Articolo metodologico

Un semplice citometria a flusso metodo per misurare il glucosio assorbimento e glucosio Expression Transporter per monociti sottopopolazioni nel sangue intero

DOI:

10.3791/54255

⸱

12 agosto 2016

 ,  ,  ,  , 
1Centre for Biomedical Research, Macfarlane Burnet Institute for Medical Research and Public Health, 2Department of Infectious Diseases, Monash University, 3Department of Microbiology and Immunology, University of Melbourne, 4Department of Microbiology, The University of the West Indies, 5Division of Experimental Medicine, Department of Medicine, University of California, San Francisco, 6Department of Medicine, Monash University

In questo articolo

Sommario

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

I monociti sono componenti integranti del sistema immunitario innato umano che si basano sul metabolismo glicolitico quando attivati. Descriviamo un protocollo di citometria a flusso per misurare l'espressione del trasportatore del glucosio e l'assorbimento del glucosio da parte di monociti totali e sottopopolazioni di monociti nel sangue intero fresco.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

I monociti sono cellule immunitarie innate che possono essere attivati ​​da agenti patogeni e l'infiammazione associata con alcune malattie infiammatorie croniche. L'attivazione dei monociti induce funzioni effettrici e uno spostamento concomitante da ossidativo al metabolismo glicolitico che è accompagnato da un aumento dell'espressione trasportatore del glucosio. Questo aumento del metabolismo glicolitico si osserva anche per l'immunità qualificato di monociti, una forma di memoria immunologica innata. Anche se sono stati descritti in vitro protocolli in esame espressione trasportatore di glucosio e l'assorbimento di glucosio da parte dei monociti, nessuno è stato esaminato dal flusso multiparametrica citometria nel sangue intero. Descriviamo un multi-parametrica protocollo citometria di flusso per la misurazione della fluorescenza analogico glucosio 2-NBDG assorbimento nel sangue intero dal totale monociti e classico (CD14 ++ CD16 -), intermedio (CD14 ++ CD16 +) e non classica ( CD14 + CD16 ++) monocitisottopopolazioni. Questo metodo può essere utilizzato per esaminare l'espressione trasportatore di glucosio e l'assorbimento di glucosio per un totale di monociti e sottopopolazioni monociti durante l'omeostasi e la malattia infiammatoria, e può essere facilmente modificato per esaminare l'assorbimento del glucosio per altri leucociti e sottopopolazioni di leucociti all'interno del sangue.

Introduzione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

I monociti sono una componente importante del sistema immunitario innato umano, che stanno rapidamente mobilitato per siti di infezione e infiammazione 1. L'attivazione dei monociti è fondamentale per limitare i danni acuti da patogeni ed è anche fondamentale per la patogenesi di diverse malattie croniche, tra cui l'aterosclerosi 2, il cancro 3, e l'HIV 4,5.

Il metabolismo di riposo e monociti attivati ​​differisce notevolmente, con monociti riposo che utilizzano il metabolismo ossidativo e monociti attivati ​​utilizzando il metabolismo glicolitico (vale a dire, la fermentazione del glucosio in lattato) 6. L'attivazione dei monociti induce l'espressione di trasportatori del glucosio che permette di aumentare l'assorbimento del glucosio per il metabolismo glicolitico 7. Monociti trasportatore di glucosio 1 (Glut1) è un tale trasportatore upregulated durante l'attivazione e la sua espressione è dimostrato di portare alla produzione di citochine pro-infiammatorie in vItro e nel tessuto adiposo dei topi obesi 8. L'infezione di una linea cellulare monocitica da sarcoma di Kaposi associato herpesvirus porta ad upregulation cellulare di Glut1 9, e abbiamo recentemente dimostrato che durante l'infezione cronica da HIV una maggiore percentuale di monociti GLUT1 esprimenti sono presenti durante antiretrovirale un'infezione non trattata e terapia di combinazione trattati 10. Presi insieme, questi studi dimostrano che l'assorbimento di glucosio e il metabolismo glicolitico da monociti sono aspetti importanti di molte malattie infiammatorie. Così, un metodo semplice per misurare l'espressione Glut1 monociti e l'assorbimento del glucosio durante l'omeostasi e la malattia infiammatoria è probabile che sia di utilità per una vasta gamma di ricercatori.

Monociti umani sono eterogenei, essendo composto da tre sottoinsiemi distinti che possono essere esaminati da espressione differenziale di marcatori di superficie delle cellule CD14 e CD16 11,12. monociti classici esprimono un elevato livello di CD14, ma non esprimono CD16 (CD14 ++ CD16 -), monociti intermedie esprimono un elevato livello di CD14 e un livello intermedio di CD16 (CD14 ++ CD16 +), e non classica monociti esprimono un basso livello di CD14 e un alto livello di CD16 (CD14 + CD16 ++). I monociti che esprimono CD16 sono chiamati CD16 + monociti, che rispetto al CD16 - monociti hanno alta espressione di citochine infiammatorie e la capacità di più efficace antigeni presenti 13,14. Circa il 10% dei monociti esprimono CD16 durante l'omeostasi con percentuali più elevate osservate durante l'infiammazione 15. Sottopopolazioni monociti sono associati a determinate patologie e potrebbero essere utili marcatori biologici della malattia e della progressione della malattia 16.

Il nostro obiettivo era quello di individuare un metodo in grado di misurare l'espressione del trasportatore del glucosio e l'assorbimento di glucosio da monociti umani e sottopopolazioni monociti in condizioni come vicino a PHYcondizioni siological possibili. Studi precedenti misurati espressione del trasportatore del glucosio e dei monociti assorbimento del glucosio 17,18, anche se questi metodi esaminati monociti isolati che possono aver alterato l'espressione della proteina rispetto alle condizioni fisiologiche di 19, e nessun precedente studio ha esaminato sottopopolazioni monociti umani. Utilizzando flusso multiparametrica citometria, si descrive un metodo per esaminare l'espressione trasportatore di glucosio e l'assorbimento del glucosio analogico fluorescente 2-NBDG dal totale monociti e sottopopolazioni monociti (sulla base di CD14 e CD16 espressione) all'interno di sangue intero non manipolata.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOTA: HIV-infetti e soggetti non infetti da HIV sono stati reclutati da l'Unità Malattie Infettive presso l'Alfred Hospital di Melbourne, VIC, Australia, e dalla comunità locale, rispettivamente. Il consenso informato è stato ottenuto da tutti i partecipanti, e la ricerca è stato approvato dal Comitato Etico della ricerca e Alfred Hospital.

1. Glut1 rilevamento cellulari di superficie sui monociti e dei monociti sottopopolazioni

  1. Raccogliere il sangue in citrato tubi anticoagulanti ACD-B e iniziare gli esperimenti in una cappa di sicurezza biologica entro 1 ora di raccolta.
  2. Aggiungere 100 ml di sangue per tubi in polipropilene. Aggiungere 2 ml di 1x Soluzione di Lisi (vedi Materiali tabella) per i tubi, mentre sul ghiaccio, pipettaggio delicatamente per miscelare. Incubare per 15 minuti in ghiaccio. Centrifugare a 220 xg per 5 min.
  3. Decantare e lavare due volte aggiungendo circa 2-4 ml di soluzione di lavaggio (0,5% BSA in PBS 1x) e centrifugazione a 220 xg per 5 min.
  4. Utilizzare un tubotte rimuovere accuratamente la maggior quantità di soluzione di lavaggio possibile. Porre le provette su ghiaccio e risospendere in 100 ml di soluzione di lavaggio.
  5. Per identificare specifiche sottopopolazioni di monociti colorare le cellule con il seguente volume di anticorpi per 100 microlitri sospensione cellulare previste al punto 1.4: 5 ml anti-CD3-PE, 5 ml di anti-CD14-APC, 5 ml di anti-CD16-PECy7, 5 ml Glut1 -FITC o IgG2b-FITC (provetta di controllo isotipo).
  6. Mettere in ghiaccio per 30 minuti al buio. Lavare 2 volte con soluzione di lavaggio. Fissare con 200-300 ml di 0,5% di formaldeide made in 1x PBS.
  7. Analizzare su un citofluorimetro in grado di rilevare 4 colori entro 24 ore all'interno del seguente eccitazione ed emissione di lunghezza d'onda: FITC (488, 530), PE (488, 575), PECy7 (488, 780), APC (633, 660) 10.

2. Il glucosio assorbimento da parte dei monociti

  1. Pipettare 90 ml di sangue raccolto nella fase 1.1 in tubi di polipropilene. Aggiungere 10 ml di una soluzione di lavoro 14.60 mM 2-NBDG a90 ml di sangue (1,46 mM concentrazione finale) e flick delicatamente per miscelare. E 'fondamentale per limitare a 2 NBDG esposizione alla luce coprendo i tubi con un foglio di alluminio.
  2. Incubare a 37 ° C al buio per 15-30 min e poi subito disporli sul ghiaccio. Aggiungere 4 ml di 1x FACS soluzione lisante ai tubi mentre sul ghiaccio. Centrifugare a 220 xga 4 ° C per 5 min.
  3. Risciacquare una volta con l'aggiunta di 4 ml di soluzione di lavaggio (0,5% BSA in PBS 1x). Centrifugare a 220 xga 4 ° C per 5 min. Decantare e posto sul ghiaccio.
  4. cellule macchia con anticorpi: 5 ml anti-CD3-PE, 5 ml di anti-CD14-APC e 5 ml di anti-CD16-PECy7. Mescolare e mettere in ghiaccio per 30 minuti al buio.
    NOTA: Durante questo periodo di assicurarsi che il citofluorimetro è pronto per l'analisi immediata. Acquisire cellule all'interno del seguente eccitazione ed emissione di lunghezza d'onda: 2-NBDG (488, 530), PE (488, 575), PECy7 (488, 780), APC (633, 660).
  5. Aggiungere 4 ml di tampone di ghiaccio lavaggio a freddo (0,5% BSA in PBS 1x) ai tubi.Lavare una volta per centrifugazione a 220 xg a 4 ° C per 5 min. Decantare e aggiungere 200-300 ml di ghiaccio vecchio PBS e tenere in ghiaccio al buio (coperto con un foglio di alluminio). Analizzare su un citofluorimetro entro 10 minuti con eccitazione e regolazione lunghezza d'onda di emissione come al punto 2.4.

3. Acquisizione dati e analisi

NOTA: La conoscenza della citometria a flusso e l'analisi dei dati è assunto.

  1. Utilizzando un citofluorimetro capace di analisi almeno a 4 colori, impostare la compensazione utilizzando campioni non colorati e colorate singolarmente.
    NOTA: colorazione singola con un CD4 coniugati con fluoresceina e CD14 può essere utilizzato per Glut1 e compensazione 2-NBDG.
  2. Impostare ed etichettare le finestre appropriate prima di acquisire campioni. Disegnare un cancello intorno alla popolazione dei monociti, e di acquisire 100.000 a 300.000 eventi per campione a tasso medio. 50.000 eventi per campione di compensazione è sufficiente.
    NOTA: La compensazione può essere effettuata prima di assaggiareacquisizione o in singolo software di analisi delle cellule, seguendo le procedure standard.
  3. Esporta e salvare i dati in un luogo appropriato. Aprire il software di analisi singola cella come FlowJo o altri software di analisi (Supplemental Figura 1) ed i campioni di trascinamento, come specificato (Figura supplementare 2).
  4. Fare doppio clic su file (Supplemental Figura 3) aprire. Disegnare un cerchio di monociti basati su avanti e le proprietà laterali scatter come mostrato nella Figura 1A e supplementare Figura 4 porta. Fare doppio clic la popolazione dei monociti. Osservare e disegnare una casella attorno al CD3 - popolazione (Supplemental Figura 4).
  5. Fare doppio clic sul CD3 - popolazione. Per osservare le sottopopolazioni monociti selezionare CD14-APC sulla 'x' asse, e CD16-PECy7 sul 'asse y'-, e l'etichetta di conseguenza (Supplemental Figura 5).
  6. Dove non ci sono distintepopolazioni positive e negative, misurano l'espressione di Glut1 o 2 NBDG assorbimento nelle specifiche sottopopolazioni monociti. Determinare le intensità di fluorescenza media (MFI) di Glut1 e 2-NBDG sottraendo isotipo e no 2-NBDG sfondo (Supplemento Figura 6).
  7. Se esistono popolazioni definite, utilizzare il IgG2b-FITC per impostare il cancello, e determinare percentuale di cellule positive (figura 3).
    NOTA: Utilizzare questa procedura per analizzare i totali CD14 + monociti. Dal 2-NBDG assorbimento è di solito caratterizzato da uno spostamento della fluorescenza intensità dei dati è meglio rappresentata da IFM e istogrammi.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Compensazione deve essere eseguita per singoli fluorocromi per prevenire la fluorescenza spillover. I monociti vengono prima arricchite da gating sulla base in avanti e scatter laterale. Le trame presentate sono rappresentanti di almeno sei esperimenti indipendenti condotti su sangue intero da sei o più partecipanti, come riportato in precedenza 10 Figura 1a mostra il gating iniziale di monociti di dispersione delle cellule e l'esclusione delle cellule T d...

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Il protocollo descritto qui DETTAGLI un metodo semplice per esaminare l'espressione trasportatore di glucosio e fluorescenti glucosio assorbimento analogico da monociti e monociti sottopopolazioni di sangue intero. Valutando 2-NBDG assorbimento nel sangue intero, questa tecnica consente di condizioni simili a quelle in vivo. Un precedente studio ha esaminato 6-NBDG assorbimento nei monociti separati dal sangue intero dalla densità centrifugazione 17. Tuttavia, questo studio non ha esaminato sotto...

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questa ricerca è stata finanziata dal Centro australiano per l'HIV e l'epatite Virologia Ricerca (ACH 2) e una borsa di studio di sviluppo 2010 (CNIHR) presso l'Università di Washington Center for AIDS Research (CFAR), un programma finanziato NIH con il numero premio AI027757 che è supportato dalla seguente NIH Istituti e Centri (NIAID, NCI, NIMH, NIDA, NICHD, NHLBI, NIA). CSP è un destinatario del 2 concessione CNIHR e ACH. SMC è destinatario di un Salute e Medical Research Council Nazionale di Australia (NHMRC) Principal Research Fellowship. Gli autori ringraziano il contributo a questo lavoro del Vittoriano programma di infrastrutture di supporto operativo ricevuto dall'Istituto Burnet. Riconosciamo l'assistenza di Geza Paukovic ed Eva Orlowski-Oliver dal Fondo Amrep Citometria a flusso di base per citometria a flusso formazione e consulenza tecnica. Ringraziamo Angus Morgan per gli allenamenti e l'organizzazione del video riprese dei media. La nostra gratitudineJesse Masson e Jehad Abdulaziz K. Alzahrani per l'assistenza di laboratorio durante le riprese video. Ringraziamo gli sforzi del dottor David Simar presso la Scuola di Scienze Mediche, UNSW, l'Australia che ha offerto consulenza critica metodologica. CSP ringrazia www.nice-consultants.com per consultazioni grafiche.

CONTRIBUTO AUTORI:

CSP ha concepito il progetto, ideato e condotto esperimenti, analizzato e interpretato i dati, e scrisse il manoscritto. JJA interpretato i dati e ha scritto il manoscritto. TRB ha scritto il manoscritto. JMM ha interpretato i dati, ci ha dato consigli intellettuali critici e recensione del manoscritto. SMC ha interpretato i dati, ci ha dato consigli intellettuali critici e recensione del manoscritto.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
VACUETT Provetta 9 ml Provette anticoagulanti ACD-BGreiner Bio-One GmbH455094
Provette sterili in polipropilene da 5 mlBD Biosciences352063
Albumina da siero bovino (BSA)Sigma-AldrichA7906
Soluzione di formaldeide al 16%Microscopia elettronica Scienza15710
BD Soluzione di lisi FACS (10x)BD Biosciences349202Diluire la soluzione di lisi BD FACS 1/10 con acqua deionizzata per la concentrazione di lavoro (conservare per un massimo di 1 settimana a 4 gradi; C)
anti-CD3-PEBD Biosciences555340
anti CD14-APCBD Biosciences555399
anti-CD16-PECy7BD Biosciences557744
anti-Glut1-FITCR & D SistemiFAB1418F
IgG2b-FITCR & D SystemsIC0041F
2-NBDGLife technologiesN13195Sospendere 5 mg di 2-NBDG in 1 ml di acqua deionizzata per ottenere una soluzione madre da 14,60 mM (conservare per un massimo di 6 mesi a 4 ° C). Per ottenere la concentrazione di lavoro di 2-NBDG, diluire il brodo 1/100 con 1x DPBS. Coprire con un foglio di alluminio. (conservare per un massimo di 1 settimana a 4 ° C)
Dulbecco' s Soluzione salina tamponata con fosfato (1x)Life technologies14190-144Per preparare la soluzione di lavaggio, aggiungere 0,5 g di BSA per 100 ml di DPBS (conservare per un massimo di 2 settimane a 4 gradi; C)

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Shi, C., Pamer, E. G. Monocyte recruitment during infection and inflammation. Nat Rev Immunol. 11, 762-774 (2011).
  2. Woollard, K. J., Geissmann, F. Monocytes in atherosclerosis: subsets and functions. Nat Rev Cardiol. 7, 77-86 (2010).
  3. Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. Monocytes and macrophages in cancer: development and functions. Cancer Microenviron. 6, 179-191 (2013).
  4. Anzinger, J. J., Butterfield, T. R., Angelovich, T. A., Crowe, S. M., Palmer, C. S. Monocytes as regulators of inflammation and HIV-related comorbidities during cART. J Immunol Res. 2014, 569819(2014).
  5. Palmer, C., Cherry, C. L., Sada-Ovalle, I. Glucose Metabolism in T Cells and Monocytes: New Perspectives in HIV Pathogenesis. EBioMedicine. , (2016).
  6. Cheng, S. C., et al. mTOR- and HIF-1alpha-mediated aerobic glycolysis as metabolic basis for trained immunity. Science. 345, 1250684(2014).
  7. Maratou, E., et al. Glucose transporter expression on the plasma membrane of resting and activated white blood cells. Eur J Clin Invest. 37, 282-290 (2007).
  8. Freemerman, A. J., et al. Metabolic reprogramming of macrophages: glucose transporter 1 (GLUT1)-mediated glucose metabolism drives a proinflammatory phenotype. J Biol Chem. 289, 7884-7896 (2014).
  9. Gonnella, R., et al. Kaposi sarcoma associated herpesvirus (KSHV) induces AKT hyperphosphorylation, bortezomib-resistance and GLUT-1 plasma membrane exposure in THP-1 monocytic cell line. J Exp Clin Cancer Res. 32, 79(2013).
  10. Palmer, C. S., et al. Glucose transporter 1-expressing proinflammatory monocytes are elevated in combination antiretroviral therapy-treated and untreated HIV+ subjects. J Immunol. 193, 5595-5603 (2014).
  11. Wong, K. L., et al. Gene expression profiling reveals the defining features of the classical, intermediate, and nonclassical human monocyte subsets. Blood. 118, e16-e31 (2011).
  12. Ziegler-Heitbrock, L., et al. Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood. Blood. 116, e74-e80 (2010).
  13. Belge, K. U., et al. The proinflammatory CD14+CD16+DR++ monocytes are a major source of TNF. J Immunol. 168, 3536-3542 (2002).
  14. Frankenberger, M., Sternsdorf, T., Pechumer, H., Pforte, A., Ziegler-Heitbrock, H. W. Differential cytokine expression in human blood monocyte subpopulations: a polymerase chain reaction analysis. Blood. 87, 373-377 (1996).
  15. Ziegler-Heitbrock, L. The CD14+ CD16+ blood monocytes: their role in infection and inflammation. J Leukoc Biol. 81, 584-592 (2007).
  16. Ziegler-Heitbrock, L. Macrophages: Biology and Role in the Pathology of Diseases. , Springer. 3-36 (2014).
  17. Dimitriadis, G., et al. Evaluation of glucose transport and its regulation by insulin in human monocytes using flow cytometry. Cytometry A. 64, 27-33 (2005).
  18. Fu, Y., Maianu, L., Melbert, B. R., Garvey, W. T. Facilitative glucose transporter gene expression in human lymphocytes, monocytes, and macrophages: a role for GLUT isoforms 1, 3, and 5 in the immune response and foam cell formation. Blood Cells Mol Dis. 32, 182-190 (2004).
  19. Stibenz, D., Buhrer, C. Down-regulation of L-selectin surface expression by various leukocyte isolation procedures. Scand J Immunol. 39, 59-63 (1994).
  20. Ahmed, N., Kansara, M., Berridge, M. V. Acute regulation of glucose transport in a monocyte-macrophage cell line: Glut-3 affinity for glucose is enhanced during the respiratory burst. Biochem J. 327 (Pt 2), 369-375 (1997).
  21. Cutfield, W. S., Luk, W., Skinner, S. J., Robinson, E. M. Impaired insulin-mediated glucose uptake in monocytes of short children with intrauterine growth retardation). Pediatr Diabetes. 1, 186-192 (2000).
  22. Yoshioka, K., et al. A novel fluorescent derivative of glucose applicable to the assessment of glucose uptake activity of Escherichia coli. Biochim Biophys Acta. 1289, 5-9 (1996).
  23. Speizer, L., Haugland, R., Kutchai, H. Asymmetric transport of a fluorescent glucose analogue by human erythrocytes. Biochim Biophys Acta. 815, 75-84 (1985).
  24. Palmer, C. S., et al. Increased glucose metabolic activity is associated with CD4+ T-cell activation and depletion during chronic HIV infection. AIDS. 28, 297-309 (2014).
  25. Palmer, C. S., Ostrowski, M., Balderson, B., Christian, N., Crowe, S. M. Glucose metabolism regulates T cell activation, differentiation, and functions. Frontiers in immunology. 6, (2015).
  26. Palmer, C. S., et al. Regulators of glucose metabolism in CD4 and CD8 T cells. International reviews of immunology. , 1-12 (2015).
  27. Palmer, C. S., Crowe, S. M. How does monocyte metabolism impact inflammation and aging during chronic HIV infection? AIDS research and human retroviruses. 30, 335-336 (2014).
  28. McFadden, K., et al. Metabolic stress is a barrier to Epstein-Barr virus-mediated B-cell immortalization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, E782-E790 (2016).
  29. Gamelli, R. L., Liu, H., He, L. K., Hofmann, C. A. Augmentations of glucose uptake and glucose transporter-1 in macrophages following thermal injury and sepsis in mice. Journal of leukocyte biology. 59, 639-647 (1996).
  30. Yin, Y., et al. Glucose Oxidation Is Critical for CD4+ T Cell Activation in a Mouse Model of Systemic Lupus Erythematosus. Journal of immunology. , 80-90 (2016).
  31. Yang, Z., Matteson, E. L., Goronzy, J. J., Weyand, C. M. T-cell metabolism in autoimmune disease. Arthritis research & therapy. 17, 29(2015).
  32. Yin, Y., et al. Normalization of CD4+ T cell metabolism reverses lupus. Science translational medicine. 7, 274ra218(2015).
  33. Barbera Betancourt, A., et al. Inhibition of Phosphoinositide 3-Kinase p110delta Does Not Affect T Cell Driven Development of Type 1 Diabetes Despite Significant Effects on Cytokine Production. PloS one. 11, e0146516(2016).
  34. Barron, C. C., Bilan, P. J., Tsakiridis, T., Tsiani, E. Facilitative glucose transporters: Implications for cancer detection, prognosis and treatment. Metabolism: clinical and experimental. 65, 124-139 (2016).
  35. Hegedus, A., Kavanagh Williamson, M., Huthoff, H. HIV-1 pathogenicity and virion production are dependent on the metabolic phenotype of activated CD4+ T cells. Retrovirology. 11, 98(2014).
  36. Taylor, H. E., et al. Phospholipase D1 Couples CD4+ T Cell Activation to c-Myc-Dependent Deoxyribonucleotide Pool Expansion and HIV-1 Replication. PLoS Pathog. 11, e1004864(2015).
  37. Loisel-Meyer, S., et al. Glut1-mediated glucose transport regulates HIV infection. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 2549-2554 (2012).
  38. Palmer, C. S., et al. Emerging Role and Characterization of Immunometabolism: Relevance to HIV Pathogenesis, Serious Non-AIDS Events, and a Cure. J Immunol. 196 (11), 4437-4444 (2016).

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Richiedi il permesso di riutilizzare il testo o le figure di questo articolo JoVE

Richiedi permesso

Tag

Citometria a flussocaptazione di 2 NBDGgating CD14 CD16immunometabolismo dell HIVanalogo del glucosio fluorescentemetabolismo delle cellule immunitarie

Articoli correlati