Il gusto è un importante processo sensoriale che facilita l'attrazione verso sostanze benefiche e l'evitamento di sostanze tossiche. Questo protocollo descrive un semplice saggio di ingestione per determinare la preferenza gustativa della Drosophila per un dato composto chimico.
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Articolo metodologico
Gusto Preferenza Assay per adulti
In questo articolo
Sommario
Abstract
La percezione olfattiva e gustativa dell'ambiente è vitale per la sopravvivenza degli animali. L'applicazione più ovvia di questi chemiosensi è quella di essere in grado di distinguere le buone fonti di cibo dalle fonti di cibo potenzialmente pericolose. La gustazione richiede il contatto fisico con un composto chimico che è in grado di segnalare attraverso i recettori del gusto che sono espressi sulla superficie dei neuroni. Negli insetti, questi neuroni gustativi possono essere localizzati in tutto il corpo dell'animale, consentendo al gusto di svolgere un ruolo importante in molti comportamenti diversi. Gli insetti in genere preferiscono composti contenenti zuccheri, mentre vengono evitati i composti considerati dal sapore amaro. Data l'importanza biologica di base del gusto, c'è un intenso interesse per la comprensione dei meccanismi molecolari alla base di questa modalità sensoriale. Descriviamo un saggio del gusto di Drosophila adulta che riflette la preferenza degli animali per un dato composto tattico. Questo test può essere applicato ad animali di qualsiasi background genetico per esaminare la preferenza gustativa per un composto solubile desiderato.
Introduzione
Gli animali usano chemosensation distinguere condizioni vantaggiose a parte condizioni svantaggiose. Questa percezione può essere fondamentale per cose come determinare la migliore fonte di cibo, evitando sostanze tossiche o determinare il miglior partner di accoppiamento 1. Chemosensation è spesso diviso in due componenti sensoriali: olfatto e sensi gustative. Una principale caratteristica distintiva di questi sensi è che l'olfatto (odore) è usato per campionare l'ambiente chimico gassoso circostante mentre gustation (gusto) richiede il contatto fisico con un substrato non volatile. Entrambe le modalità sensoriali stimolano risposte neurologiche c....
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Protocollo
1. fame
- Preparare volare fiale fame saturando un batuffolo di cotone con 18,2 MW acqua sul fondo di una fiala mosca standard. In alternativa, allo stesso modo di saturare una piccola striscia di carta da filtro con 18,2 MW acqua e posto in un angolo all'interno della fiala.
- Raccogliere vola in gruppi di circa 100 animali su un rilievo di CO 2 e quindi aggiungere le mosche per una fiala preparato.
Nota: i migliori risultati si ottengono con animali che sono meno di 5 giorni. Tuttavia, l'esatta età degli animali può essere controllata come variabile sperimentale per determinare le variazioni di preferenza di gusto nel temp....
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Risultati
Alcuni risultati tipici da saggi di preferenza di gusto sono riportati di seguito. Nella maggior parte degli esperimenti qualche variazione di intensità di colorazione addominale sarà visto (Figura 1). Qualsiasi colorazione nell'addome se intensa o debole è considerato un ingestione positivo. E 'quindi consigliabile per i ricercatori a segnare animali, mentre ciechi alla condizione sperimentale in modo da limitare i potenziali errori.
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Discussione
Abbiamo descritto un protocollo semplice ma efficace per determinare preferenza di gusto in Drosophila. Le versioni di questo test sono abitualmente utilizzati in esperimenti per determinare i contributi di recettori gustativi (GRS) a percepire le diverse qualità (amaro, dolce, acido, salato e umami) di composti di gusto. Il genoma di Drosophila contiene circa 60 geni che codificano 68 individuati recettori gustativi da splicing alternativo 8,9. Tuttavia, altre proteine come recettori del .......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare i membri del laboratorio Tessier per la lettura critica di questo manoscritto e per gli utili suggerimenti durante la preparazione di questo protocollo.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Colorante alimentare blu (acqua, glicole propilenico, FD& C Blu 1 e Rosso 40, Propilparabene) | McCormick | N/A | |
| Scatole crio/congelatrici senza divisori | Fisher | 03-395-455 | |
| Dumont #5 Pinze | Strumenti per la scienza fine | 11251-20 | |
| Acido acetico glaciale | Fisher | BP2401-500 | |
| Leica S6 E Stereozoom 0.63X-4.0X microscopio | W. Nuhsbaum, Inc. | ||
| Piastra di Petri (100 mm x 15 mm) | BD Falcon | 351029 | Riutilizzabile se accuratamente lavato e asciugato |
| Microprovette Quick-Snap | Alkali Scientific Inc. | C3017 | |
| Colorante alimentare rosso (acqua, glicole propilenico, FD& C Rossi 40 e 3, Propilparabene) | McCormick | N/A | |
| Saccarosio | IBI Scientific | IB37160 |
Riferimenti
- Herrero, P. Fruit fly behavior in response to chemosensory signals. Peptides. 38 (2), 228-237 (2012).
- Vosshall, L. B., Stocker, R. F. Molecular architecture of smell and taste in Drosophila. Annu Rev Neurosci. 30, 505-533 (2007).
- Harris, D. T., Kallman, B. R., Mullane....
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Ristampe e permessi
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