Immagini dal vivo per studiare Microtubulo instabilità dinamica nei tumori al seno taxani resistente

Richard Wang; Harris Wang; Zhixiang Wang

doi:10.3791/55027

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Articolo metodologico

Immagini dal vivo per studiare Microtubulo instabilità dinamica nei tumori al seno taxani resistente

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DOI:

10.3791/55027

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20 febbraio 2017

Richard Wang¹ , Harris Wang¹ , Zhixiang Wang¹

¹Department of Medical Genetics, Signal Transduction Research Group, Faculty of Medicine and Dentistry, University of Alberta

In questo articolo

Sommario

In questo articolo, riportiamo un protocollo che descrive un metodo in vivo per misurare l'instabilità dinamica dei microtubuli nelle cellule di carcinoma mammario resistenti al docetaxel (MCF-7_TXT). In questo metodo, viene utilizzato un sistema di imaging al microscopio a deconvoluzione per rilevare l'espressione della GFP-tubulina nelle cellule bersaglio.

Abstract

I taxani come il docetaxel appartengono a un gruppo di agenti mirati ai microtubuli (MTA) che sono comunemente utilizzati per trattare il cancro. Tuttavia, la resistenza ai taxani nelle cellule cancerose riduce drasticamente l'efficacia dell'uso a lungo termine dei farmaci. L'evidenza accumulata suggerisce che i meccanismi alla base della resistenza ai taxani includono sia meccanismi generali, come lo sviluppo di resistenza multifarmaco dovuta alla sovraespressione delle proteine di efflusso dei farmaci, sia meccanismi taxano-specifici, come quelli che coinvolgono la dinamica dei microtubuli.

Poiché i taxani prendono di mira i microtubuli cellulari, misurare l'instabilità dinamica dei microtubuli è un passo importante per determinare i meccanismi di resistenza ai taxani e fornisce informazioni su come superare questa resistenza. Nell'esperimento, è stato utilizzato un metodo in vivo per misurare l'instabilità dinamica dei microtubuli. La α-tubulina marcata con GFP è stata espressa e incorporata nei microtubuli nelle cellule MCF-7, consentendo la registrazione della dinamica dei microtubuli mediante time lapse utilizzando una fotocamera sensibile. I risultati hanno mostrato che, a differenza delle cellule_CC MCF-7 parentali non resistenti, la dinamica dei microtubuli delle cellule_TXT MCF-7 resistenti al docetaxel è insensibile al trattamento con docetaxel, che causa la resistenza all'arresto mitotico e all'apoptosi indotti dal docetaxel. Questo articolo illustrerà questo metodo in vivo per misurare l'instabilità dinamica dei microtubuli.

Introduzione

La principale causa di mortalità per cancro al seno è attraverso le metastasi ^{^1,} ^2. Taxani, come docetaxel e paclitaxel, sono attualmente utilizzati come prima linea di regimi nel trattamento del carcinoma mammario metastatico ^{^2,} ^{^3,} ^{^4,} ^{^5,} ^6. Fanno parte di un gruppo di agenti microtubuli-targeting (MTA) che interrompono la dinamica dei microtubuli. Tuttavia, una delle più grandi sfide di utilizzare taxani nella terapia curativa è lo sviluppo ....