È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.

Articolo metodologico

Procedura per valutare l'efficienza di flocculanti per la rimozione di particelle disperse di estratti di piante

8.7K visualizzazioni

⸱

DOI:

10.3791/53940

⸱

9 aprile 2016

In questo articolo

Sommario

La procedura di progettazione degli esperimenti qui presentata consente la valutazione di diversi flocculanti in termini della loro capacità di aggregare particelle disperse in estratti vegetali, riducendo così la torbidità e i costi del trattamento a valle.

Abstract

Le piante sono importanti per gli esseri umani non solo perché forniscono materie prime come cibo, mangimi e materie prime, ma sempre più perché possono essere utilizzate come piattaforme di produzione per prodotti a valore aggiunto come i biofarmaci. In entrambi i casi, potrebbe essere necessario chiarificare gli estratti vegetali liquidi per rimuovere il particolato. Una chiarificazione ottimale riduce i costi di filtrazione e centrifugazione aumentando la capacità e la longevità. Ciò può essere ottenuto introducendo polimeri carichi noti come flocculanti, che reticolano le particelle disperse per facilitare la separazione solido-liquido. Non esistono modelli meccanicistici di flocculazione per miscele complesse come gli estratti vegetali, quindi vengono utilizzati modelli empirici. Qui viene descritta una procedura di progettazione degli esperimenti che consente lo screening rapido di diversi flocculanti, ottimizzando la chiarificazione degli estratti vegetali e riducendo significativamente la torbidità. I modelli predittivi risultanti consentono l'identificazione di condizioni di processo robuste e di insiemi di polimeri con proprietà complementari, ad esempio un'efficace flocculazione in estratti con conducibilità specifiche. I risultati presentati per gli estratti di foglie di tabacco possono essere facilmente adattati ad altre specie vegetali o tessuti e faciliteranno quindi lo sviluppo di processi a valle più efficienti in termini di costi per le materie prime e i prodotti farmaceutici di origine vegetale.

Introduzione

Le piante sono ampiamente utilizzati per la produzione di prodotti alimentari quali succhi di frutta, ma possono anche essere sviluppati come piattaforme per la fabbricazione di maggior valore biofarmaceutici 1-3. In entrambi i casi, la lavorazione a valle (DSP) spesso inizia con l'estrazione di liquidi dai tessuti come foglie o frutti, seguita dalla chiarificazione di estratti di particelle cariche 4,5. Per la fabbricazione dei prodotti biofarmaceutici, i costi di DSP possono rappresentare fino al 80% dei costi di produzione complessivi 6,7 e ciò in parte riflette l'alta pressione di particelle presenti negli estratti prepara....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

1. Sviluppare una strategia sperimentale adeguato

  1. Identificare i parametri ambientali e di processo che sono rilevanti per la procedura di flocculazione essere stabilito o ottimizzate, vale a dire che i fattori hanno l'effetto più forte sul flocculazione. Tipicamente, ci sono parecchi tali parametri così un approccio DoE come recentemente descritti 20 è necessario a causa della mancanza di modelli meccanicistici.
    1. Selezionare i parametri (fattori) sulla base di dati di letteratura 12, previa conoscenza ed esperienza con il sistema. Fattori tipici includono tampone pH, conducibilità del buffer, il tempo di incubazi....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

Flocculazione di estratto di tabacco con diversi polimeri

Il metodo sopra descritto è stato usato con successo per sviluppare un processo per la flocculazione di estratti di tabacco durante la produzione di un anticorpo monoclonale (anticorpi HIV-neutralizzanti 2G12) e una proteina fluorescente (DsRed) (Figura 1) 16, e da allora è stato trasferito ad altre proteine, tra cui lectine, malaria candidat.......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

L'aspetto più importante da considerare quando si imposta un DoE per caratterizzare flocculazione delle particelle è che il design deve in linea di principio essere in grado di individuare e descrivere gli effetti attesi o possibili 36,38, come ad esempio l'influenza del pH, tipo di polimero e la concentrazione di polimero 16. Pertanto, è importante valutare la frazione di spazio di progettazione (FDS) prima di iniziare gli esperimenti reali. L'FDS è la frazione di spazio speri.......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

L'autore non ha conflitti di interesse da dichiarare.

Ringraziamenti

Vorrei ringraziare il Dr. Thomas Rademacher per aver fornito i semi di tabacco transgenico e Ibrahim Al Amedi per aver coltivato le piante di tabacco. Desidero ringraziare il Dr. Richard M. Twyman per l'assistenza editoriale e il Prof. Dr. Rainer Fischer per le fruttuose discussioni. Questo lavoro è stato finanziato in parte dall'European Research Council Advanced Grant ''Future-Pharma'', proposta numero 269110, dalla Fraunhofer-Zukunftsstiftung (Fraunhofer Future Foundation) e dai programmi interni Fraunhofer-Gesellschaft nell'ambito della sovvenzione n. Attira 125-600164.

....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Torbidimetro portatile 2100PHach4650000Torbidimetro
2G12 anticorpoPolymunAB002Anticorpo di riferimento
Biacore T200GE Healthcare28-9750-01Dispositivo SPR
BP-410Furh2632410001Filtro a maniche
Catiofast VSHBASF79002360Agente
flocculanteCentrifuga 5415DEppendorf5424 000.410Centrifuga
Provetta da centrifuga 15 mlLabomedic2017106Provetta di reazione
Provetta da centrifuga 50 ml autoportanteLabomedic1110504Provetta di reazione
ChitosanCarl Roth GmbH5375.1Agente flocculante
Design-Expert(R) 8Stat-Ease, Inc.n.a.SoftwareDoE
Fosfato disodicoCarl Roth GmbH 4984,3 Componente multimediale
Ferty 2 MegaKammlott5.220072Fertilizzante
Forma -86C ULT congelatoreThermoFisher88400
Congelatore Serran.a.n.a.Perla coltivazione di piante
Grodan Rockwool Cubs 10 x 10 cmGrodan102446Rockwool block
HEPESCarl Roth GmbH9105.3Media component
K700P 60DPall5302305Strato filtrante di profondità
KS50P 60DPallB12486Strato filtrante di profondità
MiraclothLabomedic475855-1RTessuto filtrante
MultiLine Multi 3410 IDSWTWWTW_2020pHmetro / conduttimetro
Osram bianco freddo 36 WOsram4930440Sorgente luminosa
PhytotronIlka Zelln.a.Perla coltivazione di piante
Polymin PBASF79002360Agente flocculante
POLYTRON PT 6100 DKinematica11010110Dispositivo di omogeneizzazione con utensile a lama personalizzato
Proteina ALife technologies10-1006Proteina legante gli anticorpi
Cloruro di sodioCarl Roth GmbHP029.2Componente multimediale
Synergy HTBioTekSIAFRTLettore di piastre a fluorescenza
TRISCarl Roth GmbH4855.3Componente multimediale
Tween-20Carl Roth GmbH9127.3Componente multimediale
VelaPad 60PallVP60G03KNH4Alloggiamento del filtro
Zetasizer Nano ZSMalvernZEN3600Misurazione della distribuzione granulometrica DLS

Riferimenti

  1. Godfray, H. C. J., et al. Food Security: The Challenge of Feeding 9 Billion People. Science. 327, 812-818 (2010).
  2. Fischer, R., Schillberg, S., Buyel, J. F., Twyman, R. M. Commercial aspects of pharmaceutical protein production in plants. Curr. Pharm. Des. 19

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Esplora altri articoli

Efficienza del flocculantechiarificazione di estratti vegetaliprogettazione degli esperimentimisurazione della torbiditàscreening dei polimeriprocesso di flocculazionefiltrazione a profonditàestratto di foglie di tabaccoottimizzazione del processoseparazione solido-liquido