Valutazione della efficacia e la tossicità degli RNA targeting HIV-1 Produzione per l&#39;uso in gene terapia farmacologica

Robert J. Scarborough; Kelsey L. Adams; Olivier Del Corpo; Aïcha Daher; Anne Gatignol

doi:10.3791/54486

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Articolo metodologico

Valutazione della efficacia e la tossicità degli RNA targeting HIV-1 Produzione per l'uso in gene terapia farmacologica

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DOI:

10.3791/54486

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5 settembre 2016

Robert J. Scarborough¹^,² , Kelsey L. Adams¹^,² , Olivier Del Corpo¹^,² , Aïcha Daher¹ , Anne Gatignol¹^,²^,³

¹Virus-Cell Interactions Laboratory, Lady Davis Institute for Medical Research, ²Department of Microbiology & Immunology, McGill University, ³Department of Medicine, McGill University

In questo articolo

Sommario

Vengono descritti i metodi per valutare l'efficacia e la tossicità delle molecole di RNA che mirano alle fasi post-integrazione del ciclo di replicazione dell'HIV-1. Questi metodi sono utili per lo screening di nuove molecole e l'ottimizzazione del formato di quelle esistenti.

Abstract

Le terapie a piccoli RNA mirate alle fasi di post-integrazione nel ciclo di replicazione dell'HIV-1 sono tra i migliori candidati per la terapia genica e hanno il potenziale per essere utilizzate come terapie farmacologiche per l'infezione da HIV-1. Gli inibitori post-integrazione includono ribozimi, RNA a forcina corta (sh), piccoli RNA interferenti (si), RNA di interferenza U1 (U1i) e aptameri di RNA. Molti di questi sono stati identificati utilizzando saggi di co-trasfezione transitoria con un plasmide di espressione di HIV-1 e alcuni sono avanzati agli studi clinici. Oltre alle misure di efficacia, i piccoli RNA sono stati valutati per il loro potenziale di influenzare l'espressione degli RNA umani, alterare la crescita e/o la differenziazione cellulare e suscitare risposte immunitarie innate. Nei protocolli qui descritti, viene descritta una serie di saggi di trasfezione transitoria progettati per valutare l'efficacia e la tossicità delle molecole di RNA che mirano alle fasi post-integrazione nel ciclo di replicazione dell'HIV-1. Abbiamo utilizzato questi saggi per identificare nuovi ribozimi e ottimizzare il formato di shRNA e siRNA che hanno come bersaglio l'RNA dell'HIV-1. I metodi forniscono una serie rapida di saggi utili per lo screening di nuovi RNA anti-HIV-1 e potrebbero essere adattati per lo screening di altri inibitori post-integrazione della replicazione dell'HIV-1.

Introduzione

Una limitazione di corrente trattamenti HIV-1 è che devono essere somministrati cronicamente per prevenire la progressione della malattia. Trapianto di HIV-1 resistenti linfociti T, o cellule staminali ematopoietiche, ha il potenziale per fornire un controllo a lungo termine della replicazione dell'HIV-1 in assenza di terapia farmacologica ^1,2 e può anche essere un approccio efficace per raggiungere un HIV-1 cura ^3. Un modo per rendere le cellule resistenti alla replicazione dell'HIV-1 è quello di inserire uno o più geni che codificano per anti-HIV-1 RNA o peptidi nelle cellule di un individuo infetto durante un trapianto autologo ^4....