ml) in un pallone con un ancoretta. Aggiungere 1/2 della BSA (ad esempio, 6,45 g BSA) al pallone e con una spatola, bagnare il soluto secca.
      2. Ripetere questo processo di aggiunta di PBS e BSA finché tutto il soluto e solvente è nel pallone. Utilizzare la spatola per bagnare tutto il soluto. Si sarà simile a una miscela di un liquido e grumi. Lasciate riposare per circa 30 minuti.
      3. Quindi, accendere l'agitatore su un ciclo basso e fare in modo che non ci siano grumi di tutto il ancoretta. Si dovrebbero prendere 90 minuti per ottenere tutto in soluzione o può essere lasciata mescolando O / N a 4 ° C. Dopo il soluto è tutto dissolto, porre la soluzione in una siringa da 20 ml e ricoperto con un filtro a siringa 0.20 micron. Premere il pistone per espellere liquido attraverso il filtro e raccogliere la soluzione sterilizzata in una nuova provetta. Conservare a 4 ° C.
   3. Preparare 3% soluti glutaraldeideil diluendo soluzione di glutaraldeide al 25% con sterile filtrata 2x PBS. Ad esempio, per 10 ml di soluzione di glutaraldeide al 3%, usare 2 ml di 25% glutaraldeide e 8 ml di PBS 2x. Conservare a 4 ° C.

3. Trattamento Stampi

Nota: Il prototipo descritto in questo articolo utilizza un acciaio inox Y pezzo stampo su misura. Lo stampo contiene un afflusso e due canali di deflusso di 4 e 3 mm, rispettivamente. In primo luogo, stampi puliti, spruzzarli con lo strutto insaturi, e sterilizzare. Preparare gli stampi seguendo la procedura descritta di seguito.

1. Pulire stampi in acciaio inox con sonicatore ad una frequenza di 35 kHz. Mettere gli stampi nel sonicatore e sommergere con acqua e ghiaccio. Mantenere gli stampi a freddo in ogni momento durante il sonicatore è in funzione. Eseguire il sonicatore per 2 periodi di 90 min.
   1. Dopo ogni periodo, utilizzare un ago per assicurarsi che non vi sia materiale nel Luer Lock acciaio inossidabile o bConnettore Rass. Usare acqua e sapone per pulire l'intera superficie dei due lati degli stampi. Verificare che non vi siano ostruzioni nei canali.
2. Posizionare la stampi, viti, e connettore Luer lock in un sacchetto autoclave e si.
3. Riempire la bottiglia che si attacca a un a metà strada spruzzatore d'aria con lardo disponibile in commercio (misto distaccante di acidi grassi). Sostituire il tappo con una bottiglia tappo normale. Mettere in un sacchetto di autoclave e metterla in esso.
   Nota: lardo viene utilizzato per facilitare il rilascio del materiale che sarà reazione iniettato successivamente (gomma BSA). Non posizionare il coperchio della bottiglia spruzzatore in autoclave- può danneggiare la tenuta interna.
4. Riscaldare il lardo per 45 secondi o fino a quando il suo chiaro e liquido in un forno a microonde. Avvitare il coperchio spruzzatore d'aria alla bottiglia lardo. Collegare il coperchio con lo spruzzatore. Collegare lo spruzzatore alla fonte di aria al banco di laboratorio. Aprire la valvola dell'aria, e aprire l'ugello dello spruzzatore fino a quando non inizia a bagnare la superficiedi un tovagliolo di carta.
5. Spray lardo perpendicolare alla superficie dello stampo fino a quando la superficie è completamente coperta. Dopo che ogni pezzo è stato spruzzato, metterli in una capsula di Petri e sigillarla. Posizionare gli stampi a 4 ° C per 2 ore.
6. Procedere per sterilizzare gli stampi esponendo la superficie di luce UV per 30 min. Riposizionarle a 4 ° C fino a quando non sono pronti per essere iniettato reazione.

4. Reazione iniezione della gomma BSA

Nota: Tutti i materiali e le soluzioni devono essere tenere freddo fino al momento dell'uso per impedire l'impostazione prematura della gomma BSA nei passaggi successivi.

1. Preparare il dispenser per la distribuzione la gomma BSA agli stampi di seguito questi passaggi.
   1. Sterilizzare tutti i componenti di miscelazione (due O ring, cap siringa, doppia siringa, miscelare punta e 4: 1 dispenser) esponendoli a luce UV per 30 minuti nella cappa reazione a catena della polimerasi (PCR).
      Nota: Una cappa PCR è stata utilizzata perché tla procedura prevede fissativi. Questi prodotti chimici non possono essere utilizzati nel cofano coltura cellulare / tissutale a causa del rischio di esposizione e tossicità per le cellule. Qualsiasi altra cappa che contiene una luce UV sarà adatto.
   2. Posizionare il cappuccio punta sul supporto soluzione.
   3. Eseguire la miscelazione e l'iniezione in un rapporto di 4: 1 di BSA: glutaraldeide. Aggiungere la BSA 30% alla camera doppia siringa, che consegnerà la più alta quantità di soluzione (Ci vorranno circa 4 ml per riempire). Assicurarsi di lasciare sufficiente spazio per posizionare l'O-ring, al fine di prevenire la contaminazione traboccante e della camera adiacente.
   4. Aggiungere la soluzione di glutaraldeide al 3% per l'altra camera (ci vorranno circa 1 ml per riempire). Assicurarsi di lasciare sufficiente spazio per posizionare l'O-ring per prevenire la contaminazione traboccante e della camera adiacente.
   5. Posizionare la doppia siringa sul dispenser. Inclinare il gruppo verticalmente in modo che il tappo della siringa è in cima. Sostituire il tappo con la punta di miscelazione.
   6. ScRew i due pezzi dello stampo in acciaio inox insieme.
   7. Posizionare il gruppo all'interno di un sacchetto di autoclave.
   8. Per rimuovere eventuale aria nel distributore, tenerlo in posizione verticale e rapidamente stringere il manico una volta per rilasciare una piccola quantità di BSA mescolato con la glutaraldeide. Poi rapidamente collegare il connettore Luer lock di acciaio inox Y dello stampo per la punta della siringa.
   9. Tenere stampo in acciaio inox Y con la mano sinistra e l'erogatore miscela di BSA-glutaraldeide sulla destra. copre Alternate ciascuno di scarico sinistro e destro dei canali di deflusso premendo scarico ai lati della borsa autoclave per assicurarsi che i vuoti all'interno sono pieni di soluzione. Poi, posizionare gli stampi in orizzontale e iniettare di nuovo.
   10. Staccare gli stampi dal distributore e mettere in un piatto 25 millimetri Petri.
   11. Posizionare Parafilm intorno alla piastra di Petri per prevenire la disidratazione della gomma.
   12. Mettere lo stampo in 4 ° C frigo O / N.

Nota: Il collagene deve essere tenuta in ghiaccio in ogni momento durante il processo.

1. Modificare la concentrazione di collagene utilizzando la percentuale di solidi di collagene.
   1. Rendere 10 ml di 1,75% collagene, regolando la concentrazione di collagene iniziale con acqua fredda.
   2. Utilizzando un pHmetro calibrato, regolare il pH a 3 con 12 N di acido cloridrico. Non aggiungere cloridrico direttamente al collagen- aggiungere acido al lato del tubo. Dopo aver aggiunto l'acido, utilizzare la spatola per spingere l'acido in collagene e rapidamente mescolare.
   3. Pesare 4 g di collagene in una provetta conica separata.
   4. Centrifugare il collagene per rimuovere aria a 4 ° C e 9.343 xg per 20-30 min.
   5. UV sterilizzare la cappa di coltura cellulare per 30 min, e aggiungere 14 ml di laminina al collagene 4 ml. Questo si tradurrà in una concentrazione laminina finale di 10 mg / mL. Nota: Laminina fornisce sintegrità STRUTTURALI, adesione, e promuove varie risposte cellulari.
   6. Ruotare la PCR UV luce accesa per 20-30 minuti prima di utilizzare il cappuccio per la sterilizzazione.
   7. Posizionare il tappo Luer lock, per collegare ad una siringa da 20 ml, in etanolo per 2 ore. Poi, lasciare asciugare e mettere in luce UV.
   8. Gamma irradiare il collagene per 8.6 minuti per raggiungere 1.200 cGy.
      Nota: Il tempo dipenderà il decadimento della sorgente cesio. Regolare il tempo per raggiungere lo stesso dosaggio.

6.Casting collagene su BSA gomma

1. Per polimerizzare il collagene, utilizzare un 8: 1 ratio: 1 (collagene: HEPES: MEM). La procedura che segue si basa su un primo 4 g di collagene acidificato (dal punto 5.1.8).
   1. Fare una soluzione 0,2 N HEPES in acqua, e regolare il pH a 9 con l'aggiunta di piccole quantità (1-5 microlitri) di M di idrossido di sodio 1-5 (NaOH). Utilizzando un pHmetro calibrato, controllare il pH della soluzione dopo ogni aggiunta. Conservare a 4 ° C o keep su ghiaccio.
   2. Accendere la luce UV della cappa coltura tissutale per 20-30 min per sterilizzare la cappa.
   3. forcipe autoclave, spatola, e bisturi per la sterilizzazione.
   4. Mescolare 1,5 ml di 0,2 N HEPES (pH 9) e 1,5 ml di MEM 10x utilizzando la cappa coltura tissutale. Assicurati di tenerlo in ghiaccio e vortex per 5 secondi prima dell'uso. Conservare a 4 ° C o tenere in ghiaccio.
   5. Per sterilizzare il cofano PCR, accendere la luce UV per 30 min.
   6. Posizionare una piastra 12 pozzetti e una siringa da 20 ml in -20 ° C per 10 minuti, o fino al momento di continuare. Nota: Conservare tutto il materiale freddo fino al momento dell'uso. L'aumento della temperatura induce prematura fibrillogenesi collagene.
   7. Spruzzare tutti i tubi e le piastre così che stanno per essere nella cappa con il 70% di etanolo e lasciare asciugare per la sterilizzazione. Posizionare una siringa da 20 ml in ghiaccio per raffreddare per un uso successivo.
   8. Nella cappa PCR, aprire gli stampi in acciaio inox per rilasciare la gomma BSA e utilizzando un bisturi, tagliare i canali di scarico del BSA rmuffa ubber.
   9. Sotto il cofano della PCR, aprire i tubi di collagene sterili e aggiungere 1 ml di soluzione HEPES-MEM (fare in modo che prima di estrarre la soluzione HEPES-MEM, che è ben amalgamato e non ci sono depositi solidi).
   10. Utilizzando la spatola sterile, mescolare bene la soluzione di collagene e di buffer.
   11. Chiudere e vortex rapidamente per garantire un idrogel ben miscelato.
   12. Trasferire in un fredda siringa da 20 ml.
   13. Con una mano, tenere il BSA gomma all'interno del pozzo e, con l'altra, dispensare metà della soluzione collagene idrogel sul fondo del pozzo.
   14. Utilizzando le pinzette sterili, in modo che le estremità di afflusso e deflusso di gomma tocchino i lati del pozzo.
   15. Versare soluzione di collagene sulla cima della gomma fino è completamente coperto.
   16. Assicurarsi che la gomma BSA è sospesa all'interno del collagene e che non vi siano bolle, soprattutto in prossimità delle estremità della gomma.
   17. Mettere il coperchio e avvolgere intorno al Parafilmcirconferenza del pozzo.
   18. Mettere in incubatrice per 1 ora a 37 ° C. Tenere la luce UV PCR su.
2. Dopo la polimerizzazione del collagene, UV reticolare il idrogel mediante la seguente procedura.
   Nota: La reticolazione del collagene sarà effettuata utilizzando un'apparecchiatura reticolante UV in cui la quantità di energia può essere controllata.
   1. Accendere il reticolante UV e utilizzare l'impostazione energia per irradiare la camera vuota con 630.000 μJ / cm ^2.
   2. Rimuovere il gel dal termostato.
   3. Spruzzare mani con etanolo, e, all'interno della camera, rimuovere il coperchio più rapidamente possibile.
   4. Chiudere la camera e UV reticolare idrogel selezionando l'impostazione di energia e irradiando 630.000 μJ / cm ^2.
   5. Dopo il ciclo di reticolazione, spegnere la luce UV sul cofano PCR
   6. Spruzzare le mani con etanolo e aprire la camera, mettendo rapidamente il coperchio sulla piastra bene. Spostare la piastra benalla cappa PCR.
   7. Utilizzando la spatola sterile, allentare delicatamente e rimuovere il gel dal pozzo. Capovolgere il gel sotto il cofano per reticolare il fondo della idrogel. Ripetere il passaggio 6.2.3 e 6.2.4.

7. Digestione enzimatica della BSA in gomma

1. Per avere un ponteggio collagene cava, rimuovere BSA gomma in modo che non influenza le dimensioni incorporati nel idrogel. La procedura è descritta di seguito.
   1. Accendere la luce UV per 20-30 minuti per sterilizzare il cofano coltura di tessuti.
   2. Fare 0,25% tripsina soluzione a pH 7.8. Ad esempio, per 15 ml di acqua, aggiungere 0,0376 g di tripsina in una provetta conica da 50 ml. Aggiustare il pH a 7,8 con l'aggiunta di piccole quantità (2-5 microlitri) di 1 M NaCl. Posizionare la soluzione in una siringa da 20 ml e ricoperto con un filtro a siringa 0.20 micron. Premere il pistone per espellere liquido attraverso il filtro e raccogliere la soluzione sterile in una nuova provetta.
   3. Accendere il bagnomaria e impostare la temperatura a 30° C.
   4. Dopo 30 minuti, spegnere la luce UV. Spruzzare etanolo su tutti i tubi e materiali che verranno utilizzati nella cappa.
   5. Trasferire l'idrogel di collagene sotto il cofano e il luogo in tubo conico separata.
   6. Aggiungere circa 3-5 ml (appena sufficiente a coprire i gel) di soluzione tripsina 0,25% con un pH di 7,8 a ciascuna provetta.
   7. Sigillare i tubi con Parafilm e vortex leggermente per circa 1 minuto.
   8. Posto nella 30 ° C bagnomaria per 15-24 ore. Mentre nel bagnomaria, leggermente vortice i gel spesso fino alla gomma BSA è stato digerito o rimosso dal idrogel.
      Nota: Per determinare se la gomma BSA è stato rimosso, sia la gomma fluttua nella soluzione tripsina o ci sono parti panne. Non ci devono essere zone scure visivi all'interno della idrogel.
2. Per garantire che tutta la gomma BSA e tripsina è stata rimossa dai idrogel, risciacquo come descritto di seguito.
   1. Accendere il hoo PCRd luce UV per 20-30 minuti.
   2. Preparare la soluzione Mosconas. Combinare cloruro di potassio (KCl, 28,6 mM), (NaHCO _3, 11,9 mM), glucosio (9,4 mM) e (NaH ₂ PO _4, 0,08 mM) in acqua. Aggiustare il pH a 7,4 con 1 M NaOH o 12 soluzione M HCl. Posizionare la soluzione in una siringa da 20 ml e utilizzare un filtro a siringa da 0,20 micron per sterilizzare la soluzione.
   3. Spruzzare il tutto con etanolo prima della loro immissione sul cofano e consentire l'etanolo si asciughi.
   4. Aprire la provetta e trasferire 5-10 ml di soluzione sterile Mosconas in un tubo da 50 ml.
   5. Trasferire il idrogel collagene per tubo conico che contiene la soluzione enzimatica. Assicurarsi che l'idrogel è completamente coperto con la soluzione. Lasciare il tubo nella shaker in frigorifero a 4 ° C per 30 min.
   6. Aspirare la soluzione Mosconas e ripetere il passo 7.2.5 per due volte.
   7. Conservare a 4 ° C.

Risultati

I risultati dimostrano che questa tecnica biofabrication è efficiente nel generare scaffold 3D che possono mimare la disposizione spaziale visto in vivo tessuto. Le caratteristiche architettoniche sono parametri vitali per l'applicazione ingegneria tissutale, che giocano un ruolo cruciale nell'interazione delle cellule in vivo e la funzionalità del tessuto.

La consistenza e miscibilità della gomma BSA era un ...

Discussione

Biofabrication è un settore altamente multidisciplinare in cui i principi biologia e ingegneria si fondono per generare materiali complessi che imitano il tessuto nativo. Per realizzare questo, vi è la necessità di sviluppare tecniche che utilizzano le informazioni raccolte dal tessuto in vivo e tradurlo in un scaffold in vitro. In questo modo, una piattaforma può essere progettato che ricorda da vicino le proprietà architettonici, funzionali e meccaniche del tessuto in vivo. Il materiale otti...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Collagene di tipo I			Collagene estratto dalla pelle di vitello
Acido cloridrico (HCl)	Sigma-Aldrich	7647-01-0
Soluzione tampone fosfato (PBS Compresse)	MP Biomedical	U5378	1 compressa per 100 ml per 1x PBS
Albumium da siero bovino (BSA)	Sigma-Aldrich	A9647
Glutaraldeide	Sigma -Aldrich	G5882	Toxic
Lard	Fields	3090
Stampi			fresati utilizzando Microlution Machine
Air Brush Kit	Pneumatico centrale	47791
Punta di miscelazione per doppia siringa	Medmix	ML2.5-16-LLM	Mixer, DN2,5X16, 4:1 marrone, med
Piccolo O-ring per doppia siringa	Medmix	PPB-X05-04-02SM	Pistone B, 5 ml, 4:1, PE naturale
Tappo a doppia siringa	Medmix	VLX002-SM	Tappo, 4:1/10:1, PE marrone, med
Grande O-ring per doppia siringa	Medmix	PPA-X05-04-02SM	Pistone A, 5 ml, 4:1
Siringa doppia	Medmix	SDL X05-04-50M	Siringa doppia, 5 ml, 4:1
Dispenser doppia siringa	Medmix	DL05-0400M	Dispenser, 5 ml, 4:1, med, semplice
Laminim			3,6 mg/ml - estratto USC lab
Siringa da 20 ml Luer Lock Tip	BD	302830
Luer Lock Caps	Fisher	JGTCBLLX
HEPES	Sigma -Aldrich	H4034
Gibco Minimo Essenziale Terreni 10x (MEM)	Life Technologies	1143-030
Tripsina	Life Technologies	27250-018
UV Crosslinker	Spectroline UV	XLE1000
Cloride di sodio (NaCl)	Fisher	S271-10	Per preparare Mosconas
Cloruro di potassio (KCl)	Sigma -Aldrich	P5405-250	Per preparare Mosconas
Bicarbonato di sodio (NaHCO3)	Fisher	BP328-500	Per preparare Mosconas
Glucosio	Sigma -Aldrich	G-8270	Per preparare Mosconas
Sodium Phosphate didasic (NaH2PO4)	Sigma-Aldrich	S-7907	Per preparare Mosconas
Filtro sterile per siringhe	Corning	431224