Sviluppo di un più sensibile e specifica Chromogenic Agar Media per la rilevazione di Parahaemolyticus Vibrio E Altro Vibrio Specie

Summary

Il rilevamento e l'isolamento di specie di Vibrio clinicamente rilevanti richiedono terreni di coltura selettivi e differenziali. Questo studio ha valutato la capacità di un nuovo mezzo cromogenico di rilevare e identificare V. parahaemolyticus e altre specie correlate. Il nuovo mezzo è risultato avere una migliore sensibilità e specificità rispetto al mezzo convenzionale.

Abstract

Infezioni di origine alimentare negli Stati Uniti causata da specie Vibrio hanno mostrato una tendenza al rialzo. Nel genere Vibrio, V. parahaemolyticus è responsabile per la maggior parte delle infezioni -associated Vibrio. Così, la differenziazione precisa tra Vibrio spp. e rilevazione di V. parahaemolyticus è di fondamentale importanza per garantire la sicurezza del nostro approvvigionamento alimentare. Sebbene le tecniche molecolari sono sempre più comuni, i metodi di coltura-base sono ancora regolarmente fatte e sono considerati metodi standard in determinate circostanze. Pertanto, un nuovo mezzo agar cromogeno è stato testato con l'obiettivo di fornire un metodo migliore per l'isolamento e la differenziazione di clinicamente rilevante spp Vibrio. Il protocollo rispetto al limite di sensibilità, specificità e rilevamento per il rilevamento di V. parahaemolyticus tra il nuovo terreno cromogeno e un mezzo convenzionale. Vari V. ceppi parahaemolyticus (n = 22) ripresentando diversi sierotipi e fonte di origine sono stati utilizzati. Essi sono stati precedentemente individuati dalla Food and Drug Administration (FDA) e Centri per il Controllo e la Prevenzione delle Malattie (CDC), e ulteriormente verificati nel nostro laboratorio da tlh -PCR. In almeno quattro prove separate, questi ceppi sono stati inoculati sui cromogenici agar e tiosolfato-citrato-biliari sali-saccarosio (TCBS) agar, che è il mezzo consigliato per la coltura di questa specie, seguita da incubazione a 35-37 ° C per 24 -96 ore. Tre V. ceppi parahaemolyticus (13,6%) non sono cresciuti in modo ottimale su TCBS, comunque esposti colonie verdi se non ci fosse la crescita. Due ceppi (9,1%) non ha dato i colonie ciano attesi sul agar cromogenico. V. non- ceppi parahaemolyticus (n = 32) sono stati testati per determinare la specificità del agar cromogenico. Tra questi ceppi, 31 non sono cresciuti o esposte altre morfologie di colonia. Il recupero medio di V. parahaemolyticus sul chromogenic agar era ~ 96,4% rispetto al agar soia trittico integrato con il 2% di NaCl. In conclusione, il nuovo agar cromogeno è un mezzo efficace per rilevare V. parahaemolyticus e per differenziarlo da altri vibrioni.

Introduction

In qualità di membro del genere Vibrio, V. parahaemolyticus è una curva, batterio a forma di bastoncello Gram-negativi, non sporigeni. Presenta elevata motilità sia in ambienti liquidi e semisolidi. La maggior parte V. ceppi parahaemolyticus non sono patogeni per l'uomo, ma i sottotipi patogeni hanno causato epidemie e pandemie, quindi questa specie è considerata un importante agente patogeno di origine alimentare in molti paesi ^1,2. L'incidenza di infezione da Vibrio negli Stati Uniti ha mostrato una tendenza al rialzo dal 2000 ^3. Tra Vibrio spp., V. parahaemolyticus è la sp....

Protocol

1. Media e coltura di ceppi microbici

NOTA: Utilizzare tecniche asettiche in tutti gli esperimenti. Utilizzare materiali sterili. Sterilizzare tutti i contenitori, strumenti e reagenti prima dell'uso. Autoclavare tutti i materiali di scarto prima dello smaltimento perché sono considerati a rischio biologico. la temperatura e il tempo Autoclave combinazione è ≥121 ° C x ≥15 min per tutte le seguenti procedure.

1. Per rendere ~ 1-L Tryptic Soy Agar (TSA), prima aggiungere 1 L di acqua deionizzata in una beuta 2-L contenente una ancoretta magnetica. Utilizzare un pallone che è almeno due volte più grande del volume finale. Aggiungere....

Results

In questo studio, 54 ceppi microbici sono stati assemblati, che comprendeva 22 ceppi all'interno V. Specie parahaemolyticus, altre 19 specie Vibrio, e 13 specie Vibrio non (Tabella 1). La maggior parte V. ceppi parahaemolyticus erano o ricevute da parte della FDA, CDC o altri dipartimenti sanitari statali. Essi rappresentano diversi sierotipi e fonti di isolamento. Questi ceppi sono stati precedentemente identificati .......

Discussion

Questo studio si concentra sullo sviluppo terreni di coltura e di valutazione. Convenzionalmente, TCBS è selettivo e differenziale mezzo utilizzato per l'isolamento e la rilevazione V. parahaemolyticus, V. cholerae e V. vulnificus ^12. Tuttavia, le limitazioni sono stati riportati per questo mezzo, come l'incapacità di differenziare V. cholerae da altre specie Vibrio. Il saccarosio e indicatore di pH sono gli agenti di differenziazione di TCBS. Così, la produzione di.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagent/Equipment
Agar	Fisher Scientific	DF0140-15-4	può utilizzare altre marche
Autoclave	Any
BHI powder	Fisher	Scientific DF0418-17-7	può utilizzare altre marche
Blender	Any		per frullare la carne di ostrica
Gas CampyGen generatore	Hardy Diagnostics	CN035A	per fornire un'atmosfera microaerofilica; può utilizzare altre marche
Piastre per agar al cioccolato	Hardy Diagnostics	E14	può utilizzare reagenti
PCR di altre marche comuni (dNTP, MgCl2, Taq Polimerasi)	Qualsiasi		o utilizzare perle PCR (Fisher Sci 46-001-014)
Provette per coltura	Fisher Scientific	S50712	può utilizzare altre marche
di provette Eppendorf	Fisher Scientific	S348903	può utilizzare altre marche
Gel doc	Qualsiasi
HardyChrom Vibrio piastre di agar	Hardy Diagnostics	G319	Questo studio valuta questo mezzo
Incubatrice	Qualsiasi
ansa di inoculazione	Fisher Scientific	22-363-606	In questo studio è stato utilizzato il formato da 10 microlitri
NaCl	Fisher Scientific	BP358-212	può utilizzare altre marche
Ostriche	Qualsiasi
PBS	Fisher Scientific	R23701	può utilizzare altre marche
Piastra di Petri	Fisher Scientific	FB0875713	può utilizzare altre marche
Pipetta e puntali	Qualsiasi		puntale sterilizzato
Primer per tlh	IDT Scala del DNA
	Qualsiasi
spalmatore	Fisher Scientific	08-100-11	Le perline possono essere utilizzate al loro posto
Frullatore Stomacher		400	I campioni sono stati omogeneizzati a 200 giri/min per 30 sec.  È possibile utilizzare altri omogeneizzatori.
Sacchetti filtro sterili per frullatori	Fisher Scientific	01-812-5
TCBS polvere	Hardy Diagnostics	265020	Questo studio valuta questo mezzo
Termociclatore	Qualsiasi
	Scientific	DF0370-07-5	può utilizzare altre marche
Cabina di visualizzazione UV	Qualsiasi		Emettere luce
Bagno d'acqua	Qualsiasi
Name	Sources	Numero di catalogo	Comments
Specie e ceppi batterici
Aeromonas hydrophila	ATCC
em>Candida albicans	ATCC
Campylobacter jejuni	ATCC
em>Escherichia coli	ATCC
em>Proteus mirabilis	ATCC
em>Pseudomonas aeruginosa	ATCC
em>Staphylococcus aureus	ATCC
Salmonella Choleraesuis	ATCC
em>Shigella boydii	ATCC
/em>	ATCC
>Shigella sonnei	ATCC
em>Vibrio alginolyticus	ATCC
V. cholerae (i sierotipi includono O139, O1, non O1, El Tor biovars)	FDA, ATCC
em>V. damsela	FDA
V. fisheri	Environment
V. fluvialis	CDC
V. furnissii	CDC
V. hollisae	FDA
V. metschnikovii	ATCC
em>V. mimicus	FDA
V. parahaemolyticus (i sierotipi includono O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8, ecc.)	ATCC, FDA, CDC, Ambiente
V. proteolyticus	FDA
V. vulnificus	FDA