Descriviamo qui un protocollo riproducibile per isolare la cerchia dei topi di Willis.
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Articolo metodologico
Protocollo per isolare il circolo di Willis mouse
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il circolo cerebrale arteriosa (Circulus arterioso cerebrale) o un cerchio di Willis (COW) è una anastomosi circolatorio che circonda il chiasma ottico e l'ipotalamo che fornisce sangue al cervello e le strutture circostanti. E 'stato coinvolto in diverse malattie cerebrovascolari, tra cui angiopathy cerebrale amiloide (CAA) vasculopatie -associated, aterosclerosi intracranica e aneurismi intracranici. Gli studi dei meccanismi molecolari alla base di queste malattie per l'identificazione di nuovi bersagli farmacologici per la loro prevenzione richiedono modelli animali. Alcuni di questi modelli possono essere transgenico, mentre altri coinvolgeranno isolamento del cerebro-vascolare, compreso il metodo CoW.The qui descritto è adatto per l'isolamento mucca in qualsiasi lignaggio del mouse e ha un notevole potenziale per lo screening (espressione dei geni, produzione di proteine, modifiche delle proteine post-traduzionali, analisi secretoma, ecc) studi sui grandi vasi del cerebro del mousevascolarizzazione. Può essere utilizzato anche per studi ex vivo, adattando il sistema bagno per organi sviluppato per arterie del mouse olfattivi isolati.
Introduzione
Il circolo cerebrale arteriosa (Circulus arterioso cerebrale), noto anche come il circolo di Willis (vacca), ciclo di Willisor Willis poligono) è stato descritto da Thomas Willis nel 1664. Si tratta di una anastomosi circolatorio situata intorno al chiasma ottico e l'ipotalamo che possono essere considerato come un mozzo centrale fornitura di sangue al cervello e strutture circostanti. Il sangue entra in questa struttura tramite carotide interna e arterie vertebrali e scorre fuori dal cerchio tramite mezzo interni e arterie cerebrali posteriori. Ognuna di queste arterie è a sinistra ea destra rami su entrambi i lati del cerchio. La basilare, posta comunicare, e c....
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Protocollo
Tutte le procedure sono state eseguite in conformità con le normative della Comunità Europea per la cura e l'uso di animali da laboratorio, con l'approvazione del comitato etico locale per la sperimentazione animale (Ile de France-Paris-Comitato, Autorizzazione 4270).
1. Anestesia
- Infondere una dose letale di pentobarbital (fino a 1 mg / 10 g di peso corporeo) (ago calibro 27 e la siringa da 1 ml) per via intraperitoneale in topi adulti prima dell'intervento chirurgico.
2. Vessel Perfusione
NOTA: Non vi è alcuna necessità di applicare veterinario pomata p....
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Risultati
Il mouse PBS-perfuso viene ucciso e la mucca è isolato come descritto nella sezione 3.2 del protocollo. Quando la dissezione viene eseguita correttamente, il vaccino deve uscire in un unico pezzo e dovrebbe essere leggermente trasparente per l'assenza di sangue residuo nel sistema vascolare.
Figura 2: La mucca mouse dopo .......
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Discussione
Descriviamo qui un protocollo riproducibile per l'isolamento del circolo di Willis. I disturbi cerebrovascolari più comuni che coinvolgono la mucca sono vasculopatie CAA-associata, aterosclerosi intracranica e aneurisma intracranico, i quali incidono le pareti dei vasi arteriosi. I fattori di rischio sono ben noti, ma la patogenesi molecolare di questi disturbi cerebrali rimane poco compresa e marcatori biologici specifici per predire il loro verificarsi sono carenti. Vi è un notevole interesse per i metodi per isol.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da Parigi VI University e una borsa di Pierre Fabre innovazione.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s Soluzione salina tamponata con fosfato | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Pinze | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Forbici a iride fine temprate | Forbici Fine Science Tools | 14090-11 | |
| - Dritte / Affilate / Affilate 16,5 cm | Strumenti per le scienze | 14002-16 | |
| Dumont #7b Pincipe | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Microscopio zoom stereoscopico | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Superficie 60mm Piatto di coltura | Corning | #3295 | |
| Pompa peristaltica - MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
Riferimenti
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B.
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Ristampe e permessi
