Qui viene presentata una procedura per impiantare cellule tumorali pancreatiche che esprimono proteine fluorescenti verdi (PANC-1 GFP) ortotopicamente nel pancreas di topi Balb-c Ola Hsd-Fox1nu per valutare la progressione del tumore e le metastasi.
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Articolo metodologico
Fluorescente ortotopico modello murino di cancro al pancreas
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il tumore al pancreas rimane uno dei tumori per i quali la sopravvivenza non è migliorata notevolmente negli ultimi decenni. Solo il 7% dei pazienti diagnosticati sopravviverà più di cinque anni. Al fine di comprendere e imitare il microambiente dei tumori pancreatici, abbiamo utilizzato un modello murino ortotopico di cancro al pancreas che permette l'imaging non invasivo di progressione del tumore in tempo reale. Le cellule tumorali pancreatiche che esprimono la proteina fluorescente verde (PANC-1 GFP) sono state sospese in matrice di membrana basale, ad alta concentrazione, (ad esempio, Matrigel HC) con mezzi privi di siero e poi iniettate nella coda del pancreas attraverso laparotomia. La sospensione cellulare nella matrice alta concentrazione membrana basale diventa una sostanza gelatinosa, una volta raggiunta la temperatura ambiente; Pertanto, si gelifica quando entra in contatto con il pancreas, creando un'occlusione sito di iniezione e da evitare fuoriuscite cellule. la crescita del tumore e metastasi ad altri organi sono monitorati in tempo realeanimali utilizzando la fluorescenza. È fondamentale utilizzare i filtri appropriati per l'eccitazione e l'emissione di GFP. La procedura per l'impianto ortotopico sono descritti in questo articolo per cui i ricercatori possono facilmente replicare la procedura in topi nudi. Le fasi principali di questo protocollo sono preparazione della sospensione cellulare, impianto chirurgico, e tutto il corpo fluorescente imaging in vivo. Questo modello ortotopico è stato progettato per valutare l'efficacia di nuove terapie per i tumori primari e metastatici.
Introduzione
Il tumore al pancreas viene diagnosticato con maggior frequenza rispetto ad altri tipi di cancro ed è la 4 ° causa principale di decessi correlati al cancro negli Stati Uniti. Dal momento della diagnosi, oltre il 90% dei pazienti muoiono entro cinque anni 1,2. Attualmente, la rimozione del tumore chirurgica è l'unica cura per il cancro al pancreas, ma meno del 20% dei pazienti hanno diritto a sottoporsi ad intervento chirurgico soprattutto perché al momento della diagnosi della malattia è in fase avanzata e ha metastatizzato 3,4. La mancanza di sintomi specifici rende cancro al pancreas una malattia silenziosa; alcuni dei sintomi ....
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Protocollo
Il protocollo descritto di seguito viene eseguito sotto la guida e l'approvazione del Comitato di cura e l'uso di animali di Western University. Tutti gli esperimenti sono eseguiti in conformità con tutte le linee guida, dei regolamenti e agenzie di regolamentazione.
Cultura 1. cellulare
- Preparazione del terreno completo
- Utilizzando una cappa di sicurezza biologica Classe II, preparare terreno completo aggiungendo asetticamente siero fetale bovino (FBS) e la penicillina streptomicina (P / S) ad una bottiglia da 500 ml di terreno RPMI. Mescolare delicatamente agitando. La concentrazione finale d....
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Risultati
Il metodo descrive un impianto ortotopico chirurgica delle cellule tumorali pancreatiche umane fluorescenti, concentrandosi sulla preparazione della sospensione cellulare iniettabile, anestesia adeguata per roditori, la consegna di sospensione cellulare tramite laparotomia, e l'uso di fluorescenza in vivo piccola dell'imaging animali. Il rilevamento di un segnale verde di fluorescenza (segnale GFP) tra due e tre settimane dopo l'impianto, fornisce ai ricercatori un s.......
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Discussione
Descriviamo un modello murino ortotopico di cancro pancreatico che esprime GFP, consentendo così il monitoraggio non invasivo della crescita tumorale mediante intero corpo imaging fluorescente vivo (Figura 1). Questa tecnica permette di monitorare lo sviluppo del tumore in tempo reale (figura 3); può essere uno strumento importante per i ricercatori di studiare l'efficacia terapeutica dei nuovi farmaci contro il cancro al pancreas. Un altro aspetto importante di qu.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo la Western University of Health Sciences per la sovvenzione intramurale.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| RPMI media 1640 | Caisson Labs | RPL03-500ML | |
| Siero fetale bovino | Gibco | 10437-077 | |
| Penicillina Streptomicina | Thermo Ficher Sci | 15140-122 | |
| Matrigel HC membrana basale, alta concentrazione | Corning | 354248 | |
| SutureVet PGA 6-0 PGA | Henry Schein | 39010 | |
| Alcare o Foamed Antiseptic Handrub | Steris | 639680 | |
| DPBS (soluzione salina tamponata con fosfato di Dubelcco) | Siringa Thermo Ficher Sci | 21300025 | |
| TB 27 G 1/2 | Becton Dickinson | 305620 | |
| Isoflurano | Blutler Schein | 50562 | |
| Ketoprofene | Fort Dodge Forbici chirurgiche per la salute | ||
| , maionese dritta da 5,5" | Henry Schein | 22-1600 | |
| PANC-1 Linea cellulare GFP | antitumorale, Inc | ||
| : iBox Scientia | UVP, LLC. Upland, CA. | Small Animal Imaging System per osservare il tumore fluorescente in animali vivi |
Riferimenti
- Siegel, R. Pancreatic Cancer Stats: American Cancer Society: Cancer Facts & Figures. , Available from: http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf (2014).
- Smyth, E., Cunningham, D. Harrison's Principles of Internal Medicine. Kasper, D., et al. , 19th edn, McGraw-Hill Education. (2015).
- Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Ki....
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Ristampe e permessi
