Nuovi parametri per caratterizzare embrionale Allungamento del nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Emmanuel Martin; Olivier Rocheleau-Leclair; Sarah Jenna

doi:10.3791/53712

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Articolo metodologico

Nuovi parametri per caratterizzare embrionale Allungamento del nematode

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DOI:

10.3791/53712

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28 marzo 2016

Emmanuel Martin¹ , Olivier Rocheleau-Leclair¹ , Sarah Jenna¹

¹Department of Chemistry, Pharmaqam, Université du Québec à Montréal

In questo articolo

Sommario

Qui dettagliamo i protocolli specificamente progettati per monitorare i difetti morfogenici che si verificano durante le fasi precoci e tardive dell'allungamento embrionale del nematode Caenorhabditis elegans. In definitiva, questi protocolli sono progettati per identificare i geni che regolano queste fasi e per caratterizzare i loro requisiti differenziali lungo l'asse antero-posteriore dell'embrione.

Abstract

L'analisi delle vie di segnalazione che controllano l'alterazione dei processi morfogenici durante lo sviluppo embrionale richiede metriche robuste e sensibili. L'allungamento embrionale del nematode Caenorhabditis elegans è uno stadio di sviluppo tardivo che consiste nell'allungamento dell'embrione lungo il suo asse longitudinale. Questa fase di sviluppo è controllata dalla comunicazione intercellulare tra le cellule ipodermiche e i muscoli sottostanti della parete corporea. Questi meccanismi di segnalazione controllano la morfologia delle cellule ipodermiche rimodellando il citoscheletro e le giunzioni cellula-cellula. La misurazione della letalità embrionale e dell'arresto dello sviluppo negli stadi larvali, nonché l'alterazione del citoscheletro e delle strutture di adesione cellula-cellula nelle cellule ipodermiche e muscolari, sono fenotipi classici che sono stati utilizzati per più di 25 anni per sezionare queste vie di segnalazione. Studi recenti hanno richiesto lo sviluppo di nuove metriche mirate specificamente all'allungamento precoce o tardivo e alla caratterizzazione dei difetti morfogenici lungo l'asse antero-posteriore dell'embrione. Qui forniamo protocolli dettagliati che consentono di misurare con precisione la lunghezza e la larghezza degli embrioni allungati, nonché la lunghezza delle larve sincronizzate. Questi metodi costituiscono strumenti utili per identificare i geni che controllano l'allungamento, per valutare se questi geni controllano sia le fasi iniziali che quelle tardive di questa fase e sono necessari in modo uniforme lungo l'asse antero-posteriore dell'embrione.

Introduzione

Per quasi 50 anni nematode Caenorhabditis elegans si è affermata come un potente modello per studiare le questioni importanti in fase di sviluppo, neurobiologia, l'evoluzione, interazioni ospite-patogeno, ecc ¹ Il punto di forza di questo modello per lo studio dello sviluppo risiede nella: suo ciclo di vita breve di 3 giorni; la facilità con cui questi animali possono essere geneticamente modificate; la trasparenza che permette l'osservazione di spostamento e la morfologia cellulare in animali viventi e il suo sviluppo che è prevalentemente extra-uterina. Le fasi di sviluppo del nematode coinvolgono embriogenesi e quattro stadi la....