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Articolo metodologico

Murino tendine flessore Lesioni e Chirurgia riparazione

12.9K visualizzazioni

DOI:

10.3791/54433

19 settembre 2016

In questo articolo

Sommario

tendini flessori della mano sono comunemente feriti, portando a mano la funzione compromessa. Tuttavia, la risposta di guarigione tessuto cicatriziale non è ben caratterizzato. Un modello murino di tendine flessore guarigione è dimostrata qui. Questo modello può migliorare la comprensione globale del processo di guarigione e valutare approcci terapeutici per migliorare la guarigione.

Abstract

Tendine collega muscolo scheletrico e ossa, facilitando il movimento di quasi tutto il corpo. Nella mano, tendini flessori (FTS) consentono la flessione delle dita e funzione generale mano. Lesioni ai FTS sono comuni, e la guarigione soddisfacente è spesso compromessa a causa di tessuto cicatriziale in eccesso e aderenze tra il tendine e il tessuto circostante. Tuttavia, poco si sa circa le componenti molecolari e cellulari del FT riparazione. A tal fine, un modello murino di FT di riparazione che riassume molti aspetti della guarigione negli esseri umani, tra cui gamma ridotta di movimento e una diminuzione delle proprietà meccaniche, è stato sviluppato e descritto in precedenza. Qui è prevista una dimostrazione approfondita di questa procedura chirurgica, che coinvolge transezione e successiva riparazione del tendine flessore lungo delle dita (FDL) nella zampa posteriore murino. Questa tecnica può essere utilizzata per condurre analisi lineage di tipi cellulari, valutare gli effetti di aumento di gene o perdita di funzione, e per testare l'efficacia di interventi farmacologici nel processo di guarigione. Tuttavia, ci sono due limitazioni principali per questo modello: i) il tendine FDL nella porzione centrale della zampa posteriore murino, dove la transezione e riparazione verificano, non è circondato da una guaina sinoviale. Pertanto questo modello non tiene conto per il potenziale contributo della guaina al processo di formazione della cicatrice. ii) per proteggere l'integrità del sito di riparazione, il FT viene rilasciata a livello della giunzione miotendinea, diminuendo le forze meccaniche del tendine, probabilmente contribuire ad una maggiore formazione di cicatrici. Isolamento di cellule sufficiente dal tessuto di granulazione del FT durante il processo di guarigione per analisi citofluorimetrica ha dimostrato impegnativo; citologia centrifugazione concentrare queste cellule è un metodo usato in alternativa, e permette di generazione di preparazioni di cellule in cui può essere eseguita l'etichettatura immunofluorescenza. Con questo metodo, la quantificazione di cellule o proteine ​​di interesse durante FT guarigione diventa possibile.

Introduzione

tendini flessori del lavoro manuale di concerto con i muscoli flessori dell'avambraccio e guaine digitali per consentire la flessione delle cifre e afferrando funzione della mano. tendini flessori corrono lungo il lato palmare della mano; questa posizione relativamente superficiale si traduce spesso in lesioni ai tendini flessori durante un trauma alla mano. I tendini guarire attraverso una risposta tessuto cicatriziale piuttosto che rigenerazione dei tessuti normali tendine 1. Mentre questo tessuto cicatriziale fornisce continuità al tendine, funzione viene drasticamente diminuita rispetto al tendine sano. Compositi tessuto tendineo-cicatrice sono car....

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Protocollo

Il Comitato Università per la ricerca degli animali presso l'Università di Rochester ha approvato tutti gli esperimenti sugli animali. Dieci-12 settimane vecchio C57BL femmina / 6J sono stati utilizzati.

1. Preparazione degli animali per la chirurgia del tendine flessore (~ 15 min)

  1. strumenti chirurgici autoclave per sterilizzare, indossare guanti sterili in tutto, e mantenere un campo operatorio sterile.
  2. Anestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale (ip) con un volume di ketamina (80 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) corrispondenti al peso corporeo. Confermare la profondità della sedazione via dell'....

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Risultati

Il flessore lungo delle dita (FDL) del muscolo, che si trova al polpaccio, agisce a flettere le cifre della zampa del mouse posteriori tramite il tendine flessore (evidenziato in blu nella figura 1A, e mostrato istologicamente in figura 2A), che si estende prossimalmente dal miotendinea giunzione e termina in falangi distali. In questo modello di tendine flessore guarigione, il tendine FDL viene sezionato e riparato a metà piede, prossimale alla biforcaz.......

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Discussione

La procedura chirurgica per un modello murino di completo transection e riparazione del flessore lungo delle dita tendine è presentato in questo studio. Inoltre è dimostrato una nuova applicazione di concentrare piccole popolazioni cellulari con citologia centrifuga, per consentire analisi immunocitochimica quantitativa dell'ambiente cellulare durante tendine flessore guarigione. Questo modello di riparazione tendine flessore dimostra una risposta di guarigione riproducibile, che può essere usato per valutare i camb.......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato parzialmente sostenuto dalla Società Americana di Chirurgia della Mano Pilot Award e NIH / NIAMS 1K01AR068386-01 (a AEL) e NIAMS / NIH P30AR061307.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Preparazione chirurgica
C57BL/6J topi Jackson Laboratories000664
KetaminaHospiraNDC# 0409-2051-05
XylazineLloyd Inc.NDC# 61311-482-10
BuprenorfinaPar Pharmaceutical Inc.NDC# 42023-179-10
Irrigazione con cloruro di sodio allo 0,9%HospiraNDC# 0409-6138-03Per la preparazione di soluzioni di ketamina/xilazina e buprenorfina
Siringa da 1 mlBD309659
Ago da 30 GBD305106
Soluzione di iodio povidoneAplicare82-226
70% etanolo
Unguento oftalmico veterinario PuralubeDechra Veterinary ProductsNDC# 17033-211-38
NameCompanyNumero di catalogoComments
>Strumenti chirurgici
Bilancia portatile 200 gOhausSP202
Forbici a mollaFine Science Tools15124-12
Dumont #5 pinzeFine Science Tools11251-30
PortaaghiFine Science Tools91201-13
Micro forbici a mollaFine Science Tools15003-08
Micro portaaghiFine Science Tools12061-02
Suture in nylon 5-0Suture668G
8-0Ethicon2808G
Scaldavetrini per istologia Lab-LineBarnstead International26025
NomeAziendaNumero di catalogoComments
Metodo Cytospin
Collagenasi di tipo I, liofilizzatoLife Technologies 1700-017
Tecnologie di segnalazione cellularedell'albumina sierica bovina9998S
1x PBSThermo Fisher10010-023
Imbuti citologiciFisher HealthCare10-354
Vetrini per microscopio HistoBond+ VWR16005-110
Centrifuga Cytospin 2ShandonSH-CYTO2
NameAziendaNumero di catalogoComments
Immunocytochemistry
Vassoio per colorazione per vetrini con coperchio neroIHC WorldM920-2
Click-iT Plus EdU Imaging KitLife Technologies C10639include EdU e  Hoeschst 33342
Penna barriera idrofobica ImmedgeVector LaboratoriesH-4000
ProLong Diamond media di montaggioThermo FisherP36970
Vetrini coprioggetti 24 x 50 mm #1.5
Smalto
in nylon per microchirurgia Ethicon trasparente

Riferimenti

  1. Lin, T. Biomechanics of tendon inury and repair. J Biomech. 37, 865-877 (2004).
  2. Strickland, J. W. Development of flexor tendon surgery: twenty-five years of progress. J Hand Surg [Am]. 25, 214-235 (2000).
  3. Bunnell, S.

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Ristampe e permessi

Tag

Chirurgia di riparazione del tendinezampa posteriore di topoflessore lungo delle ditatransezione del tendineschema di sutura di Kesslerdigestione con collagenasianalisi citometrica a flussomarcatura immunofluorescentemicroscopia a fluorescenza