Descriviamo un protocollo per indurre gratificante e nonrewarding esperienze nei moscerini della frutta (Drosophila melanogaster) utilizzando il consumo di etanolo volontaria come misura per le modifiche negli stati di ricompensa.
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Articolo metodologico
Un modo semplice per misurare alterazioni in ricompensa il comportamento di ricerca Utilizzando
In questo articolo
Sommario
Abstract
Descriviamo un protocollo per misurare l'etanolo autosomministrazione nei moscerini della frutta (Drosophila melanogaster) come proxy per i cambiamenti negli stati di ricompensa. Dimostriamo un modo semplice per sfruttare il sistema di ricompensa volo, modificare le esperienze legate alla ricompensa naturale, e utilizzare consumo di etanolo volontaria come misura per le modifiche negli stati di ricompensa. L'approccio è uno strumento rilevante per studiare i neuroni e geni che svolgono un ruolo nella esperienza cambia-mediata di stato interno. Il protocollo si compone di due parti distinte: esporre le mosche di esperienze gratificanti e nonrewarding, e analizzando il consumo di etanolo volontariato come una misura della motivazione per ottenere un premio di droga. Le due parti possono essere usati indipendentemente per indurre la modulazione di esperienza come primo passo per ulteriori analisi a valle o come dosaggio alimentazione due scelta indipendenti, rispettivamente. Il protocollo non richiede una configurazione complessa e quindi può essere applicato in qualsiasi laboratory con strumenti di base della cultura mosca.
Introduzione
Modifica del comportamento in risposta alle esperienze permette animali di regolare il loro comportamento ai cambiamenti nel loro ambiente 1. Durante questo processo, gli animali integrano il loro stato fisiologico interno con mutevoli condizioni dell'ambiente esterno e successivamente scegliere un'azione piuttosto che un altro per aumentare le loro possibilità di sopravvivenza e la riproduzione. Sistemi di ricompensa si sono evoluti per motivare i comportamenti che sono necessari per la sopravvivenza di individui e di specie rafforzando i comportamenti che aumentano la sopravvivenza immediata, come mangiare o bere, o quelli che garantiscono la sop....
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Protocollo
Nota: panoramica generale del disegno sperimentale: Il disegno sperimentale prevede un protocollo adattato per la soppressione corteggiamento 7-9 in cui le mosche di sesso maschile sono esposti a esperienze gratificanti e nonrewarding in 3 allenamenti consecutivi nel corso di 4 d. Al termine della fase di esperienza, le mosche sono testati in un saggio di consumo di etanolo volontaria due scelta per 3 - 4 d. Il protocollo include qui diverse fasi preparatorie, alcune delle quali possono essere fatte in anticipo per essere utilizzato in più di un esperimento, mentre altri dovrebbero avvenire tempestivamente prima dell'inizio dell'esperimento (Tabella 1).
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Risultati
FPreviously, Devineni et al. hanno dimostrato che quando i moscerini della frutta sono dati la scelta di consumare cibo contenente etanolo, mostrano una forte preferenza per il cibo contenente etanolo sopra nonethanol contenente cibo 6. Indicato qui ci sono alcuni risultati rappresentativi si ottengono quando saggiare la preferenza etanolo innata di mosche maschio ingenua che non ha subito il protocollo di allenamento.
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Discussione
Qui, illustriamo i dettagli di un approccio integrato per misurare le alterazioni nel comportamento di ricerca della ricompensa, sulla base di precedenti lavori descritti da Devineni et al.6 e Shohat-Ophir et al5. La prima sezione del protocollo utilizza diversi tipi di interazioni sessuali come input dell'esperienza, mentre la seconda sezione utilizza un test di alimentazione a due scelte per valutare l'effetto dell'esperienza sulla preferenza di consumare etanolo.
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo U. Heberlein e A. Devineni per le discussioni di lunga durata e consulenza tecnica. Ringraziamo anche i membri del laboratorio Shohat-Ophir, A. Benzur, L. Kazaz, e O. Shalom, per l'aiuto di dimostrare il metodo. apprezzamento speciale va a Eliezer Costi per stabilire i sistemi di mosca in laboratorio. Questo lavoro è stato sostenuto dalla Israel Science Foundation (384/14) e le Marie Curie Career Integration Grants (CIG 631.127).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Polistirene 25 x 95 mm | Fiale FlyStuff | 32-109 | |
| Flaconi in plastica stretta FlyStuff | 42-102 | ||
| Ago sterile monouso 18 G e 27 G | può essere acquistato da qualsiasi azienda | 1,20 X 38 mm (18 G x 1 1/2"), 0,40 X 13 mm (27 G x 1/2") | |
| 10 x 75 mm Tubi di coltura monouso in vetro borosilicato kimble | chase | 73500-1075 | |
| pipette calibrate 5 μ L | VWR | 53432-706 | codice colore bianco per contenere 5 μ L |
| Olio minerale | Sigma-Aldrich | M5904 | |
| saccarosio, grado di biologia molecolare | CALBIOCHEM | 573113 | |
| estratto di lievito in polvere per microbiologia | può essere acquistato da qualsiasi azienda | ||
| Etanolo | Sigma-Aldrich | 32221 | |
| pipetta standard Puntali (micro-pipette) | ThermScientific | T114R-Q | volume: 0,1 - 20 μ L (ultramicro) |
| IDENTI-PLUGS (tappi per tubi in schiuma) | Jaece | L800-A | per aperture da 6 a 13 mm |
| IDENTI-PLUGS (tappi per tubi in schiuma) | Jaece | L800-D | 35 a 45 mm |
| virginator fly stock | bloomington drosophila stock center | #24638 | |
| Fiale strette, confezione vassoio (PS) | Genesee Scientific Corporation | # 32-109BR | |
| Drosophila Media Ricette e metodi | Bloomington Drosophila Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm | |
| acido propionico | Sigma-Aldrich | P5561 | |
| acido fosforico | Sigma-Aldrich | ||
| Methl 4-idrossibenzoato | Sigma-Aldrich | H3647 | |
| Agar Agar | può essere acquistato da qualsiasi azienda | ||
| mais | può essere acquistato da qualsiasi azienda | ||
| Melassa della nonna | B& G Foods, Inc | non indicato che | |
| lievito secco istantaneo | può essere acquistato da qualsiasi azienda |
Riferimenti
- Robinson, G. E., Fernald, R. D., Clayton, D. F. Genes and social behavior. Science. 322, 896-900 (2008).
- Koob, G. F. Neurobiological substrates for the dark side of compulsivity in addiction. Neuropharmacol. 56, Suppl 1 18-31 (2009).
- Kaun, K. R., Devineni, A. V., Heberlein, U.
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Ristampe e permessi
