Eliminare cellule specifiche senza danneggiare altre cellule è estremamente difficile, specialmente nei tessuti consolidati, ma c'è un urgente bisogno di un metodo di eliminazione cellulare nel campo dell'ingegneria tissutale. Qui, presentiamo un metodo per l'eliminazione di cellule specifiche da una coltura cellulare 3D mista utilizzando la fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso (NIR-PIT).
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Articolo metodologico
Selective cellulare eliminazione dalla misto Cultura 3D utilizzando una tecnica Near Infrared Photoimmunotherapy
In questo articolo
Sommario
Abstract
I recenti sviluppi nell'ingegneria tissutale offrono soluzioni innovative per molte malattie. Ad esempio, l'ingegneria tissutale che utilizza cellule staminali pluripotenti indotte (iPS) è emersa come un nuovo metodo nella medicina rigenerativa. Sebbene questa rigenerazione dei tessuti sia promettente, la contaminazione con cellule indesiderate durante le colture tissutali è una delle principali preoccupazioni. Inoltre, vi è un problema di sicurezza per quanto riguarda la tumorigenicità dopo il trapianto. Pertanto, c'è un urgente bisogno di eliminare cellule specifiche senza danneggiare altre cellule che devono essere protette, specialmente nei tessuti consolidati. Qui, presentiamo un metodo per l'eliminazione di cellule specifiche da una coltura cellulare 3D mista in vitro con fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso (NIR-PIT) senza danneggiare le cellule non bersaglio. Questa tecnica consente l'eliminazione di cellule specifiche da colture cellulari o tessuti misti.
Introduzione
Eliminando cellule specifiche senza danneggiare altre cellule è estremamente difficile, soprattutto nel tessuto stabilita, e vi è una necessità urgente di un metodo di eliminazione di cella nel campo dell'ingegneria dei tessuti. Al giorno d'oggi nel campo della medicina rigenerativa, colture di tessuti utilizzando cellule staminali embrionali (ES), le cellule staminali pluripotenti (PSC), o cellule staminali pluripotenti indotte (iPS) sono materiali promettenti 1-3.
Anche se questa rigenerazione dei tessuti è promettente, la contaminazione con cellule indesiderate è una preoccupazione importante. I....
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Protocollo
Nota: Il protocollo seguente descrive i passi necessari per eliminare le cellule specifici utilizzando NIR-PIT. Controlli e altri dettagli sulla NIR-PIT e vitalità cellulare può essere trovato altrove 18.
1. Coniugazione del IR700 di anticorpi monoclonali (mAb)
- Preparare mAb di interesse a 2-5 mg / ml in (8.6 pH) soluzione 0,1 M Na 2 HPO 4.
- Mescolare 6.8 nmol di mAb con 30,8 nmol di 10 mm IR700 in 0,1 M Na 2 HPO 4 soluzione (pH 8.6) in una provetta e incubare a temperatura ambiente per 1 ora, coperto con un foglio di alluminio.
- Lavare la colonna PD-10 (vedi tabella dei mater....
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Risultati
Per monitorare otticamente l'effetto di NIR-PIT, la linea cellulare A431, che overexpresses EGFR, è stato geneticamente modificato per esprimere anche GFP e luciferasi (A431-luc-GFP). Come un non-bersaglio di NIR-PIT, la linea di cellule Balb / 3T3 è stato otticamente modificato per esprimere RFP (3T3-RFP). L'APC, panitumumab-IR700 (pan-IR700), è stato sintetizzato. Sferoidi misti, che sono stati composti da vari rapporti di cellule (A431-luc-GFP e 3T3-RFP) sono stati realizzati .......
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Discussione
Abbiamo dimostrato un metodo di eliminazione delle cellule specifiche da una coltura cellulare 3D mista senza danneggiare le cellule non bersaglio utilizzando NIR-PIT. Finora, non esiste un metodo pratico di eliminazione delle cellule volta che il tessuto è stabilita o dopo il trapianto. Così, NIR-PIT è un metodo promettente per raggiungere questo obiettivo. Questa tecnica può anche essere utilizzato in vivo 18,22, poiché APC mostrano una farmacocinetica simile a mAb stessa. Il tipo di cellu.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata sostenuta dal Programma Intramural Research del National Institutes of Health, National Cancer Institute, Centro per la Ricerca sul Cancro.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| IRDye 700DX Estere Colorante a infrarossi | LI-COR Bioscience (Lincoln, NE, USA) | 929-70011 | |
| Na2HPO4 | SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, USA) | S9763 | |
| Colonna Sephadex G25 (PD-10) | GE Healthcare (Piscataway, NJ, USA) | 17-0851-01 | |
| Coomassie (bradford) Plus saggio delle proteine | Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, USA) | PI-23200 | |
| Perfecta3D 96-Well Hanging Drop Plates | 3D Biomatrix Inc (Ann Arbor, MI, USA) | HDP1096-8 | |
| Misuratore di potenza ottica | Thorlabs (Newton, NJ, USA) | PM100 | |
| LED: L690-66-60 | Marubeni America Co. (Santa Clara, CA, USA) | L690-66-60 | |
| Vectibix (panitumumab) | Amgen (Thousand Oaks, CA, USA) | ||
| 35 mm piatto fondo vetro, piatto misura 35 mm, pozzetto misura 10 mm | Cellvis (Mountain View, CA, USA) | D35-10-0-N |
Riferimenti
- Robinton, D. A., Daley, G. Q. The promise of induced pluripotent stem cells in research and therapy. Nature. 481 (7381), 295-305 (2012).
- Yamanaka, S. Induced pluripotent stem cells: past, present, and future. Cell stem cell. 10 (6), 678-684 (2012).
- B....
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Ristampe e permessi
