Eliminating specific cells without damaging other cells is extremely difficult, especially in established tissue, yet there is an urgent need for a cell elimination method in the tissue engineering field. Here, we present a method for specific cell elimination from a mixed 3D cell culture using near infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT).
Recent developments in tissue engineering offer innovative solutions for many diseases. For example, tissue engineering using induced pluripotent stem cell (iPS) emerged as a new method in regenerative medicine. Although this tissue regeneration is promising, contamination with unwanted cells during tissue cultures is a major concern. Moreover, there is a safety concern regarding tumorigenicity after transplantation. Therefore, there is an urgent need for eliminating specific cells without damaging other cells that need to be protected, especially in established tissue. Here, we present a method for specific cell elimination from a mixed 3D cell culture in vitro with near infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) without damaging non-targeted cells. This technique enables the elimination of specific cells from mixed cell cultures or tissues.
القضاء على خلايا معينة دون الإضرار خلايا أخرى أمر صعب للغاية، وخاصة في الأنسجة المعمول بها، وهناك حاجة ملحة لطريقة القضاء خلية في الحقل هندسة الأنسجة. في الوقت الحاضر في مجال الطب التجديدي، مزارع الأنسجة باستخدام الخلايا الجذعية الجنينية (ES)، والخلايا الجذعية المحفزة (الأمنية الخاصة)، أو الناجم عن الخلايا الجذعية المحفزة (آي بي إس) هي مواد واعدة 1-3.
على الرغم من أن هذا تجديد الأنسجة واعد، وتلوث مع الخلايا غير المرغوب فيه هو مصدر قلق كبير. وعلاوة على ذلك، هناك قلق سلامة tumorigenicity بعد زرع 4،5. وعلى الرغم من العديد من الدراسات التي تركز على هذه القضايا للقضاء على خلايا معينة، وخاصة في مجال الطب التجديدي 6-8، ولم تستحدث طريقة عملي.
photoimmunotherapy الأشعة تحت الحمراء القريبة (الجرد الوطني PIT) هو علاج يقوم على conjugat الأجسام المضادة photoabsorberه (APC). يتكون من APC من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة خلية محددة (ماب) وphotoabsorber، IR700. IR700 هو ماء السيليكا فثالوسيانين مشتق ولا يسبب الضيائية في حد ذاته 9. ومترافق IR700 تساهميا إلى الضد عبر بقايا أميد على الجانب سلسلة من الجزيئات يسين. آسيا والمحيط الهادئ تربط الجزيئات المستهدفة على غشاء الخلية ومن ثم يدفع نخر خلية فوري تقريبا بعد التعرض لضوء الجرد الوطني في 690 نانومتر. خلال التعرض لقوائم الجرد الوطنية للضوء، وتمزق الغشاء الخلوي مما يؤدي إلى موت الخلايا 9-14. وقد ثبت الجرد الوطني حفرة لتكون فعالة مع الأجسام المضادة متعددة أو شظايا الأجسام المضادة، بما في ذلك مكافحة EGFR، ومكافحة HER2، ومكافحة PSMA، ومكافحة CD25، ومكافحة mesothelin، ومكافحة GPC3، ومكافحة CEA 15-21. لذلك، الجرد الوطني PIT يمكن استخدامها ضد طائفة واسعة من الجزيئات المستهدفة. وعلاوة على ذلك، الجرد الوطني PIT هو علاج جيد للرقابة التي تسمح المعاملة الانتقائية من مناطق معينة عن طريق تقييد الجرد الوطني من lighر التشعيع 18،22.
هنا، فإننا نقدم وسيلة للقضاء خلية معينة باستخدام الجرد الوطني حفرة من الثقافات 3D المختلطة.
ونحن لشرح طريقة القضاء على خلية معينة من ثقافة خلية 3D المختلطة دون تلف خلايا غير المستهدفة باستخدام الجرد الوطني حفرة. حتى الآن، ليس هناك طريقة عملية لإزالة الخلايا مرة واحدة يتم تأسيس الأنسجة أو بعد الزرع. وهكذا، الجرد الوطني PIT هو وسيلة واعدة لتحقيق ذلك. ويمكن أيضا ?…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا البحث من قبل برنامج جماعية البحوث في المعاهد الوطنية للصحة، المعهد الوطني للسرطان، مركز لأبحاث السرطان.
IRDye 700DX Ester Infrared Dye | LI-COR Bioscience (Lincoln, NE, USA) | 929-70011 | |
Na2HPO4 | SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, USA) | S9763 | |
Sephadex G25 column (PD-10) | GE Healthcare (Piscataway, NJ, USA) | 17-0851-01 | |
Coomassie (bradford) Plus protein assay | Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, USA) | PI-23200 | |
Perfecta3D 96-Well hanging Drop Plates | 3D Biomatrix Inc (Ann Arbor, MI, USA) | HDP1096-8 | |
Optical power meter | Thorlabs (Newton, NJ, USA) | PM100 | |
LED: L690-66-60 | Marubeni America Co. (Santa Clara, CA, USA) | L690-66-60 | |
Vectibix (panitumumab) | Amgen (Thousand Oaks, CA, USA) | ||
35mm glass bottom dish, dish size 35mm, well size 10mm | Cellvis (Mountain View, CA, USA) | D35-10-0-N |