Method Article

Registrazione simultanea di elettroretinografia e Potenziali evocati visivi nei ratti anestetizzati

DOI:

10.3791/54158

⸱

July 1st, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Optometry and Vision Sciences, University of Melbourne

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo protocollo descrive la misurazione simultanea dell'elettroretinogramma e dei potenziali evocati visivi in ratti anestetizzati.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L'elettroretinogramma (ERG) e il potenziale evocato visivo (VEP) sono comunemente usati per valutare l'integrità del percorso visivo. L'ERG misura le risposte elettriche della retina alla stimolazione luminosa, mentre il VEP misura la corrispondente integrità funzionale delle vie visive dalla retina alla corteccia visiva primaria a seguito dello stesso evento luminoso. La forma d'onda ERG può essere suddivisa in componenti che riflettono le risposte di diverse classi di cellule retiniche, neuronali e gliali. I componenti precoci della forma d'onda VEP rappresentano l'integrità del nervo ottico e dei centri corticali superiori. Queste registrazioni possono essere condotte in isolamento o insieme, a seconda dell'applicazione. La metodologia descritta in questo articolo consente la valutazione simultanea dell'elettrofisiologia degli evocati visivi retinici e corticali da entrambi gli occhi e da entrambi gli emisferi. Questo è un modo utile per valutare in modo più completo la funzione retinica e gli effetti a monte che i cambiamenti nella funzione retinica possono avere sulla funzione corticale evocata visivamente.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Misura della elettroretinogramma (ERG) e potenziali evocati visivi (PEV) fornire valutazioni quantitative utili dell'integrità della via visiva. L'ERG misura le risposte elettriche della retina alla stimolazione luminosa, mentre il VEP misura corrispondente integrità funzionale delle vie visive dalla retina alla corteccia visiva primaria seguendo lo stesso evento luce. Questo manoscritto descrive un protocollo per la registrazione e analisi delle risposte ERG e PEV in un modello di laboratorio comunemente usato, il ratto.

Il ERG fornisce un indice della integrità funzionale di un certo numero di classi principali di cellule retiniche quantificando risposta elettrica lordo del retina un lampo di luce. Una serie coordinata di flussi ionici iniziata da insorgenza luce e offset, producono cambiamenti rilevabili in tensione che può essere misurato con elettrodi di superficie posizionati al di fuori dell'occhio. La forma d'onda risultante rappresenta la combinazione di un séRies di componenti ben definiti, che differiscono in ampiezza, i tempi e la frequenza. Una importante ricerca ha dimostrato che questi componenti sono relativamente ben conservati tra i molti retine vertebrati e che i componenti possono essere separati l'uno dall'altro. Selezionando giudiziosamente lo stimolo (stimolo flash, sfondo, intervallo interstimulus) le condizioni e la scelta di caratteristiche specifiche della forma d'onda composita di analizzare si può essere sicuri di tornare una misura di un gruppo specifico di cellule retiniche 1,2. Queste caratteristiche sono alla base del programma di utilità e quindi le applicazioni diffuse della ERG come una misura non invasiva della funzione della retina. Questo manoscritto si concentra sulla metodologia per misurare l'ERG e analizzando le sue caratteristiche per restituire informazioni su alcune delle principali classi di cellule nella retina, vale a dire fotorecettori (il componente PIII), cellule bipolari (il componente PII) e le cellule gangliari della retina (il positivo risposta soglia scotopica o PSTR).

Il VEP offre un saggio della risposta corticale alla luce; prima proveniente dalla retina e successivamente comunicato seriale tramite il nervo ottico, tratto ottico, talamo (genicolato laterale nucleo, LGN) e la radiazione ottica all'area V1 della corteccia 3. Nei roditori, la maggioranza (90 - 95%) di fibre del nervo ottico da ciascun occhio decussate 4 e innervano controlaterale cervello medio. A differenza della ERG, è ancora possibile attribuire diversi componenti del VEP a classi cellulari specifici, 5 cambia così ovunque lungo il percorso visivo potrebbe influenzare la forma d'onda VEP. Tuttavia, il VEP è una misura utile non invasiva di prestazioni visive e dell'integrità via visiva. Il VEP, quando utilizzato in combinazione con l'ERG, può fornire una valutazione più completa del sistema visivo (cioè, retina / via visiva).

ERG e PEV registrazioni possono essere condotte isolatamente o in combinazione, a seconda del applicazione. La metodologia descritta in questo documento permette la valutazione contemporanea di elettrofisiologia evocati visivi della retina e corticale da entrambi gli occhi e entrambi gli emisferi nei ratti anestetizzati. Questo è un modo utile per valutare in modo più completo la funzione della retina e gli effetti a monte che i cambiamenti nella funzione retinica possono avere sulla funzione corticale evocati visivi.

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutte le procedure sperimentali sono state condotte secondo il Codice di condotta australiano per la cura e l'uso di animali a scopi scientifici, stabilito dal National Health and Medical Research Council in Australia. Etica spazio è stato ottenuto presso l'Università di Melbourne, Facoltà di Scienze, comitato etico degli animali (numero di riconoscimento 0.911.322,1).

1. Pre-impianto di elettrodi cronica VEP

Nota: Se simultanei segnali ERG e PEV devono essere raccolti gli animali devono essere impiantati chirurgicamente con VEP elettrodi di almeno 1 settimana prima per segnalare la raccolta.

  1. Sterilizzare la panchina chirurgica prima sperimentazione pulendo con clorexidina (0,5% nel 70% di etanolo). Autoclave tutte apparecchi chirurgici prima dell'uso. Coprire l'animale con un telo chirurgico sterilizzato. Assicurarsi che tutti gli sperimentatori indossare mascherine chirurgiche, camici e guanti sterilizzati.
  2. Indurre l'anestesia: 3 - 3,5% isoflurano con O 2 ad una portata di 3 l / min. mantenere anesthesia al 1,5% e 2 L / min durante l'intervento chirurgico. Garantire la sufficiente profondità dell'anestesia per l'assenza di zampa pizzico reflex.
  3. Applicare 1% di sodio carbossimetilcellulosa sulla cornea per evitare l'essiccazione degli occhi.
  4. Rasatura 30 mm Area x 30 mm sopra la fronte, posteriormente agli occhi e anteriore alle orecchie.
  5. Mettere animale su un blocco di calore (37 ° C) per mantenere la temperatura corporea e stabilizzare la testa animali con un telaio stereotassico.
  6. Disinfettare la zona rasata con il 10% povidone-iodio tre volte. Evitare l'uso di antisettici a base alcolica per l'area vicino all'occhio, essere coerente con la norma di prassi illustrato dall'Associazione dei tecnologi chirurgici.
  7. Effettuare una incisione mediana sagittale sulla testa con un bisturi e da questo accise un ~ 20 millimetri cerchio di diametro di tessuto dermico per esporre l'osso cranico.
  8. Rimuovere periostio sottostante raschiando e asciugare con una garza per esporre le suture craniche coronali e sagittali.
  9. Noiing una fresa dentale attaccato ad un trapano, trapano due fori (0,7 mm di diametro, profondità ~ 1 mm) attraverso il cranio su entrambi gli emisferi ai stereotassica coordinate: 7 mm caudale a Bregma 3 mm lateralmente alla linea mediana.
  10. Avvitare viti in acciaio inossidabile (diametro 0,7 mm lunghezza 3 mm sterilizzato con clorexidina) nei due fori pre-fatti fino ad una profondità di circa 1 mm (2 mm vite esposto) per consentire fissaggio sicuro. Questa contatti la dura senza danneggiare il tessuto corticale sottostante.
  11. Preparare area chirurgica per l'amalgama dentale con l'essiccazione l'osso cranico con una garza, e ritraendo pelle flaccida con due 3-0 punti di sutura a ~ 4 e 08:00.
  12. Stendere l'amalgama dentale sul cranio esposto per fissare gli elettrodi a vite (viti in acciaio inox descritte al punto 1.10) in atto. Assicurarsi ~ 1,5 mm delle viti rimangono esposti per la registrazione.
  13. Rimuovere le suture retrazione.
  14. Iniettare 0,5% sottocutanea carprofen (5 mg / kg) per l'analgesia e soluzione salina (cloruro di sodio 0,9%, 10,5 ml) per via sottocutanea per la sostituzione del fluido.
  15. Lasciare animali di recuperare in gabbie separate. Non lasciare animali incustoditi fino a quando non ha ripreso conoscenza sufficiente a mantenere decubito sternale.
  16. Non restituire animali alla compagnia di altri animali fino a quando non ha pienamente recuperato da un intervento chirurgico (minimo 5 giorni).
  17. Continuare somministrare 0,5% sottocutanea carprofen per l'analgesia (5 mg / kg) una volta al giorno per 4 giorni.
  18. Record ERG e PEV 1 settimana dopo l'intervento.

2. ERG e PEV registrazione

  1. Preparazione La raccolta dei dati
    1. Utilizzare il software del computer per attivare contemporaneamente stimolo e acquisire dati 2 in base alle impostazioni consigliate di seguito.
      1. Amplificare i segnali 3 (ERG: × 1.000, VEP: x10,000) con il guadagno impostato internamente da un isolato di pre-amplificatore e amplificatore, e con entrambi gli occhi abbinati per l'impedenza.
      2. frequenza di campionamento Set per l'ERG a 4 kHz per un 650finestra di registrazione msec (2.560 punti), per fare questo, fare clic sulla scheda per la "base dei tempi" nel software di acquisizione dati (per il nome e la versione del software si veda la tabella dei materiali), selezionare "2560" per i campioni, e "500 ms" per il tempo che restituirà una finestra di registrazione di 650 msec.
        1. Utilizzare lo stesso metodo per impostare la frequenza di campionamento per la VEP a 10 kHz sopra un'epoca msec 250. Lasciare un msec base 10 pre-stimolo per entrambe le registrazioni ERG e PEV. Per fare questo, fare clic sulla scheda "Impostazioni"; selezionare "stimolatore" per aprire una nuova finestra di dialogo; in quella finestra selezionare "pulse" dalla discesa di "Mode" verso il basso; e impostare il valore per il "ritardo" a "10 ms".
      3. Passa-banda Set ERG filtraggio a 0,3 - 1.000 Hz (- 3 dB). Questo viene fatto clic "Bio Amplifier" nel software di acquisizione dati. Quindi impostare il valore per "passa alto" a "0.3Hz", e il valore per "passa-basso" a "1 kHz".
      4. Utilizzando il metodo di cui sopra in 2.1.1.3, impostare le impostazioni passa-banda VEP a 0.1 - 100 Hz (- 3 dB), come raccomandato dalla Società Internazionale per Elettrofisiologia clinica di Vision (ISCEV) per le registrazioni VEP umano 6.
  2. preparazione degli elettrodi
    1. Custom-fare le ERG elettrodi attivi / Inattivo Attivo / inattivo e VEP collegando filo d'argento o di un coccodrillo ad un cavo elettrodo, rispettivamente, 2. Commercialmente ottenere elettrodo di massa.
    2. Per i 4 elettrodi su misura, tagliare l'estremità maschio dall'estensione piombo degli elettrodi. Rimuovere 1 cm del rivestimento isolante politetrafluoroetilene esterna con una lama di bisturi garantire il filo interno non sia danneggiato.
    3. Pre-fashion le ERG elettrodi inattive tagliando una lunghezza di 70 mm filo d'argento (spessore 0,3 millimetri) e forma un anello ~ 8 mm di diametro per circondare l'occhio di ratto. Preparare un cerchio uniforme modellando l'anello su una punta della pipetta 1 ml.
    4. Pre-fashion PEV elettrodi inattive tagliando una lunghezza di 70 mm argento e formare un'ellisse ~ 8 mm di diametro senso della lunghezza per agganciare incisivi ratto.
    5. Pre-moda le ERG elettrodi attivi dal taglio di una lunghezza di 30 mm di filo d'argento e formando un piccolo anello di contattare delicatamente la cornea di ratto (~ 1-2 mm di diametro)
    6. Fissare in modo sicuro elettrodi (2 ERG attiva, 2 ERG inattivo, 1 VEP inattivo) al cavo di elettrodo intrecciando l'argento con il filo interno esposto.
    7. Isolare metallo esposto in eccesso con del nastro adesivo per ridurre gli artefatti fotovoltaici.
    8. Sugli elettrodi inattive ERG bastone un piccolo pezzo di gancio-e-velcro (di ~ 5 mm × 20 mm) per il nastro adesivo per consentire l'attaccamento stabile per la tracolla roditore.
    9. Fissare coccodrillo per il filo interno dell'elettrodo porta a fare gli elettrodi attivi PEV.
    10. Prima di registrazioni, placcare le superfici esposte dei fili d'argento (cioè, l'anello inattiva e active punta) con cloruro utilizzando una fonte 9 V CC per 20 secondi per migliorare la conduzione del segnale.
      1. Per fare questo, immergere la punta d'argento del filo dell'elettrodo ERG (in qualità di anodo di una cella primaria) in soluzione fisiologica; collegare l'altra estremità del filo dell'elettrodo al terminale positivo di una batteria 9 V.
      2. Collegare un altro filo (catodo) al terminale negativo della batteria, ed immergere l'altra estremità in salina pure. Scollegare dopo 20 secondi e osservare la punta frammento del filo dell'elettrodo ERG da rivestire in modo uniforme nel colore bianco.
        Nota: Preparare nuovi elettrodi ERG per ogni sessione sperimentale (~ fino a 8 ore) per assicurare la pervietà del rivestimento di cloruro.
  3. preparazione degli animali
    1. Dark-adattare gli animali durante la notte (≥ 8 ore) prima di registrazioni in una camera a tenuta di luce. Garantire la massima adattamento al buio spegnendo luci della stanza, chiudendo tutte le porte e le persiane. Ridurre al minimo la dispersione della luce mettendo materiali a prova di luce intornogiunzioni di porte / finestre e schermi di computer collocazione al di fuori spesse tende nere.
    2. Condurre la preparazione degli animali in una stanza buia con l'aiuto di dim rosso diodi emettitori di luce (LED; 17,4 cd.m -2, λ max = 600 nm) per sostenere la sensibilità asta.
    3. Anestetizzare ratto iniettando ketamina / xilazina (60: 5 mg / kg) per via intramuscolare. Conferma sufficiente profondità dell'anestesia dall'assenza di un riflesso paw pinch.
    4. Per mantenere sedazione, somministrare una dose aggiuntiva di anestesia (50% della dose iniziale) dopo 50 min se necessario.
    5. Per ulteriori anestesia topica applicare una goccia di 0,5% proximetacaina a ciascun occhio, e lampeggia fuori il liquido in eccesso.
    6. Per la dilatazione della pupilla applicare una goccia di 0,5% tropicamide a ciascun occhio, poi asciugare il liquido in eccesso.
  4. ERG e PEV posizionamento degli elettrodi
    1. Posizionare animale sulla piattaforma di ERG davanti ciotola Ganzfeld situata nella gabbia di Faraday. Evitare l'uso di un rilievo di riscaldamento elettrico, come si cun introdurre rumore elettrico nelle registrazioni elettrofisiologiche. Nota: La piattaforma è collegata a una piattaforma circolare acqua riscaldata per mantenere la temperatura corporea.
    2. animale sicuro alla piattaforma con una striscia di gancio-e-velcro posto con fermezza, ma non strettamente intorno alla nuca.
    3. Agganciare gli inattivi VEP elettrodo intorno incisivi inferiori del topo anestetizzato.
    4. Posizionare gli elettrodi inattive ERG circondando l'anello sclerale in modo non invasivo intorno all'equatore dell'occhio. Stabilizzare questo collegando gli elettrodi alla striscia di fissaggio hook-and-loop intorno alla nuca. Ripetere l'operazione per l'occhio controlaterale.
    5. Fissare VEP elettrodi attivi per il fissaggio morsetti a coccodrillo di viti in acciaio inossidabile pre-impiantati sul cranio.
    6. Mettere una piccola goccia di 1% di sodio carbossimetilcellulosa sulla cornea prima del posizionamento dell'elettrodo attivo ERG per migliorare la qualità del segnale. Nota: Il fluido viscoso aiuta anche a mantenere l'idratazione corneale durante la sperimentazione di miniMize la formazione di essiccazione-tipo di cataratta nei roditori 7.
    7. Mettere una piccola goccia di 1% sodio carbossimetilcellulosa sugli incisivi inferiori per migliorare il contatto dell'elettrodo inattiva VEP e quindi segnalare qualità.
    8. Posizionare gli elettrodi attivi ERG a toccare leggermente la superficie corneale centrale utilizzando un micromanipolatore attaccato ad un braccio stereotassica custom-built.
    9. Inserire 2 - 5 mm dell'elettrodo spillo terra (acciaio inox) per via sottocutanea nella coda.
    10. Se necessario asciugare il liquido in eccesso dalla palpebra inferiore prima di registrare per migliorare la qualità del segnale.
    11. piattaforma di scorrere più vicino alla ciotola Ganzfeld assicurare gli occhi dell'animale si allineano con l'apertura della vasca per consentire un'illuminazione uniforme di entrambe le retine (vedi punto 2.4.1).
    12. Chiudere la gabbia di Faraday per ridurre il rumore estranei.
  5. Raccolta dati
    1. Utilizzare un dim test-flash (- 0,52 log cd.sm -2) per valutare se l'elettrodo collocament è soddisfacente 2. In condizioni di controllo ciò comporterebbe un'ampiezza ERG di ~ 800 mV ed una variabilità inter-eye non superiore al 10%. Se gli elettrodi Riposizionare richiesti.
    2. Dopo il test-flash consentire agli animali di scuro si adattano per 10 minuti al buio completo prima della registrazione.
    3. lampi attuali di stimoli luminosi che utilizzano una ciotola Ganzfeld mentre la raccolta di ERG e PEV segnali contemporaneamente più di un ~ 500 finestra temporale msec. Il progresso da dimmer ne più chiara livelli di luce al fine di mantenere una sufficiente adattamento al buio per particolari forme d'onda.
    4. Raccogliere i segnali in un range di energie luminose di suscitare STR, b-wave e a / b forme d'onda delle onde della ERG. Media più segnali a livello commutazione luce (20 ripetizioni), inferiore a energie più luminosi luminosi (1 ripetizione). A poco a poco allungare l'intervallo inter-stimolo da 1 a 180 secondi dal più debole al livello di luce più brillante. Vedi Tabella 1 per un protocollo di esempio.
    5. per isofine dell'asta e cono risposte ERG, utilizzare un paradigma accoppiato-Flash 8. Iniziare quattro lampeggia a 1,52 log cd.sm -2 con un intervallo di 500 msec inter-stimolo 2 in-between. Sottrarre digitalmente la forma d'onda del cono (3 ° e 4 ° flash) dalla forma d'onda mista (1 ° flash) per ricavare la risposta dell'asta putativo.
    6. Per registrare i segnali VEP, media di 20 ripetizioni alle energie più luminoso luminosi (ad esempio, - 0,52-1,52 registro cd.sm -2, 5 sec intervallo inter-stimolo). Si noti che il primo flash in questa sequenza restituisce la risposta convenzionale adattato al buio ERG.
    7. Lasciare 1 - 3 min per riadattamento dopo (20) VEP spazza prima della successiva luminoso ERG passo, a seconda dell'energia luminosa.
    8. Dopo il completamento della raccolta dei dati, l'eutanasia l'animale anestetizzato con iniezione intracardiaca di sodio pentobarbital (325 mg / ml, 3 ml).
Forma d'onda Energia luminosa Stimolo (log cd.sm -2) Numero di ripetizioni Intervallo interstimolo (sec)
STR -6,24 20 2
STR -5,93 20 2
STR -5.6 20 2
STR -5,33 20 2
Rod B-wave -4,99 10 2
Rod B-wave -4,55 10 2
Rod B-wave -4,06 5 5
Rod B-wave -3,51 5 5
Rod B-wave -3,03 1 15
Rod B-wave -2.6 1 15
Rod B-wave -1.98 1 15
a- mista / b-wave -1.38 1 30
a- mista / b-wave -0.94 1 30
Flash 1: Mixed a- / b-wave media di 20: VEP -0.52 20 5
(90 sec prima del prossimo)
Flash 1: Mixed a- / b-wave media di 20: VEP 0.04 20 5
(120 sec prima del prossimo)
Flash 1: Mixed a- / b-wave media di 20: VEP 0.58 20 5
(180 sec prima del prossimo)
flash 1: Mixed a- / b-wave media di 20: VEP 1.2 20 5
(180 sec prima del prossimo)
Flash 1: Mixed a- / b-wave media di 20: VEP 1.52 20 5
(180 sec prima del prossimo)
Cono a- / b-wave 1.52 4 0.5

Tabella 1. ERG e PEV registrazione protocollo utilizzando una gamma di stimolo energia. Presentazioni di stimolo progressi da dim (in alto) per luminose (in basso) lampeggia, con sufficiente intervallo inter-stimolo al fine di garantire l'adattamento scuro. Alla fine del protocollo, ripetizione di quattro flash con breve intervallo viene presentato per suscitare la risposta mediata cono.

3. Analisi delle forme d'onda ERG

Nota: ERG e PEV analisi è stata descritta in dettaglio in precedenza 3,9,10 The.seguenti sezioni forniscono una breve panoramica.

  1. segnali di esportazione in formato tensione digitale in tempo ad un software foglio di calcolo per l'analisi dei dati.
  2. Funzione photoreceptoral Rod
    1. Modellare il bordo anteriore della un-onda PIII con un ritardo gaussiana (Equazione 1) 11.
      PIII (i, t) = Rm PIII ∙ [1 - exp (- i ∙ S (t - t d) 2)] per t> t D (Equazione 1)
    2. Ottimizzare la misura su un insieme di due energie più brillanti luminosi 12,13 (cioè, 1,22 e 1,52 log cd.sm -2).
    3. Modello fino al 90% dell'ampiezza un onda per evitare intrusioni post-recettoriali 14.
      Nota: Il modello riporta l'ampiezza saturo (Rm PIII, mV), la sensibilità (S, m 2 .CD -1 .s -3) e il ritardo (t d, msec) della risposta photoreceptoral.
  3. Rod funct cellule bipolariione
    1. sottrarre al computer il modello PIII (vedi sopra) dalle forme d'onda misti per restituire il mista PII con potenziali oscillatorie soprastanti.
    2. Per estrarre il PII asta dal mista PII, sottrarre digitalmente la risposta cono (3 ° e 4 ° lampo a 1.52 log cd.sm -2) dal mista PII (1 ° lampo a 1.52 log cd.sm -2).
    3. Quindi, applicare un filtro passa-basso per la forma d'onda (46.9 Hz, -3 dB, finestra Blackman) per rimuovere potenziali oscillatori. La forma d'onda residua è l'asta risposta PII 10.
    4. Estrarre il picco di ampiezza asta di PII e tracciare contro tutte le intensità di stimolo (inferiore a -2 log cd.sm -2 e l'asta-isolato PII a 1,52 log cd.sm -2) 10.
    5. Modello questi dati utilizzando una funzione iperbolica (Equazione 2), che fornisce una misura della integrità delle cellule della retina interna.
      V (i) = V max (i n / (n i+ K n)) (Equazione 2)
      Nota: Questa equazione restituisce risposta PII massima (V max, mV), 1 / sensibilità (k, log cd.sm-2) e la pendenza della funzione (n) 15.
  4. la funzione delle cellule bipolari Cone
    Nota: Poiché la risposta del cono è preso in una sola intensità (1,52 log cd.sm -2) l'ampiezza e la tempistica sono retuned a questo livello di luce.
    1. Estrarre massima cono PII risposta 2,16.
    2. Estrarre il tempo implicito a che questa risposta massima corrisponde 2,16.
  5. la funzione delle cellule gangliari
    1. Poiché la STR è un piccolo segnale, applicare un filtro passa basso con 50 Hz tacca alla forma d'onda per eliminare alta frequenza e rumore (46,9 Hz, -3 dB, finestra Blackman).
    2. Estrarre risposta massima PSTR 3,17.
    3. Estrarre il tempo implicito a che questa risposta massima corrisponde 3,17.

4. Analisi delle forme d'onda VEP

  1. Estrarre componenti massimi e minimi della VEP (P1, N1 e P2). Per i dettagli vedi riferimenti 3,6.
  2. Ampiezze Express come ampiezze di valle-picco rispetto al picco precedente o depressione (P1N1 e N1P2) 3,6.
  3. Estrarre tempo implicita (esso) a cui questa massimi corrisponde risposta (P1 esso, N1 esso, P2 esso) 3,6.

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L'ERG un onda (> -1.38 log cd.sm -2), b-onde (> - 4,99 log cd.sm -2) STR (<- 4,99 log cd.sm -2) e le PEV (> - 0,52 cd.sm log -2) sono state registrate contemporaneamente (Figura 1 e 3). Al molto dim lampeggia, un STR positivo (PSTR) è visto a circa 110 msec dopo il flash, e STR ​​negativo (nSTR) in circa 220 msec (Figure 1 e 2). Un ERG con un grande b-wave, picchi tra 50 a 100 msec dopo l'inizio di ...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L'ERG e VEP sono misure oggettive della funzione visiva dalla retina e la corteccia, rispettivamente. Il vantaggio di registrazione simultanea è che una visione più completa di tutto il percorso visivo è prestata. In particolare, le informazioni complementari da loro valutazione concomitante potrebbe fornire una più chiara delimitazione del sito di lesioni in via visiva (per esempio, per i disturbi con sovrapposizione ERG ancora distinto VEP manifestazioni 18, quando neuropatia ottica può coesist...

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gli autori non hanno divulgazioni rilevanti per questo lavoro.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Il finanziamento per questo progetto è stato fornito dal National Health and Medical Research Council (NHMRC) 1046203 (BVB, AJV) e dal Melbourne Neuroscience Institute Fellowship (CTN).

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Clip a coccodrillomarca genericaHM3022Clip da 26 mm in acciaio inox per il collegamento di elettrodi a vite VEP ai cavi
BioamplificatoreADInstrumentsML 135Per amplificare i segnali ERG e VEP
Carbossimetilcellulosa sodica 1,0%AllerganCAS 0009000-11-7Fluido viscoso per migliorare la qualità del segnale dell'elettrodo ERG attivo
Carprofene 0,5%Pfizer Animal Health GroupCAS 53716-49-7Nome commerciale: Rimadyl iniettabile (50 mg/ml). Per l'analgesia post-operatoria, diluito allo 0,5% (5 mg/ml) in soluzione fisiologica normale
Cloresadina 0,5%Orion Laboratories27411, 80085Per la disinfezione degli strumenti chirurgici
Bagno d'acqua circolanteLauda-Kö nigshoffenMGW LaudaPer il mantenimento della temperatura corporea dell'animale anestetizzato durante l'intervento chirurgico e le registrazioni elettrofisiologiche
Amalgama dentaleDeguDent GmbH64020024Per incastrare il gruppo elettrodo-cranio per renderlo più robusto
Fresa dentaleStorz Instruments, Bausch e Lomb#E0824AUna testa di perforazione in miniatura di ~ 0,7 mm di diametro per praticare un piccolo foro nel cranio su ogni emisfero per impiantare viti VEP
TrapanoBoschDremel serie 300Un trapano automatico per la trapanazione
Elettrodo di piomboErba Telefattore F-E2-30Cavi in platino per il collegamento di elettrodi a filo d'argento all'amplificatore
Gabbia di Faradaysu misuraGarantisce la prova della luce per mantenere l'adattamento al buio. Racchiude la configurazione Ganzfeld per migliorare il rapporto segnale/rumore
Tamponi di garzaMultigate Medical Products Pty Ltd57-100BPer asciugare l'incisione chirurgica e la superficie esposta del cranio durante l'intervento chirurgico
Sfera di integrazione GanzfeldPhotometric Solutions InternationalStimolatore di luce progettato su misura: diametro 36 mm, apertura 13 cm
VelcroVELCRO Australia Pty LtdVELCRO Marca Riutilizzabile AvvolgimentoChiusura a strappo per fissare gli elettrodi e l'animale sulla piattaforma di registrazione
Isoflurano 99,9%Abbott Australasia Pty LtdCAS 26675-46-7Nome proprietario: Isoflo(TM) Anestetico per inalazione. Anestetico per inalazione di grado farmaceutico miscelato con ossigeno gassoso per chirurgia implantare elettrodi VEP
Ketamina Troy LaboratoriesIlium KetamilNome proprietario: Ketamil Injection, Marca: Ilium. Anestetico di grado farmaceutico per la registrazione elettrofisiologica
Luxeon LEDPhillips Lighting Co.Per la stimolazione luminosa venti LED da 5 W e uno da 1 W.
MicromanipolatoreHarvard ApparatusBS4 50-2625Mantiene l'elettrodo attivo ERG durante le registrazioni
Elettrodo ad agoErba Telefattore F-E2-30Inserito per via sottocutanea nella coda per fungere da elettrodo di terra sia per l'ERG che per il VEP
Fenilefrina 2,5% minimi.Bausch and LombCAS 61-76-7Instillato con Tropicamide per ottenere la massima dilatazione per la registrazione ERG
Iodio povidone 10%Sanofi-AventisCAS 25655-41-8Nome proprietario: Betadine, Antisettico per preparare la pelle rasata per l'intervento chirurgico 10%, 500 ml
Sistema di acquisizione dati PowerlabADInstrumentsML 785Controlla i LED
Proxymetacaina 0,5%Alcon Laboratories& nbsp;CAS 5875-06-9Per l'anestesia corneale durante le registrazioni ERG
Soluzione salinaGelflexNon iniettabile, per elettrodi a filo d'argento galvanica
Scope SoftwareADInstrumentsversione 3.7.6Attiva simultaneamente lo stimolo tramite il sistema Powerlab e raccoglie i dati
Argento (filo rotondo sottile)A& E metallo0,3 mmUtilizzato per realizzare elettrodi ERG attivi e inattivi e l'elettrodo VEP inattivo
Viti a spirale in acciaio inossidabile MicroFasterners0,7 mm di diametro dello stelo e 3 mm di lunghezza da impiantare sulla corteccia visiva primaria e fungere da elettrodi VEP attivi
Telaio stereotassicoDavid KopfModello 900Uno strumento stereotassico per piccoli animali per localizzare le cortecce visive primarie secondo Paxinos & L'atlante del cervello di ratto di Watson del 2007 coordina
la lama chirurgicaSwann-Morton Ltd.0206Per incidere l'area della pelle che si sovrappone alla corteccia visiva primaria per impiantare gli elettrodi VEP
SuturaShanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd3-0 sutura intrecciata di seta non assorbibile, per la retrazione della pelle durante l'intervento chirurgico di impianto di elettrodi VEP
Unguento per gli occhi alla tobramicina 0,3%Alcon LaboratoriesCAS 32986-56-4Nome proprietario: Tobrex. Unguento antibiotico profilattico applicato intorno alla ferita cutanea dopo l'intervento chirurgico
Tropicamide 0,5%Alcon Laboratories CAS 1508-75-4Nome commerciale: 0,5% Mydriacyl eye drop, instillato per ottenere la midriasi per la registrazione ERG
XilazinaTroyLaboratories Ilio Xilazil-100Anestetico di grado farmaceutico per la registrazione elettrofisiologica
Punta per pipetteEppendorf Pty Ltd0030 073.169Eppendorf epTIPS 100 - 5.000 ml, per elettrodi su misura
Microsoft Office ExcelMicrosoftversione 2010foglio di calcolo software per l'analisi dei dati
Lethabarb Eutanazia IniezioneVirbac (Australia) Pty LtdLETHA450325 mg/ml pentobarbital sodico per eutanasia rapida

References

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