I metodi per esaminare le ghiandole linfatiche e ematociti concentrati in<em&gt; Drosophila</em&gt; Le larve

Theresa A. Reimels; Cathie M. Pfleger

doi:10.3791/54544

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Articolo metodologico

I metodi per esaminare le ghiandole linfatiche e ematociti concentrati in

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DOI:

10.3791/54544

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28 novembre 2016

Theresa A. Reimels¹^,² , Cathie M. Pfleger¹^,²

¹The Graduate School of Biomedical Sciences, The Icahn School of Medicine at Mount Sinai, ²Department of Oncological Sciences, The Icahn School of Medicine at Mount Sinai

In questo articolo

Sommario

Sistemi ematopoietiche mammiferi Drosophila e condividono molte caratteristiche comuni, rendendo Drosophila un modello genetico interessante per lo studio ematopoiesi. Qui mostriamo dissezione e montaggio del grande organo ematopoietico larvale per immunoistochimica. Descriviamo anche metodi per saggiare i vari compartimenti ematopoietici larvali tra emociti circolanti e le cellule di cristallo sessili.

Abstract

Molti paralleli esistenti tra i sistemi ematopoietiche mammiferi Drosophila e, anche se Drosophila manca il lignaggio linfoide che caratterizzano mammiferi immunità adattativa. Drosophila e mammiferi emopoiesi si verificano in spazialmente e temporalmente distinte fasi per la produzione di diverse linee cellulari del sangue. Entrambi i sistemi mantengono riserve di progenitori di cellule del sangue con il quale espandere o sostituire linee maturi. Il sistema ematopoietico permette Drosophila e mammiferi per rispondere e di adattarsi alle sfide del sistema immunitario. È importante sottolineare che i regolatori trascrizionali e vie di segnalazione che controllano la generazione, la manutenzione, e la funzione del sistema ematopoietico sono conservati dalle mosche ai mammiferi. Queste somiglianze consentono Drosophila da utilizzare per geneticamente modello di sviluppo ematopoietiche e la malattia.

Qui dettaglio test per esaminare il sistema ematopoietico di Drosophila larve. Inparticolare, si delineano i metodi per misurare il numero di cellule del sangue e la concentrazione, visualizzare una specifica stirpe maturo in vivo, ed eseguire immunoistochimica sulle cellule del sangue in circolazione e nell'organo ematopoietiche. Questi test possono rivelare cambiamenti nell'espressione genica e dei processi cellulari tra cui la segnalazione, la sopravvivenza, la proliferazione e la differenziazione e può essere utilizzato per indagare su una serie di domande riguardanti emopoiesi. In combinazione con gli strumenti genetici disponibili in Drosophila, questi test possono essere utilizzati per valutare il sistema ematopoietico su alterazioni genetiche definiti. Sebbene non specificamente qui delineato, questi saggi possono anche essere utilizzati per esaminare l'effetto di alterazioni ambientali, come infezioni o dieta, sul sistema ematopoietico.

Introduzione

I complessi meccanismi che regolano i fattori di trascrizione e vie di segnalazione che coordinano lo sviluppo del sistema ematopoietico e che malfunzionamento malattie ematologiche sono ancora poco chiare. Questi fattori di trascrizione e vie di segnalazione, così come la loro regolamentazione, sono altamente conservati tra Drosophila e mammiferi emopoiesi ^1-5. Così il sistema ematopoietico Drosophila rappresenta un ottimo modello genetico per definire i meccanismi molecolari che controllano l'emopoiesi e malattie ematologiche sottostanti.

Simile a mammiferi, Drosophila generare cellule del sangu....