High Throughput test per esaminare Preferenze deposizione delle uova dei singoli<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Sommario

Questo protocollo descrive un test ad alto rendimento per testare le preferenze di deposizione delle uova di Drosophila melanogaster alla risoluzione di un singolo animale. Questo test fornisce una piattaforma semplice, efficiente e scalabile per identificare i geni e i componenti dei circuiti che controllano un semplice processo decisionale.

Abstract

Recentemente, la preferenza deposizione delle uova di Drosophila è emersa come un modello geneticamente trattabili per studiare le basi neurali di semplici processi decisionali. Quando si seleziona siti per depositare le loro uova, mosche femmine sono in grado di rango l'attrattiva relativa delle loro opzioni e scegliere il "maggiore tra due beni." Tuttavia, la maggior parte dei test di preferenza deposizione delle uova non sono pratici se si vuole prendere un approccio sistematico screening genetico per la ricerca di base del circuito alla base di questo semplice processo decisionale, in quanto sono basati sulla popolazione e laborioso da configurare. Per aumentare il throughput di studiare delle preferenze ovaiole di singole donne, abbiamo sviluppato le camere personalizzate che ciascuno può allo stesso tempo saggio preferenze deposizione delle uova fino a trenta individuale vola così come un protocollo che garantisce ogni femmina ha un alto tasso di deposizione delle uova (in modo che la loro preferenza è facilmente distinguibile e più convincente). Il nostro approccio è semplice da eseguiree produce risultati molto consistenti. Inoltre, queste camere possono essere equipaggiate con diversi accessori per consentire la registrazione video gli animali deposizione delle uova e per fornire luce per gli studi optogenetics. Questo articolo fornisce i progetti per la realizzazione di queste camere e la procedura per preparare le mosche per essere analizzati in queste camere.

Introduzione

Drosophila melanogaster è un potente organismo modello genetico per studiare le basi neurali dei comportamenti. I rapidi sviluppi di strumenti genetici per manipolare i neuroni in modo mirato e l'emergere di sofisticati strumenti di analisi comportamentale hanno migliorato significativamente la nostra capacità di sezionare i meccanismi circuitali che sono alla base dei processi di trasformazione senso-motoria di diversi comportamenti innati e appresi^1-3.

La deposizione delle uova di Drosophila è un modello adatto per studiare le basi neurali di semplici processi decisionali. In particolare, le femmine di D....

Protocollo

1. Preparazione mosche da dosare

1. Cultura vola di melasso normali / media farina di mais in incubatore a 25 ° C e 65% di umidità. Fare attenzione a non affollare i flaconi. Per esempio, mettere 8 femmine e 6 maschi in una stretta fiala di cibo.
   Nota: Il "flaconcino cibo stretta" qui utilizzato ha un diametro interno di 2,3 cm. Noi di solito dispensati circa 10 ml di cibo volare in ogni fiala. La ricetta cibo mosca che abbiamo usato è descritto qui: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.html.
2. 2 - 3 giorni dopo femmine eclosion, preparare fiale con pasta di lievito fresca come mostrato nella Figura 1E.

Risultati

Le camere di deposizione delle uova sono composti da diversi pezzi: un pezzo di substrato (in basso), un pezzo di divisione (al centro), un pezzo di carico (in alto), e 2 porte scorrevoli (Figura 1A - D). Questi pezzi sono utilizzati per indipendentemente mosche di impostazione e substrati prima degli esperimenti di deposizione delle uova. La figura 1F mostra come flaconcini devono guardare quando le mosche di sesso femminile sono pronte per la deposizio.......

Discussione

Le camere e protocolli descritti qui sono diversi miglioramenti rispetto ai precedenti test di deposizione delle uova. Innanzitutto, aumentano la velocità di saggiare preferenze dei singoli animali significativamente. Ogni camera può saggiare 30 singole femmine e richiede meno di un'ora di set up. In secondo luogo, aumentano la consistenza delle preferenze di deposizione delle uova rispetto ai metodi precedenti. La standardizzazione delle dimensioni dell'arena, le dimensioni dei substrati deposizione delle uova,.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Agarosio UltraPuro	Invitrogen	16500-500
Saccarosio	Sigma	S0389
Bagnomaria	Fisher	15-462-6Q
LifeCam Cinema webcam	Microsoft	H5D-00013
LED rossi	Cree	C503B-RAN-CA0B0AA1
Camere per la deposizione delle uova Supporti	su misura
Supporti per LED
Fiale per mosche su misura (strette)	Genesee	32-116 a.C

per telecamere su misura .