Caratterizzazione di trasporto dell'elettrone attraverso biofilm vivente

Sommario

Un protocollo per la misurazione di conduttività elettrica di biofilm microbici viventi in condizioni fisiologicamente rilevanti è presentato.

Abstract

Qui dimostriamo che il metodo di gating elettrochimico utilizzato per caratterizzare la conduttività elettrica di biofilm microbici elettrodo-coltivate in condizioni fisiologicamente rilevanti. ¹ queste misurazioni vengono eseguite su biofilm vivente in mezzo acquoso utilizzando origine e scarico elettrodi modellati su una superficie di vetro in una configurazione specializzata indicata come un array di elettrodi interdigitating (IDA). Un biofilm è coltivato che si estende attraverso il gap che collega la fonte e scolo. I potenziali sono applicati agli elettrodi (E_S ed E_D) generando una corrente di fonte-scarico (I_SD) attraverso il biofilm tra gli elettrodi. La dipendenza della conducibilità elettrica sul potenziale del cancello (la media delle potenzialità di source e drain, E_G = [E_D + E_S] / 2) è determinata sistematicamente cambiando il cancello potenziale e misurando il conseguente drenaggio di origine corrente. La dipendenza della conducibilità sul cancello potenziale fornisce meccanicistici informazioni sul processo di trasporto extracellulare dell'elettrone sottostante la conduttività elettrica del biofilm specifico sotto inchiesta. Il metodo di misurazione gating elettrochimico qui descritto si basa direttamente su quello utilizzato dal M. S. Wrighton^2,3 e colleghi e R. W. Murray^4,5,6 e colleghi in il 1980 è indagare su polimeri conduttivi a film sottile.

Introduzione

Extracellulare di trasporto dell'elettrone (EET) è un processo che consente alcuni microrganismi per il trasporto di elettroni tra processi metabolici intracellulari e insolubile accettori o donatori che risiedono all'esterno della cella, che vanno da minerali naturali per elettrodi. In alcuni casi, EET consente microrganismi formare elettricamente conduttivo della multi-cellula spesse biofilm su superfici di elettrodo, in cui le cellule non a diretto contatto con l'elettrodo possono utilizzare ancora come un ricettore dell'elettrone metabolica o donatore. C'è un notevole interesse in tali biofilm come catalizzatori di elettrodo per varie applicazioni, come elettrosintesi microbica, rilevamento/rimozione di contaminanti e generazione di energia a distanza e stoccaggio,^{7,8,9 ,10,11,12,13,14} a causa della diversità dei processi metabolici, eseguita da microrganismi e la durevolezza di biofilm microbici rispetto a base di enzima bioelettrodi. ^{15 , 16} inoltre, EET vie possono potenzialmente essere utilizzate per modifiche elettricamente controllo o segnale di naturali o geneticamente microbici processi metabolici coinvolti, ad esempio, nella produzione di un prodotto desiderato o rilevamento di un analita o stimolo. La conduttività elettrica di elettrocatalitica biofilm, che li distingue da altri materiali biologici, è un aspetto centrale della loro proprietà elettrocatalitiche, ancora poco è capito circa il processo di EET fondo nell'ambiente dell'elettrodo, e ciò che è noto è fortemente contestata. ^{17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24}

Qui descritto è un metodo di 2 elettrodi per misurare la conducibilità attraverso biofilm living, elettrodo-coltivate utilizzando matrici interdigitating elettrodo (IDAs). IDAs consistono di elettrodi rettangolari paralleli modellati sulla superficie di vetro piano in modo tale che ogni altra band è collegata ai lati opposti della matrice risultante in 2 elettrodi (la fonte e scolo). L'esame attento di una IDA (Vedi ad esempio, la figura 6.12b di ref #1) rivela che il divario che separa le bande adiacenti è anche collegati in modo tale da formare un singolo spacco che intreccia avanti e indietro attraverso la matrice che separa i due elettrodi. Il risultato è un lungo e stretto che separa gli elettrodi di source e drain, ottenendo molto alta fonte-scarico correnti quando un materiale conduttivo è formato, il cast, polimerizzato o cresciuto (nel caso del tipo di biofilm considerato qui) la matrice. Inoltre, le piccole dimensioni degli elettrodi si traduce in piccolo sfondo corrente a causa della capacità di carica e di cambiare in stato di ossidazione del materiale conduttivo con cambio a cancello potenziale, poiché la quantità di materiale necessario per rendere la conducibilità le misurazioni con IDAs sono così piccole. La tecnica di base di IDA gating elettrochimico descritto qui, sviluppato per caratterizzare i polimeri conduttivi a film sottile,^2,3,4,25 solo recentemente è stata applicata ai sistemi viventi. ¹⁸ un'altra tecnica utilizzata per misurare la conducibilità dei biofilm vivente utilizzato un grande formato split elettrodi di source e drain e metri di origine per impostare la porta potenziali. ^{26 , 27} tuttavia, preoccupazioni per questi metodi sono state dettagliate in precedenza. ¹⁸

Incapsula il protocollo qui sotto la nostra esperienza con effettuare accurate misure di conduttività del vivere biofilm MCL Geobacter sulfurreducens e biocathode. G. sulfurreducens è un elettrodo di modello riducendo l'organismo in grado di utilizzare materiali insolubili, compresi gli elettrodi, come il ricettore dell'elettrone metabolica suola. Inoltre, forma biofilm spesse che sono in grado di trasportare elettroni su più celle di lunghezza, che lo rende un organismo modello ideale per studiare il trasferimento di elettroni a distanza extracellulare anodica. Includiamo anche dettagli per lo studio della biocathode MCL, un biofilm aerobica, autotrofi comunità mista isolato dal catodo di una cella a combustibile microbica bentonico. Biocathode MCL (così chiamato per i tre costituenti primari – Marinobacter, Chromatiaceaea e Labrenzia) è in grado di ossidanti un elettrodo come suo unico elettrone donatore e trasporto di elettroni su più celle di lunghezza, rendendo ha un interessante sistema di catodico per studiare. Inoltre, biocathode MCL ha la più alta conducibilità segnalata per un sistema vivente fino ad oggi utilizzando questi metodi. L'inclusione di questi biofilm elettroattivi diversificata in questo protocollo è destinato per evidenziare che questa tecnica è applicabile al trasporto di elettroni attraverso qualsiasi biofilm vivente in grado di interagire elettricamente con elettrodi di misura.

Protocollo

1. preparazione di interdigitating microelettrodo matrice (IDA)

1. Ottenere IDA commercialmente disponibile elettrodi modellati su un substrato non conduttivo o sintetizzarli utilizzando metodi standard litografici. ²⁸
   Nota: IDA dimensioni e/o materiali possono essere variate sulla base desiderate condizioni per diversi esperimenti. IDAs qui utilizzati sono stati ottenuti in commercio e consisteva di due interdigitating microelettrodo oro modellato su un substrato di vetro collegato ad elettrodi grandi alle estremità opposte della matrice. Gli elettrodi sono esposti mentre le linee di autobus collegamento degli elettrodi per le grandi pastiglie di contatto sono rivestite con materiale isolante sottile. IDAs utilizzati qui sono costituiti da due set di 10 bande di lunga oro microelettrodo µm-wide e 2 mm (source e drain) distanziati di 5 µm apart modellato su una superficie di vetro piano. IDAs utilizzato qui aveva 65 paia di elettrodi (130 totale interdigitating bande). Alternanza di fasce è collegati ad elettrodi alle estremità opposte della matrice.
2. Filo e isolare IDA
   1. Collegare un cavo per ogni pad elettrodo grande utilizzando resina epossidica conduttrice d'argento.
      1. Preparare la resina epossidica conduttrice secondo le istruzioni del produttore per la resina epossidica specifica in uso con una punta di asta o pipetta miscelazione (istruzioni possono variare dal produttore).
      2. Posizionare un filo su ogni pad oro, sicuro in posizione con del nastro di laboratorio. Coprire il filo e il pad con epossidica argento usando una punta di asta o pipetta di miscelazione.
      3. Muovere con cautela per un forno a 80 ° C per 1 h a cura o cura sulla base delle raccomandazioni del produttore per l'epossidica argento conduttiva specifica utilizzato.
      4. Dopo la resina epossidica cure, è possibile utilizzare un multimetro per garantire connettività elettrica tra la fine del filo e le pastiglie. La resistenza tra il filo e il tampone dovrebbe essere < 5 Ω. Inoltre, è possibile utilizzare il multimetro per verificare che nessun epossidico conduttivo è connessione elettrodi multipli, come questo può breve la matrice. Se la resina epossidica conduttrice è più cavi di collegamento, utilizzare un graffietto per isolare i cavi.
   2. Isolare la connessione epoxied rivestendo la connessione con una termica, elettrica e impermeabile materiale isolante. Ritardante di fiamma resine poliuretaniche sono spesso adatte.
      1. Rimuovere la punta di una provetta conica per centrifuga 15 mL (a circa il marchio di 2,5 mL) come uno stampo per il materiale isolante. Fare due piccoli fori nella parte inferiore per i cavi a sporgere attraverso l'utilizzo di un ago 21G.
      2. Inserire l'IDA il fili attraverso i fori nella parte inferiore della muffa e della muffa.
      3. Preparare il materiale isolante specifico. Seguire le istruzioni fornite con la resina specifica ottenuta.
      4. Pipettare l'isolante nello stampo in modo che la resina epossidica argento è completamente coperto (~2.5 mL) e lasciare per asciugare secondo le specifiche del produttore.

2. elettrochimica reattore installazione, collaudo e inoculazione

1. Impostare la cella elettrochimica.
   1. Inserire la cella elettrochimica IDA, controelettrodo ed elettrodo di riferimento.
      Nota: Il reattore elettrochimico utilizzato può variare notevolmente, fino a quando tutti gli elettrodi forma all'interno. Una considerazione è che l'elettrodo di riferimento dovrebbe essere più vicino possibile all'elettrodo di lavoro dato i limiti pratici del reattore. Qui, usiamo un reattore monocamera con il riferimento dell'elettrodo ~ 2-3 cm dagli elettrodi di lavoro. Inoltre, l'elettrodo contatore deve essere più grande l'elettrodo di lavoro per garantire che non è limitante nel sistema.
   2. Se si lavora con una coltura pura, sterilizzare il reattore con il controelettrodo all'interno. Sterilizzare l'elettrodo di riferimento in ammollo nella candeggina per 10 min e acqua deionizzata sterile per 10 min. sterilizzare l'IDA mediante immersione in candeggina per 5 s seguita da acqua deionizzata sterile per 10 s prima dell'inserimento nel reattore.
   3. Riempire la cella elettrochimica con mezzo sterile adatto per la crescita di biofilm. Per g. sulfurreducens^17,18, usare acqua dolce mezzo escluse fumarato. Per biocathode MCL,⁹ usare mezzo artificiale con acqua di mare. ⁹
   4. Collegare gli elettrodi di un bipotentiostat. Collegare un elettrodo di IDA al cavo del lavoro 1, l'altro elettrodo IDA al cavo del lavoro 2, l'elettrodo di riferimento per la Guida di riferimento e il controelettrodo al cavo del contatore.
2. Test elettrochimici di IDAs.
   Nota: L'obiettivo principale di questo test è quello di assicurarsi che i due elettrodi sono separati galvanicamente. Tutte le tecniche elettrochimiche sono disponibili nel software utilizzato per controllare il bipotentiostat.
   1. Eseguire test di conducibilità di controllo (prima crescita di biofilm) per garantire il corretto funzionamento di IDA utilizzando un bipotentiostat.
      1. Misura il potenziale del circuito aperto di ciascun elettrodo per 1 min.
         Nota: Su alcuni strumenti, circuito aperto potenziale deve essere raggiunto utilizzando il programma di raccolta di galvanostatici e impostazione della corrente a 0 mA.
      2. Misura il potenziale del circuito aperto di elettrodo 2 durante l'esecuzione di voltammetria ciclica sull'elettrodo 1 tra + 0,2 V a + 0,6 V (vs lei) a 20 mV/s.
         Nota: Altri limiti e la frequenza delle analisi per CV può essere utilizzato se lo si desidera. Tuttavia, evitare potenziali che comporterà la generazione di idrogeno o ossigeno.
      3. Verificare che il circuito aperto potenziali misurato a elettrodo 2 non rispecchiano il potenziale dell'elettrodo 1 durante il CV usando il software potenziostato.
         Nota: Il potenziale del circuito aperto di elettrodo 2 può cambiare, ma dovrebbe essere indipendente del potenziale di elettrodo 1.
      4. Ripetere i passaggi da 2.2.1.1 attraverso 2.2.1.3 tranne controllo il potenziale di elettrodo 2 e misura il potenziale del circuito aperto dell'elettrodo 1.
   2. Impostare il potenziale di elettrodi di lavoro il potenziale di crescita desiderata del biofilm elettroattivi pertinenti utilizzando il software bipotentiostat. Ad esempio, è possibile utilizzare + 0.5 V (vs lei) per Geobacter sulfurreducens o +0.31 V (vs lei) per biocathode MCL.
3. Crescere pertinenti elettroattivi biofilm
   1. Inoculare il reattore elettrochimico da un magazzino cultura/arricchimento dei microrganismi elettrochimicamente attivi desiderati utilizzando le tecniche microbiologiche asettiche standard. Per prove standard, inoculare in un 01:20 rapporto (inoculo al volume del reattore) di un OD₆₀₀ = 0,5 cultura.
   2. Impostare l'agitazione nel reattore al livello desiderato (~ 200 giri/min) e l'incubatore / bagno di acqua alla temperatura desiderata in base alle condizioni di crescita del biofilm di interesse. Per g. sulfurreducens, utilizzare 30 ° C per una crescita ottimale.
   3. Incubare il sistema in base a specifici requisiti di microorganism(s) di interesse finché il biofilm colma il divario che separa i due elettrodi. Per stazionario biofilm g. sulfurreducens , incubare per ~ 7-10 giorni. Per biocathode MCL, incubare ~ 7 giorni. In ogni caso, controllare la temperatura a 30 ° C.

3. elettrochimici esperimenti gating

1. Selezionare i parametri sperimentali che verranno utilizzati per determinare la dipendenza di corrente-potenziale per le misurazioni di Gate.
   1. Determinare la portata dei potenziali di cancello che verrà applicato per l'IDA per ottenere la corrente condotta (I_SD) contro curva (E_G) potenziale di cancello per il sistema.
      Nota: La gamma dei potenziali cancello esaminato dovrebbe coprire tutti i potenziali con attività redox possibile. Se nessuna informazione circa il sistema di interesse è disponibile, una gamma ampia potenziale dovrebbe essere usato (-da 0,55 a + 0,6 V vs lei). Un approccio di prova ed errore può essere utilizzato per mettere a punto la gamma basata sul sistema oggetto di studio. Cancello di potenziale è definita come:
      
      dove E_D è il potenziale dell'elettrodo scarico ed E_S è il potenziale dell'elettrodo di origine. La gamma dei potenziali cancello utilizzato è vincolata dai requisiti e limitazioni del sistema specifico di interesse. ¹⁸
      Nota: Source e drain potenziali che si tradurrà in evoluzione di ossigeno e idrogeno dovrebbero essere evitati come questi processi possono danneggiare il biofilm.
   2. Determinare la tensione di fonte-drain (V_SD) che verrà utilizzata come forza motrice per trasporto di elettroni attraverso la pellicola dall'origine allo scarico. Tensione drain-source è definito come:
      
      Nota: La tensione di fonte-scarico deve essere sufficientemente piccola affinché I_SD scalabilità lineare con V_SD. ¹⁷
   3. Scegliere una velocità di scansione (v) a cui E_G viene modificato linearmente con il tempo che è indipendente i_SD in modo che il sistema può essere approssimato per essere allo stato stazionario per ogni cancello potenziale.
      Nota: Una velocità di scansione di inferiore a 0,002 V/s viene spesso utilizzata per sistemi biologici. ^{29 , 30}
   4. Impostare il software bipotentiostat per eseguire le misurazioni Gate (cioè spazzare il cancello potenziali) sopra l'intervallo selezionato, alla tensione selezionato origine-scarico e alla velocità di scansione desiderata basato sulle considerazioni di cui sopra.
      Nota: per le misurazioni Gate precedente con g. sulfurreducens,^17,19 E_G =-da 0,55 V a 0,6 V (vs lei), V_SD = 0.01 V o 0,1 V, v = 0.001 V/s. Per Biocathode MCL, E_G = 0.25 V a 0.7 V (vs lei), V_SD = 0,002 V, v = 0.0002 V/s.
      1. Inoltre, eseguire una misurazione di base con V_SD = 0.000 V (cioè, un CV a ciascun elettrodo individuo effettuato simultaneamente) al v stesso scelto nel passaggio 3.1.3.
   5. Eseguire misurazioni Gate utilizzando le condizioni in 3.1.4 sotto entrambi fatturato (con donatore dell'elettrone solubile o accettore presente) e non-fatturato (senza solubile elettrone donatore o accettore).
      Nota: Non fatturato condizioni sono vantaggiose perché misurazioni non disturbino l'ossidazione o la riduzione dei composti solubili per il metabolismo cellulare, anche se risultati simili dovrebbero essere ottenuti indipendentemente da quale condizione viene utilizzata dopo sottraendo le correnti di fondo (dettagliate in 3.1.8).
      1. Ottenere condizioni di fatturato utilizzando lo stesso mezzo di reattore come quello usato per la crescita batterica sull'elettrodo. Questa sostanza contiene un donatore di elettroni solubili, quali acetato per g. sulfurreducens,¹⁷ o accettore, come l'ossigeno per Biocathode MCL.
      2. Ottenere condizioni di non-fatturato facendo lo stesso mezzo di reattore utilizzato per la crescita batterica sull'elettrodo, salvo omettere il donatore dell'elettrone solubile o accettore. Dopo aver verificato che il potenziostato è spento, rimuovere asetticamente il mezzo e aggiungere in mezzo fresco senza il donatore dell'elettrone per sistemi anodiche o accettore per sistemi catodica. In alternativa, può istituire un sistema a flusso continuo per sostituire lentamente il mezzo con il mezzo desiderato per nonturnover condizioni.
         Nota: Se l'ossigeno è l'accettore di elettroni solubile (per quanto riguarda biocathode MCL), sparge il sistema con una miscela di ~ 15% CO₂ e 85% N₂ (o una miscela di gas che manterrà il pH corretto nel mezzo).
   6. Dopo il completamento delle misurazioni Gate, è possibile utilizzare il software potenziostato per impostare il potenziale di ciascun elettrodo torna alla crescita potenziale per consentire al sistema di ri-stabilizzare (utilizzando gli stessi valori 2.2.2).
   7. Se sono soddisfatte tutte le condizioni sopra descritte (I_SD è indipendente di v e scalabilità lineare con V_SD), convertire I valori_SD conducibilità utilizzando le seguenti equazioni come descritto in precedenza³¹
      
      
   8. dove G è la conduttanza e S è un fattore di scala che dipende dal sistema e fattori variabili come la dimensione degli elettrodi, spaziatura e altezza del biofilm. Per alcuni sistemi, S può essere determinato dalle equazioni predeterminati. ³¹ in alternativa, S può essere calcolata numericamente utilizzando un software di modellazione, come descritto in precedenza. ¹⁷
   9. Sottrarre le correnti di fondo per identificare la forma e la grandezza della condotta corrente. O sottrarre la corrente generata a V_SD = 0.00 V dalla corrente generata a V_SD = 0,01 V o sottrarre lo scolo corrente dall'origine corrente generato con una V_SD = 0,01 V. entrambi metodo rimuove correnti di fondo, lasciando solo l'attuale condotta.
2. Misure di gating elettrochimiche dipendente dalla temperatura
   1. Determinare l'intervallo di temperature di interesse. Questa gamma è altamente dipende dal sistema in fase di studio, tuttavia fisiologicamente rilevanti temperature devono essere utilizzate.
      Nota: Gli studi precedenti hanno usato una gamma di temperatura di 10 ° C a 30 ° C per lo studio di trasporto dell'elettrone in condizioni fisiologicamente rilevanti per i microrganismi mesofili. ¹⁷
   2. Ottenere un ricircolo bagnomaria o dall'incubatore per regolare la temperatura del reattore e un reattore di controllo per garantire che il set point e la temperatura effettiva del mezzo è lo stesso.
      1. Inserire un termometro o la termocoppia in un reattore di controllo dove sarebbe l'IDA.
   3. Io fare misurazioni di_SD (vedere 3.1.4) sopra la gamma di temperature selezionate sotto fatturato e nonturnover (descritto al punto 3.1.5) condizioni utilizzando il bipotentiostat seguendo una delle due procedure descritte di seguito.
      1. Generare I_SD contro le curve E_G , come descritto in precedenza (Vedi 3.1), per ogni temperatura sopra la gamma di temperature di interesse. Per i materiali che esibiscono conducibilità redox, come g. sulfurreducens e Biocathode MCL, la corrente di picco da ogni temperatura viene utilizzato per determinare I_SD vs dipendenza da T.
         Nota: Questo metodo è utilizzato per generare un completo ho_SD vs E_G curva per ogni temperatura, ma richiede più tempo che la seconda opzione.
      2. In alternativa, impostare e tenere premuto l'IDA al cancello potenziale che produce massimo condotto corrente utilizzando il bipotentiostat (ottenuti da I_SD curva di vs E_G , punto 3.1.4) e registrare la massima corrente condotta utilizzando il bipotentiostat mentre la temperatura è in bici tra la gamma di temperature selezionato mediante i comandi a bordo del bagnomaria o dall'incubatore.
         Nota: con la geometria dell'elettrodo/reattore utilizzata qui, I_SD e T sono autorizzati a stabilizzare per almeno 20 min e una media stabile ho_SD viene utilizzato per ogni temperatura. Più o meno tempo di stabilizzazione può essere richiesto sulla base del sistema specifico. Questo metodo è più veloce rispetto alla prima e provoca meno stress per il biofilm. Tuttavia, non vengono generate curve piene di Gate.
      3. La temperatura del ciclo da un set point a altro e viceversa utilizzando nuovamente i controlli a bordo di incubatore o bagnomaria per determinare la reversibilità della reazione per garantire che la temperatura in bicicletta non danneggia il biofilm.
   4. Ripristinare la temperatura la temperatura di crescita normale utilizzando i controlli a bordo dell'incubatore o bagnomaria e consentire al sistema di stabilizzare.
      Nota: Per un conduttore di redox, la_SD rispetto a dati di 1/T posso essere misura con l'espressione tasso di Arrhenius, che permette il calcolo dell'energia di attivazione come segue:
      
      
      dove E_una è l'energia di attivazione per il trasferimento di elettroni tra cofattori redox adiacente e k è la costante di Boltzmann.

Risultati

IDAs erano cablata, isolate e testate per garantire che i due elettrodi erano elettricamente isolati da altro (Figura 1). Reattori sono stati assemblati, inoculati con g. sulfurreducense incubate fino a quando un biofilm colmato il divario tra gli elettrodi. Il biofilm di g. sulfurreducens può essere visto visivamente per coprire la matrice. Altri biofilm possono richiedere al ricercatore di fare un gating misure elettrochimiche per vedere s...

Discussione

Durante l'installazione di IDA, è fondamentale per verificare che l'origine e lo scarico non sono corto insieme prima misure elettrochimiche di Gate, come questo altererà I_SD vs curva E_G e potrebbe portare a interpretazioni e risultati errati. È anche fondamentale per selezionare V_SD e v tale che la corrente è linearmente dipendente da V_SD e indipendente di v. Se questo non è il caso, le equazioni descritte sopra non possono essere utilizzate per calcolare la conduttività.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
IDAs	CH Instruments	012125	Prodotto da ALS-Japan; venduto da CH Instruments
	Filo Digikey	W7-ND
Argento conduttivo epossidico	Microscopia elettronica scienze 12670-EE
Materiale isolante	3M	2131-B	Composto ritardante di fiamma Scotchast
15 mL provetta da centrifuga conica	VWR	89004-368
ago da 21 g	VWR	BD-305165
puntali per pipette da 5 mL	VWR	82018-842
pipettatore da 5 mL	VWR	89079-976
Componenti del mezzo d'acqua dolce	Sigma Aldrich	Tutti i prodotti chimici
Cloruro
Sodio fosfato monobasico
Bicarbonato
Componenti medi artificiali per acqua di mare	Sigma Aldrich	Tutti i prodotti chimici
Cloruro di
Cloruro di magnesio esaidrato
Solfato di magnesio eptaidrato
Cloruro di
Bicarbonato
Cloruro di calcio diidrato
Cloruro
Elettrodo
	Basi	MF-2079
Controelettrodo a barre in grafite	Microscopia elettronica	scienze 70230
Bagno d'acqua a ricircolo	Thermo Scientific	152-5256
Bipotenziostato	Pine Instruments	WD-20	http://www.voltammetry.net/pine/aftermath/user
Ancorette	VWR	58947-114
G. sulfurreducens coltura	ATCC	51573
Reattore incamiciato	Pine Instruments	RRPG085