Il seguente rapporto descrive come replicare il modello di roditore di neuropatia ottica ischemica anteriore non arteritica (rNAION), utilizzando i parametri appropriati di colorante, lenti a contatto e laser. Riveliamo anche i passaggi appropriati per valutare la lesione rNAION in vivo.
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Articolo metodologico
Il modello di roditore di nonarteritic Neuropatia ottica ischemica anteriore (rNAION)
In questo articolo
Sommario
Abstract
La neuropatia ottica ischemica anteriore non arteritica (NAION) è una lesione ischemica focale del nervo ottico che colpisce 1/700 individui per tutta la vita. NAION provoca edema del nervo ottico, perdita selettiva dei neuroni delle cellule gangliari retiniche (RGC) e atrofia del nervo ottico. È stato sviluppato un modello di roditore di NAION che esprime la maggior parte delle caratteristiche e delle sequele di NAION, applicabile sia ai ratti che ai topi. Questo modello utilizza un'applicazione laser focale di lunghezza d'onda di 532 nm per illuminare un colorante fotoattivo, il Rose Bengal (RB), per causare danni capillari e perdite al nervo ottico anteriore mirato (la regione laminare). Dopo l'induzione di rNAION, c'è un'ischemia precoce del nervo ottico, edema del nervo ottico e infiammazione intraneurale, seguiti da RGC selettiva e perdita assonale. Poiché il nervo ottico è un tratto della sostanza bianca del SNC, il modello rNAION è applicabile a studi meccanicistici di ischemia selettiva della sostanza bianca, nonché ad analisi neuroprotettive e meccanismi a breve e lungo termine della risposta gliale e neuronale all'ischemia.
Introduzione
Nonarteritic neuropatia ottica ischemica anteriore (NAION) è una lesione ischemica focale della porzione anteriore del nervo ottico (ON) 1. NAION è la causa più comune di improvvisa fibre nervose perdita della vista ottico in soggetti di età superiore a 50 2. Il meccanismo è ritenuta essere una sindrome vano che provoca edema intraneurale, e provoca la compressione dei capillari forniscono gli assoni nel nervo ottico 3.
Dal momento che l'ON è in realtà un tratto del sistema nervoso centrale (CNS), la NAION roditore modello (rNAION) può essere utilizzato per studiare i meccanismi e le risposte di isolat....
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Protocollo
Questo protocollo è stato approvato dalla University of Maryland Istituzionale Cura animali e del Comitato di utilizzo (IACUC, Baltimore, MD, USA)
1. set-up sperimentale
- Fare una lente a contatto personalizzato progettato da un grado ottico chiaro circolare 7 mm di diametro plexiglass, di 3 mm di spessore. Tagliare le lenti circolari con un trapano a colonna. Utilizzare una punta da trapano standard per rendere la curva interna, e, infine, lucidare le curve esterne ed interne usando una lucidatrice di lenti a contatto di grana ultrafine (1000/3000).
- Preparare 2,5 mM Rosa Bengala (RB) in pH 7,4 tampone fosfato salino (....
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Risultati
La visualizzazione lente a contatto abilitato centrale retina (Figura 1). Il punto laser focale illumina il disco ottico sul retro della retina (Figura 2). Il normale retina non-indotta è mostrato ripreso dalla lampada a fessura bio-microscopio (figura 3A) e SD-OCT (Figura 3B e 3C). Durante l'induzione laser, quando nessun colorante è presente nella circolazione, luce laser non comporta recipiente e fluorescenz.......
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Discussione
Mentre ci sono un certo numero di modelli di danno del nervo ottico (nervo ottico crush 12, ottico resezione del nervo 13, e PION 14), il modello rNAION è umano, adattabile a entrambi i ratti e topi. Assomiglia più da vicino le condizioni cliniche umana di NAION. Questa condizione include progressiva anteriore del nervo ottico edema, una sindrome ottico scompartimento del nervo anteriore, focale ischemia assonale, isolato retina cellule gangliari danno assonale e la perdita di più di un .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo i molti studenti e borsisti che hanno lavorato su questo modello per migliorarne l'efficacia, e per capire i suoi meccanismi. Un ringraziamento particolare va al dott del. Mary Johnson (University of Maryland-Baltimore), Nitza Goldenberg-Cohen (Schneiderman Childrens Hospital, Petah-Tikva, Israel), Charles Zhang (Einstein Medical College, Bronx, NY), e Valerie Touitou (Hopital Salpetrie, Parigi, Francia). Questo studio è stato finanziato in parte da RO1 EY015304 per SLB.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Laser da 50 mW 532 nm | Laser oftalmico standard | Iridex | |
| 0 - 100 mW Laser da 532 nm | Tecnologie | Sostituto di iridex | |
| Adattatore per lampada a fessura laser | Iridex | Adattatore accoppiato SMA Iridex | |
| Misuratore laser Fieldmate coerente con sensore a termopila | Coerente | anche altri | |
| Oftalmico Esame Lampada a fessura biomicroscopio | Vari | Haag-Streit è il migliore; versioni più economiche disponibili su ebay | |
| Rose Bengal | Sigma | 330000-1G | Agente fotoinduttore Fundus |
| Lente a contatto o vetrino coprioggetto | personalizzato/Cantor e Nissel (Regno Unito) | Lente in plastica planoconvessa progettata su misura per esame oculistico e induzione | |
| Tropicamide 1% | |||
| Composto lucidante | Tamiya Tamiya, INC | 87068 | lucidante lente a contatto |
| 2,5% ipromellosa (goniovisc)/1% meticellulosa | HUB Pharmaceuticals | di accoppiamento per lenti a contatto | |
| 2,5% neosinefrina Gocce oftalmiche | Alcon labs | dilatante della pupilla | |
| Tropicamide 1% | Alcon labs | agente dilatante della pupilla | |
| 0,5% proparacaina | Alcon labs | anestetico topico | |
| 30 G siringa da insulina con ago fuso | Vari | Vari per iniezione endovenosa di rosa bengala | |
| Unguento antibiotico oftamico con aggiunta di desametasone (triplo unguento antibiotico) | Vari | Vari | Applicare dopo l'induzione per ridurre al minimo le cicatrici corneali |
| Heidelberg Corporation Tomografo a coerenza ottica del dominio spettrale | Heidelberg Corporation | For Misure di coerenza ottica di base e post-induzione; non essenziale per l'induzione |
Riferimenti
- Banik, R. Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy: An Update on Demographics, Clinical Presentation, Pathophysiology, Animal Models, Prognosis, and Treatment. J. Clin. Experimental Ophthalmol. 10, 1-5 (2013).
- IONDT study group.
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Ristampe e permessi
